Naslov
Uvođenje delecije u gen SCW4 upotrebom PCR metode ˝megapočetnice˝
(Introduction of deletion in gene SCW4 using ˝megaprimer˝ PCR method)

Autori
Grubišić, Marina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, preddiplomski

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
11.09

Godina
2015

Stranica
35

Mentor
Teparić, Renata

Ključne riječi
stanična stijenka kvasca; PIR proteini; SCW4; PCR metoda ˝megapočetnice˝
(yeast cell wall; PIR proteins; SCW4; ˝megaprimer˝ PCR method)

Sažetak
Proteini stanične stijenke kvasca Sacharomyces cerevisiae se u staničnu stijenku mogu vezati putem dva mehanizma: kovalentno i nekovalentno. Nekovalentno vezani proteini se iz stanične stijenke izoliraju tretmanom sa vrućim SDS-om, a kovalentno vezani se mogu izolirati pomoću enzima glukanaza (tzv. GPI-proteini) ili ekstrakcijom pomoću 30 mM NaOH (tzv. Pir proteini). Protein Scw4p je specifičan po tome što se u staničnu stijenku veže putem oba mehanizma tj. kovalentno i nekovalentno. Kovalentno vezani Scw4p izolira se iz stijenkiprekonoćnom inkubacijom u 30 mM NaOH na 4 0C kao i proteini Pir porodice. Pir proteini su vezani na β-1, 3-glukan esterskom vezom između hidroksilne grupe glukoze i γ-karboksilne grupe određenog ostatka glutaminske kiseline smještenog unutar ponavljajuće sekvencespecifične za ovu porodicu proteina. Budući da unutar gena SCW4 takva sekvenca nije prisutna, mehanizam vezanja Scw4p u stijenku je nepoznat. Unutar gena SCW4 je međutim pronađena sekvenca slična PIR ponavljajućem motivu za koju se stoga pretpostavlja da bimogla biti zaslužn za kovalentno vezanje Scw4p u staničnu stijneku kvasca. Kako bi se ta pretpostavka provjerila u ovom radu je koristeći PCR metodu ˝megapočetnice˝ta sekvenca deletirana iz gena SCW4.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA