Naslov
Aktivnost i strukturna dinamika mutiranih oblika alkalne fosfataze iz bakterije Eschericha coli
(Activity and Structural Dynamics of Mutant Forms of Alkaline Phosphatase from Escherichia .coli)

Autori
Pralija, Anka

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet Split

Mjesto
Split

Datum
20.12

Godina
2012

Stranica
54

Mentor
Orhanović, Stjepan

Ključne riječi
alkalna fosfataza, konformacijske promjene, asimetrija enzima, dinamika proteina, interakcije podjedinica, fosforescencija
(alkaline phosphatase, conformation changes, enzyme asymmetry, protein dynamics, subunit interface, phosphorescence)

Sažetak
Iako kristalizira kao simetričan enzim, alkalna fosfataza iz bakterijeEscherichia coli pokazuje odstupanje od Michaelis – Menten kinetike koja može opisati samo model dimernog enzima s nejednakim podjedinicama. Doprinos interakcija na sučelju podjedinica katalitičkom mehanizmu i uloga β-nabranog lista koji se proteže područjem aktivnog mjesta sve do sučelja podjedinica ispitani su točkastom mutagenezom. Zamijenjene su polarne aminokiseline nepolarnim (T81A i T81A/Q83L) čime je onemogućeno stvaranje vodikovih veza koje povezuju susjedne β-nabrane listove. Uvedene mutacije imale su značajan utjecaj na kinetička svojstva i strukturnu stabilnost enzima [S. Orhanović et al., Int. J. Biol.Macromol. 40 (2006) 54-58]. Mjerenjem poluvremena gašenja fosforescencije (τ) i aktivnosti enzima u ovisnosti o temperaturi (20 do 50 ⁰C) i u određenom vremenskom razdoblju, ispitan je utjecaj navedenih mutacija na strukturu i funkciju proteina. Mutanta alkalne fosfataze, T81A/Q83L, pokazuje povećanu krutost mikrookoline Trp109 u odnosu na T81A mutantu. Moguće objašnjenje je da je uvođenje druge nepolarne aminokiseline omogućilo gušće pakovanje hidrofobne unutrašnjosti. Porastom temperature više se smanjuje krutost strukturno nestabilnijeg enzima T81A/Q83L a smanjenje krutosti praćeno je i bržim porastom aktivnosti. Porast aktivnosti do kojeg dolazi tijekom pohrane na 4 ºC u oba mutirana enzima, uz opadanje poluvremena gašenja fosforescencije, može se objasniti preraspodjelom iona Zn2+ i Mg2+ u aktivnom mjestu i s tom migracijom povezanom promjenom konformacije.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija

POVEZANOST RADA