Naslov
Izrada "knock-out" stanične linije za gen GLI1 primjenom sustava CRISPR/Cas9
(CRISPR/Cas9 mediated generation of GLI1 knock out cell line)

Autori
Rinčić, Nikolina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
11.07

Godina
2018

Stranica
55

Mentor
Sabol, Maja

Neposredni voditelj
Blažević, Sofia Ana

Ključne riječi
Hedgehog-Gli, karcinom jajnika, kloniranje, SKOV3, transfekcija
(Hedgehog-Gli, ovarian cancer, cloning, SKOV3, transfection)

Sažetak
U okviru diplomskog rada napravljena je „knock- out“ stanična linija za gen GLI1 primjenom sustava CRISPR/Cas9. Takva „knock-out“ stanična linija koristiti će se kao model in vitro za daljnje analize i može doprinijeti boljem razumijevanju uloge signalnog puta Hedgehog-Gli (HH-GLI) u nastanku i progresiji tumora. Gen GLI1 je dio navedenog signalnog puta čija je poremećena aktivacija opisana u 30% tumora. GLI1 kao isključivi aktivator signalnog puta predstavlja značajnu metu za razvoj potencijalnih terapija, stoga su SKOV3 stanice bile podvrgnute ciljanoj modifikaciji gena GLI1 primjenom sustava CRISPR/Cas9. Početni postupak je uključivao dizajn sgRNA te njeno kloniranje u plazmidni vektor. SKOV3 stanice su naposljetku transfecirane plazmidnim vektorom, a zatim nasađene u pločice s 96 bunarića gustoće 1 stanice po bunariću, kako bi se u svakom bunariću uzgojila homogena linija nastala od pojedinačnih stanica. Odabranim linijama stanica izolirani su proteini i analizirani metodom Western Blot. Metodom Western Blot ispitana je proteinska ekspresija transkripcijskog faktora GLI1 te proteina PTCH koji predstavlja njegovu ciljnu molekulu. Primjenom sustava CRISPR/Cas9 uspješno je napravljena „knock-out“ stanična linija za gen GLI1, što je potvrđeno izostankom proteinske ekspresije GLI1 i PTCH. Potencijal provedene inhibicije je doista velik, no njene posljedice na rast stanica, njihovu migraciju i odgovor na terapiju tek moraju biti ispitane.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA