Naslov
Sinteza fragmenata DNA za inaktivaciju gena RAD27 lančanom reakcijom polimerazom
(Synthesis of a DNA fragment by polymerase chain reaction used for inactivation of the gene RAD27)

Autori
Nestić, Davor

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, preddiplomski

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
13.09

Godina
2013

Stranica
28

Mentor
Svetec, Ivan-Krešimir

Neposredni voditelj
Miklenić, Marina

Ključne riječi
Saccharomyces cerevisiae; lančana reakcija polimerazom; homologna rekombinacija; zamjena gena.
(Saccharomyces cerevisiae; polymerase chain reaction; homologous recombination; gene replacement.)

Sažetak
Cilj ovoga rada je umnaţanje linearnog fragmenta DNA rad27::kanMX4 lančanom reakcijom polimerazom iz kvasca Saccharomyces cerevisiae. Fragment rad27::kanMX4 se zahvaljujući krajevima homolognima dijelu gena RAD27 i selektivnom biljegu kanMX4 moţe koristiti za inaktivaciju gena RAD27 u drugim sojevima kvasca mehanizmom rekombinacije „end-out“ (zamjena gena). Nakon izolacije genomske DNA kvasca, provedena je gel- elektroforeza radi provjere uspješnosti izolacije te je izolirana DNA posluţila kao kalup za sintezu fragmenta lančanom reakcijom polimerazom. Gel- elektroforezom provjerena je uspješnost sinteze fragmenta, a struktura umnoţenog fragmenta provjerena je restrikcijskom analizom pomoću tri restrikcijska enzima. Veličina dobivenih fragmenata nakon cijepanja restrikcijskim enzimima bila je u skladu s restrikcijskom mapom fragmenta rad27::kanMX4.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA