Naslov
Optimiranje uvjeta za određivanje signalnih molekula ERK i p38 MAPK Western blot metodom
(Optimizing conditions for determination of the signaling molecules ERK and p38 MAPK by Western blot analysis)

Autori
Radić, Dora

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
01.07

Godina
2016

Stranica
67

Mentor
Rumora, Lada

Ključne riječi
kronična opstrukcijska plućna bolest; Western blot; TLR receptori; ERK; p38; lipopolisaharid; lipoteikoična kiselina
(chronic obstructive pulmonary disease; Western blot; TLR receptors; ERK; p38; lipopolysaccharide; lipotheicoic acid)

Sažetak
Kronična opstrukcijska plućna bolest karakterizirana je snažnim upalnim odgovorom na inhalaciju štetnih čestica. Dolazi do nakupljanja imunosnih stanica koje luče citokine, kemokine i tkivne proteaze, posljedično tome dolazi do opstrukcije dišnih putova i izazito smanjenog protoka zraka. TLR receptori odgovorni su prvenstveno za urođenu imunost i za pojačavanje odgovora stečenog imuniteta. Nađena je veza između aktivacije TLR receptora, pokretanja kaskadne reakcije kojom dolazi do aktivacije (foforilacije) MAPK kinaza (ERK, p38, JNK) i izlučivanja različitih citokina koji izazivaju upalni odgovor. Cigaretni dim te brojni drugi štetni čimbenici iz okoliša dovode do aktivacije TLR receptora. Agonist TLR4 (LPS) i agonist TLR2 (LTA) koriste se u svrhu ipitivanja upalnog odgovora potaknutog navedenim receptorima.Cilj ovog diplomskog rada bilo je optimiranje uvjeta za određivanje signalnih molekula ERK i p38 MAPK iz THP-1 stanične linije Western blot metodom. Dobiveni rezultati pokazuju da su korištenjem protokola Cell Signaling Technology (CST) postignuti optimalni uvjeti i najbolji rezultati za sva četiri analizirana proteina: ERK, p-ERK, p38 i p-p38. Koncentracija proteina nanesenih na poliakrilamidni gel treba biti između 30 i 40 µg po jažici. Signal pozadine značajno je smanjen korištenjem nitrocelulozne membrane u odnosu na PVDF membranu. Vizualizacija proteina kemiluminiscencijom uz korištenje detekcijske otopine svježe pripremljene u laboratoriju daje konačnu sliku proteina koje se ne razlikuje od slike dobivene uz korištenje komercijalno dostupne otopine (Amersham ECL Prime ; GE Healthcare Life Sciences).

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Farmacija

POVEZANOST RADA