Naslov
SINTEZA I ODREĐIVANJE OSJETLJIVOSTI DIGOKSIGENINOM OBILJEŽENE PROBE ZA HIBRIDIZACIJU DNA METODOM PO SOUTHERN-U
(SYNTHESIS AND SENSITIVITY DETERMINATION OF DIGOXIGENIN-LABELLED PROBE FOR SOUTHERN BLOTTING)

Autori
Bertoša, Rea

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, preddiplomski

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
11.09

Godina
2014

Stranica
25

Mentor
Svetec, Ivan-Krešimir

Neposredni voditelj
Štafa, Anamarija

Ključne riječi
hibridizacija po Southern-u; gel-elektroforeza; digoksigeninom obilježena proba
(Southern blotting; gel-electrophoresis; digoxigenin labelled probe)

Sažetak
Cilj ovog rada bio je sintetizirati te odrediti osjetljivost digoksigeninom (DIG) obilježene probe, komplementarne genu URA3 kvasca Dekkera bruxellensis, koja se koristi pri hibridizaciji DNA po Southern-u. DIG-obilježena proba sintetizirana je lančanom reakcijom polimerazom (PCR), koristeći kao kalup regiju DNA koja sadrži gen URA3, a uspješnost reakcije provjerena je gelelektroforezom. Kako bi se odredila osjetljivost obilježene probe provedena je gel-elektroforeza s različitim masama plazmida koji sadrži gen URA3 kvasca Dekkera bruxellensis. Uzorci razdvojeni elektroforezom preneseni su na nitroceluloznu membranu koristeći vakuum prijenos u lužnatom mediju. Nakon predhibridizacije i hibridizacije denaturiranom DIG-obilježenom probom, detekcija je provedena kolorimetrijskom metodom pomoću BCIP (toluidinska sol 5-brom-4-klor-3’- indolilfosfata) i NBT (nitro-plavi tetrazolijski klorid) koji su korišteni kao supstrat i indikator za alkalnu fosfatazu. Budući da se hibridizacijski signal na membrani pojavio i u uzorku koji je sadržavao svega 1 ng plazmidne DNA može se zaključiti da je sintetizirana proba dovoljno osjetljiva te se može koristiti za analizu genoma kvasca D. bruxellensis

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA