Naslov
Konstrukcija plazmidnog vektora za transformaciju kvasca Pichia pastoris
(Construction of shuttle vector for the transformation of yeast Pichia pastoris)

Autori
Rešetar, Josip

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, preddiplomski

Fakultet
Prehrambeno- biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
16.07

Godina
2018

Stranica
33

Mentor
Teparić, Renata

Ključne riječi
CCW12XR ; ksiloza reduktaza ; Pichia pastoris ; plazmidni vektor
(CCW12XR ; Pichia pastoris ; shuttle vector ; xylose reductase)

Sažetak
Pichia pastoris često je korišteni mikroorganizam u biotehnološkoj proizvodnji heterolognih proteina. Zbog mogućnosti rasta do visokih staničnih gustoća važna je mogućnost njegove primjene u dobivanju kemikalija na ekološki prihvatljiv i ekonomski isplativ način. U ovom radu konstruiran je plazmidni vektor pogodan za transformaciju kvasca Pichia pastoris koji nosi gen za rekombinantni protein Ccw12XR iz kvasca Saccharomyces cerevisiae. Rekombinantni gen se sastoji od dijela koji kodira za enzim ksiloza reduktazu (XR) i dijela koji kodira za protein Ccw12 stanične stijenke kvasca S. cerevisiae. Rekombinantni gen umnožen je PCR metodom i ugrađen TA ligacijom u plazmidni vektor pGEM®-T Easy. Plazmid je umnožen u kompetentnim stanicama E. coli, nakon čega je iz plazmida izrezan rekombinantni gen CCW12XR korištenjem SapI restrikcijskog enzima. Naposljetku je CCW12XR gen ligiran s lineariziranim plazmidom pBSY3Z. Uspješnost ligacije je, nakon umnažanja plazmidnog vektora u kompetentnim stanicama E. coli, provjerena restrikcijom pomoću odabranih restrikcijskih enzima i elektroforezom na agaroznom gelu.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA