Naslov
Optimiziranje spektrofluorimetrijske metode za određivanje malondialdehida u urinu
(Development of the spectrofluorimetric method for determination of malondialdehyde in urine)

Autori
Nežić, Marko

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski

Mjesto
Zagreb

Datum
16.02

Godina
2018

Stranica
50

Mentor
Inić, Suzana

Ključne riječi
Spketrofluorimetrija, lipidna peroksidacija, malondialdehid, standardna adicija, validacija
(Spectrofluorimetry, lipid peroxidation, malondialdehyde, standard addition, validation)

Sažetak
Spektrofluorimetrija predstavlja jednu od osjetljivnijih metoda s obzirom na mogućnost detekcije željenog spoja u smjesi bez prethodnog odjeljivanja. Malondialdehid (MDA) je stabilan produkt lipidne peroksidacije te je uzet za mjerenje razine oksidacijskog stresa u uzorcima humanog urina. Metoda korištena u ovom radu za određivanje koncentracije MDA u urinu temelji se na reakciji MDA s dvije molekule 2-tiobarbituratne kiseline (2-TBA) pri visokoj temperaturi od 90ºC i kiselim uvjetima koji su postignuti korištenjem 1% otopine o-H3PO4. Prije mjerenja ispitane su interferencije korištenjem kreatinina, uree, 2-TBA i o-H3PO4. Ispitivanja su napravljena na spektrofluorimetru OLIS RSM 1000F s ekscitacijom na λ=515 nm i detekcijom emisije na λ=553 nm. Ispitivanja interferencija nisu pokazala značajan signal ispitanih supstancija pri λ=553 nm. Za validaciju metode korišteni su standardi otopine MDA dobiveni razrjeđivanjem matične komercijalne otopine 1, 1, 3, 3-tetraetoksipropana te su izrađeni standardi u rasponu od 0, 5 do 6, 07 μmol/L. Validacijom u vodi dobiven je regresijski pravac y=0, 1723x+0, 0298 s R2=0, 9975. Ponovljivost u seriji za koncentraciju standarda 2, 02 μmol/L iznosila je 3, 02%, dok je ponovljivost iz dana u dan bila 4, 27%. Granica detekcije bila je na 0, 078 μmol/L, a granica određivanja na 0, 237 μmol/L. Kod validacije u urinu dobiven je regresijski pravac y=0, 135x+0, 0061 s R2=0, 9901. Ponovljivost u seriji za koncentraciju standarda 2, 02 μmol/L iznosila je 5, 18%, dok je ponovljivost iz dana u dan bila 5, 14%. Granica detekcije bila je na 0, 248 μmol/L, a granica određivanja na 0, 746 μmol/L. Mjerenjem koncentracije MDA u urinu sedmorice zdravih dobrovoljaca i izračunom koncentracije pomoću kalibracijske krivulje dobivene su vrijednosti koncentracije MDA 1, 41±0, 59 μmol/L. Kako bi se poništio utjecaj matriksa isti su uzorci izmjereni metodom standardne adicije poznate koncentracije MDA te su dobivene vrijednosti 1, 01±0, 17 μmol/L. Dobivene vrijednosti validacije i rezultata mjerenja uzoraka upućuju na to kako su obje metode pouzdane za mjerenje koncentracije MDA u urinu, ali metoda standardom adicijom daje točnije vrijednosti.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija

POVEZANOST RADA