Naslov
Određivanje N-glikanskog profila sa suhih krvnih mrlja
(Determination of N-glycan profile from dried blood spots)

Autori
Keser, Toma

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
01.07

Godina
2011

Stranica
39

Mentor
Lauc, Gordan

Ključne riječi
glikozilacija; N-glikanski profil; suhe krvne mrlje; HPLC
(glycosylation; N-glycan profile; dried blood spots; HPLC)

Sažetak
S obzirom na to da bi razvoj dijagnostičkih metoda za analizu glikana pružio zanimljive mogućnosti za dijagnostiku, prognostiku i praćenje bolesti, tehnologija DBS-a mogla bi značajno pridonijeti pojednostavljenju i pojeftinjenju njihovog razvoja i istraživanja te njihove potencijalne rutinske primjene. U ovome radu ispitano je može li se sa suhih krvnih mrlja dobiti N-glikanski profil koji je direktno usporediv s profilom N-vezanih glikana dobivenih iz plazme, te može li se dobiti jednako dobar profil glikana s krvnih kartica starih 2 godine. U tu su svrhu suhe krvne mrlje isprane s jednim od tri različita otapala (puferom za lizu, PBS-om ili vodom) te su se glikani oslobođeni N-glikozidazom F obilježili s flourescentnim markerom i zatim analizirali tekućinskom kromatografijom visoke djelotvornosti koja se temelji na hidrofilnim interakcijama (HILIC). Također je proveden dodatni eksperiment za ispitivanje ponovljivosti metode. Rezultati su pokazali da se N-glikanski profil može dobiti sa suhih krvnih mrlja pomoću sva tri otapala koja su korištena za njihovo ispiranje, ali postoje razlike u razlučivosti. Pufer za lizu eritrocita se pokazao kao najbolji izbor od triju korištenih otapala u svrhu dobivanja N-glikanskog profila. Profil dobiven tim puferom ima najveći intenzitet i razlučivost koja najviše sliči N- glikanskom profilu plazme. Glikanski profili dobiveni ispiranjem suhih krvnih mrlja s PBS-om i vodom više sliče profilu dobivenom iz pune krvi. Iz ponovljenog eksperimenta zaključeno je da acetonitril ne pomaže u ispiranju glikoproteina s celuloznog papira te da se iz krvnih mrlja pohranjenih na običnom kromatografskom filter papiru može dobiti jednako dobar glikanski profil kao s non-FTA krvnih kartica. Metoda pokazuje prihvatljivu ponovljivost za kompleksne biološke uzorke, ali postoji još prostora za optimiranje metode. No, kada se metoda u potpunosti optimira, prednosti uzorkovanja DBS tehnologijom biti će mnogobrojne.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Farmacija

POVEZANOST RADA