Naslov
Priprema kvaščevog sustava izoleucil-tRNA- sintetaze za kinetičku karakterizaciju
(Preparation of yeast isoleucyl-tRNA synthetase system for kinetical characterization)

Autori
Šoštarić, Nikolina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
29.06

Godina
2015

Stranica
102

Mentor
Gruić-Sovulj, Ita

Neposredni voditelj
Cvetešić, Nevena

Ključne riječi
izoleucil-tRNA-sintetaza ; heterologna ekspresija ; Saccharomyces cerevisiae ; tRNA ; kromatografija s imobiliziranim biotiniliranim oligonukleotidima ; kromatografija obrnutih faza
(isoleucyl-tRNA synthetase ; heterologous expression ; Saccharomyces cerevisiae ; tRNA ; chromatography with immobilized biotinylated oligonucleotides ; reversed-phase chromatography)

Sažetak
Izoleucil-tRNA-sintetaze (IleRS) su enzimi koji kataliziraju stvaranje Ile-tRNAIle te posjeduju hidrolitičke aktivnosti s ciljem popravka vlastite pogreške u izboru pripadne aminokiseline izoleucin. IleRS iz bakterije Escherichia coli značajno koristi tRNA-ovisan popravak pogreške prije prijenosa aminokiseline koji se provodi u sintetskom aktivnom mjestu. S obzirom na to da ključna aminokiselina za ovu aktivnost nije očuvana u eukariotskom tipu IleRS, nameće se pitanje je li ova korektivna aktivnost evolucijski izgubljena. Kao modelni eukariotski sustav za kinetičku karakterizaciju odabran je IleRS iz kvasca Saccharomyces cerevisiae. Heterologna ekspresija pod kontrolom jakog promotora u bakteriji Escherichia coli pokazala se optimalnom za dobivanje većih količina topljive citosolne kvaščeve IleRS s nadodanim N-terminalnim heksahistidinskim privjeskom. Enzim je pročišćen metodama afinitetne kromatografije i gel- filtracije. Pripadni supstrat u vidu kvaščevog izoakceptora tRNAIleIAU pročišćen je direktno iz S. cerevisiae kromatografijom s imobiliziranim biotiniliranim komplementarnim oligonukleotidima te kromatografijom obrnutih faza

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija

POVEZANOST RADA