Naslov
Utjecaj broja leukocita na koncentraciju i čistoću izolirane DNA
(The impact of number of leukocytes on concentration and purity of isolated DNA)

Autori
Đuraković, Melani

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
06.07

Godina
2018

Stranica
31

Mentor
Grdić Rajković, Marija

Ključne riječi
izolacija DNA, metoda po Milleru, DNA, broj leukocita, Qiagen FlexiGene DNA kit, čistoća DNA, koncentracija DNA
(DNA isolation, Miller method, DNA yield, DNA purity, DNA, number of leukocytes, Qiagen FlexiGene DNA kit)

Sažetak
Izolacija DNA je ključni korak koji prethodi brojnim analizama u molekularnoj dijagnostici. Izlacija DNA iz leukocita isoljavanjem (po Milleru ili Qiagen test paketom) temelji se na odvajanju staničnih proteina povećanjem koncentracije soli i centrifugiranjem, nakon čega se DNA taloži apsolutnim etanolom. Cilj istraživanja je ispitati utjecaj broja leukocita na koncentraciju i čistoću izolirane DNA. Broj leukocita određen je neposredno nakon uzorkovanja na hematološkom brojaču. Uzorci pune krvi pomiješani s antikoagulansom EDTA su pohranjeni na -20° C do izolacije DNA. DNA je izolirana metodom po Milleru (N=227 ; 92 zdrava ispitanika i 135 ispitanika s kroničnom opstrukcijskom plućnom bolesti) i primjenom komercijalnog kita tvrtke Qiagen (N=173 ; 98 zdravih ispitanika i 75 ispitanika na hemodijalizi). Apsorbancije na 280 i 260 nm izmjerene su na DeNovix DS-11 spektrofotometru visoke osjetljivosti. Statistička analiza provedena je korištenjem MedCalc statističkog programa. Millerovom metodom izolacije u odnosu na Qiagen test paket dobivene su veće koncentracije DNA [138, 6 (123, 1-151, 7) vs 57, 0 (48, 0-76, 5) ng/µL ; P<0, 001] i čistoće [1, 7 (1, 7-1, 7) vs 1, 3 (1, 3-1, 5) ; P<0, 001]. Broj leukocita se značajno razlikovao u uzorcima korištenim za dvije različite metode izolacije. Pronađena je slaba korelacija između broja leukocita i koncentracije DNA (rs=0, 27 ; P<0, 001 i rs=0, 43 ; P<0, 001) i između broja leukocita i čistoće DNA (rs=0, 38 ; P<0, 001 i rs=0, 27 ; P<0, 001). Ovisno o korištenoj metodi broj leukocita je utjecao na koncentraciju i čistoću izolirane DNA, međutim uočena korelacija iako značajna je vrlo slaba. Svakako treba uzeti u obzir da su uzorci prije izolacije zamrznuti, što je moglo utjecati na dobivene rezultate.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Interdisciplinarne prirodne znanosti, Temeljne medicinske znanosti, Kliničke medicinske znanosti, Farmacija

POVEZANOST RADA