Naslov
Konstrukcija i ekspresija mutiranih inačica gena SCW4 kvasca Saccharomyces cerevisiae
(Construction and expression of mutated variants of the Saccharomyces cerevisiae yeast SCW4 gene)

Autori
Damjanović, Anja

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, preddiplomski

Fakultet
Prehrambeno- biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
10.09

Godina
2018

Stranica
31

Mentor
Teparić, Renata

Ključne riječi
PCR, Saccharomyces cerevisiae, Scw4, stanična stijenka
(Cell wall, PCR, Saccharomyces cerevisiae, Scw4)

Sažetak
Protein Scw4 veže se kovalentno i nekovalentno na staničnu stjenku kvasca Saccharomyces cerevisiae, no nije poznato na koji se način kovalentno veže. U potrazi za regijom potencijalno odgovornom za vezanje napravljena je delecijska analiza gena SCW4. Mutacije u konstruktima uvodene su pomoću PCR-a metodom megapočetnice koristeći plazmid pBG1805 SCW4 kao DNA kalup. U ovom radu napravljena su i ispitana dva delecijska konstrukta, Δ202SCW4 i Δ231SCW4, u kojima su deletirani dijelovi gena koji kodiraju za dio sekvence proteina od signalne sekvence do 202.-og, odnosno 231.-og aminokiselinskog ostatka. Konstrukti su ligirani u kvaščev plazmidni vektor YEp351 te su dobivenim plazmidima transformirane stanice kvasca. Kvasci su uzgajani u selektivnoj podlozi za uzgoj u uvjetima indukcije GAL1 promotora s obzirom da na to da GAL1 promotor na plazmidu YEp351 kontrolira ekspresiju mutiranih inačica SCW4 gena. Nakon uzgoja provedena je izolacija proteina stanične stijenke, proteini su razdvojeni u gelu SDS-elektroforezom po Laemmli-u te je pomoću Western blot metode potvrđena ekspresija i nekovalentno vezanje mutiranog Scw4 proteina na staničnu stijenku kvasca.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA