Naslov
Heterologna ekspresija i biokemijska karakterizacija novog proteina pretpostavljene peptidazne aktivnosti iz mahovine Physcomitrella patens
(Heterologous expression and biochemical characterization of the new protein with predicted peptidase activity originating from the moss Physcomitrella patens)

Autori
Jozić, Iva

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
22.02

Godina
2013

Stranica
77

Mentor
Abramić, Marija

Neposredni voditelj
Vukelić, Bojana

Ključne riječi
dipeptidil-peptidaza III; hidrolaza; metalopeptidaza
(dipeptidyl peptidase III; hydrolase; metallopeptidase)

Sažetak
Sekvenciranje genoma mahovine Physcomitrella patens omogućilo je in silico usporedbe s drugim vrstama. Primjenom bioinformatičkih metoda, u bazi UniProt uočen je protein od 770 aminokiselina (oznaka: A9TLP4) iz P. patens koji sadrži sve očuvane regije porodice dipeptidil-peptidaza III (DPP III), ali umjesto tipičnog motiva HEXXGH posjeduje HECCH. Da bi se okarakteriziralo A9TLP4, provedena je heterologna ekspresija gena PHYPADRAFT_64347. Rekombinantni protein pročišćen je afinitetnom kromatografijom, te su mu određene molekularna masa (88 700 Da) SDS-elektroforezom, i izoelektrična točka (pI = 5, 1), izoelektričnim fokusiranjem. Ispitivanje sintetskih supstrata peptidaza, pokazalo je izrazitu hidrolitičku aktivnost A9TLP4 prema Arg-Arg-2-naftilamidu, karakterističnom supstratu DPP III, koju značajno povećavaju ioni Co2+, a najveća je kod pH = 7, 4 i kod temperature od 55 ˚C. Potpunu inhibiciju enzimske aktivnosti uzrokovali su kelirajući agensi i sulfhidrilni reagens p-hidroksimerkuribenzoat. Dobiveni rezultati ukazuju da je protein A9TLP4 član porodice DPP III s, dosad, najnižom specifičnom aktivnošću i najvišom optimalnom temperaturom djelovanja.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija

POVEZANOST RADA