Naslov
Optimiziranje spektrofotometrijske metode za određivanje malondialdehida u urinu
(Development of the spectrofotometric method for determination of malondialdehyde in urine)

Autori
Vidović, Josipa

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
13.04

Godina
2015

Stranica
42

Mentor
Domijan, Ana-Marija

Ključne riječi
oksidacijski stres; lipidna peroksidacija; malondialdehid; UV-Vis spektrofotometrija; validacija; optimiziranje
(oxidative stress; lipid peroxidation; malondialdehyde; UV-Vis spectrofotometry; validation; development)

Sažetak
Oksidacijski stres se povezuje s patogenezom brojnih bolesti. U epidemiološkim studijama kao pokazatelj stupnja oksidacijskog stresa najčešće se koristi malondialdehid (MDA) koji nastaje kao produkt lipidne peroksidacije (LPO). Pretpostavlja se da je koncentracija MDA u urinu mjera oksidacijskog stresa cijelog organizma. Kako je urin lakše sakupiti od krvi svrha je ovog istraživanja bila razviti pouzdanu i primjenjivu metodu za mjerenje MDA u urinu. Za određivanje koncentracije MDA u urinu u ovom istraživanju koristila se metoda s 2-tiobarbituratnom kiselinom (2-TBA) u kojoj MDA reagira s dva ekvivalenta TBA i nastaje crveni adukt MDA-TBA2. Reakcija se odvija u kiselim uvjetima i na visokoj temperaturi. Smatra se da "stresni uvjeti" reakcije (niski pH i visoka temperatura) dovode do dodatnog nastajanja MDA, odnosno do tzv. "lažno pozitivnih rezultata". Ispitivani su optimalni uvjeti reakcijske smjese: različite temperature (80° i 90 °C) i različite dužine zagrijavanja (12, 20, 30, 40, 60 i 90 minuta) te različite koncentracije kiseline (0, 1% i 1% o-H3PO4). Također ispitivane su i interferncije (urea i kreatinin). Ispitivanja su provedena na spektrofotometru Agilent 8453 UV-Vis (Agilent Technologies, CA, USA) na valnoj duljini od 532 nm. Pokazalo se da najoptimalnije pripremanje uzoraka uključuje 800 μl uzorka urina kojem se doda 500 μl 2-TBA (0, 6%) i 1, 5 ml o-fosforne kiseline (1%). Uzorci se potom promiješaju i zagrijavaju kroz 30 minuta na 90 °C u grijaćem bloku. Ispitivanje provedeno s ureom i kreatininom pokazalo je da one ne interferiraju u korištenim reakcijskim uvjetima. Za validaciju metode upotrebljeni su standardi dobiveni razrjeđivanjem komercijalnog standarda MDA (1, 1, 3, 3 tetraetoksipropan) koncentracija u rasponu od 0, 76 do 20, 23 μmol/L. Dobivena kalibracijska krivulja je bila pravac s jednadžbom y= 0, 0562x + 0, 0103 i koeficijentom korelacije R2= 0, 9987. Ponovljivost izražena kao relativna standardna devijacija (RSD) bila je 1, 38 %, a RSD ponovljivosti iz dana u dan 4, 11 %. Limit detekcije bio je 0, 107 µmol/L. Mjerenjem koncentracije MDA u 10 sakupljenih uzoraka urina dobrovoljaca dobivene su vrijednosti u rasponu od 1, 69 do 5, 92 μmol/L. To pokazuje da je razvijena metoda primjenjiva za mjerenje MDA u urinu te se može koristiti za određivanje koncentracije MDA u nepoznatim uzrocima odnosno za praćenje razine oksidacijskog stresa u urinu.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Farmacija

POVEZANOST RADA