Naslov
Purinska nukleozidna fosforilaza iz soja 26695 bakterije Helicobacter pylori: Ekspresija, pročišćavanje i karakterizacija
(Purine nucleoside phosphorylase from bacterium Helicobacter pylori strain 26695: Expression, purification and characterisation)

Autori
Gucunski, Karolina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
28.09

Godina
2018

Stranica
52

Mentor
Luić, Marija

Neposredni voditelj
Leščić Ašler, Ivana

Ključne riječi
afinitetna kromatografija s vezanim inhibitorom, anionska izmjenjivaĉka kromatografija, Helicobacter pylori, kinetiĉki parametri, kristalizacijske probe, purinska nukleozidna fosforilaza
(affinity chromatography with bound inhibitor, anionic exchange chromatography, Helicobacter pylori, kinetic parameters, crystallization probes, purine nucleoside phosphorylase)

Sažetak
Cilj ovog rada je pročišćavanje, karakterizacija i kristalizacija enzima purinske nukleozidne fosforilaze (PNPaza) iz bakterije Helicobacter pylori. PNPaza katalizira reverzibilno fosforolitičko cijepanje glikozidne veze ribo- i deoksiribonukleozida, u prisutnosti fosfata kao sekundarnog supstrata u svrhu nastajanja purinske baze i riboze(deoksiriboze)-1-fosfata. Neophodan je enzim kod sinteze purina iz metaboličkog otpada, jedinog aktivnog puta za sintezu purina u bakteriji H. pylori. Optimizirana je ekspresija PNPaze u bakteriji Escherichia coli. Prekomjerno eksprimirana PNPaza je pročišćena anionskom izmjenjivačkom kromatografijom i afinitetnom kromatografijom na koloni s vezanim inhibitorom. Aktivnost pročišćenog enzima ispitana je spektrofotometrijski uz različite primarne supstrate. Određeni su kinetički parametri i ispitana je ovisnost aktivnosti PNPaze o pH i temperaturi reakcijske smjese. Postavljeni su eksperimenti kristalizacije s pročišćenim enzimom metodom difuzije para u visećoj kapi u različitim uvjetima.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija

POVEZANOST RADA