Naslov
Mehanizam temperaturne osjetljivosti proteina Cas3 iz bakterije Escherichia coli
(The mechanism of temperature sensitivity of the Cas3 protein in Escherichia coli)

Autori
Anja Čulo

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
24.02

Godina
2017

Stranica
46

Mentor
Ivančić Baće, Ivana ; Peharec Štefanić, Petra

Ključne riječi
CRISPR-Cas, Cas3, temperatura, H-NS, HtpG, ColE1
(CRISPR-Cas, Cas3, temperature, H-NS, HtpG, ColE1)

Sažetak
Sustav CRISPR-Cas je važan mehanizam obrane prokariota od pokretnih genetičkih elementa. Sastoji se od ponavljajućih sekvenci DNA između kojih se nalaze razmaknice, koje potječu iz plazmida ili faga, te gena cas, koji su odgovorni za različite korake obrane. Transkripcijom i procesiranjem lokusa CRISPR nastaju kratke crRNA koje u kompleksu s proteinima Cas prepoznaju stranu DNA na principu komplementarnosti pri čemu nastaje R-omča - hibrid DNA i RNA i istisnutog jednog lanaca DNA. Protein Cas3 sudjeluje u zadnjoj fazi obrane, u vezanju na R-omču odakle započinje cijepati stranu DNA. Aktivnost sustava CRISPR-Cas ovisi o proteinima H-NS, koji je represor gena cas i lokusa CRISPR, HtpG, koji je neophodan za održavanje funkcionalne razine proteina Cas3, i temperaturi. Pri višoj temperaturi od 37 °C uočen je gubitak aktivnosti proteina Cas3. U ovom radu istraživan je razlog te neaktivnosti. Određivanjem sekundarne strukture pročišćenog proteina Cas3 na različitim temperaturama, uočeno je da pri temperaturi od 35 °C dolazi do konformacijske promjene u helikoidalnoj regiji proteina Cas3. Zasađivanjem faga λ potvrdili smo da je protein Cas3 izgubio aktivnost na 35 °C in vivo. Promijenjeni protein Cas3 na 37 °C potiče povećanu replikaciju plazmida tipa ColE1, neovisno o prisutnosti proteina H-NS i/ili HtpG.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA