Naslov
Disulfidne veze u preusmjeravajućim motivima RGD ili NGR ugrađenim u adenovirus tip 5
(Disulfide bonds in retargeting motifs RGD or NGR inserted into the adenovirus tip 5)

Autori
Kristijan Pažur

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
30.09

Godina
2013

Stranica
67

Mentor
Andreja Ambriović Ristov

Neposredni voditelj
Stojanović, Nikolina

Ključne riječi
adenovirus tip 5 ; disulfidne veze ; RGD i NGR preusmjeravajući slijed
(adenovirus type 5 ; disulfide bond ; RGD and NGR retargeting motif)

Sažetak
Replikacijski defektni adenovirusi tipa 5 (Ad5) koriste se kao vektori za gensku terapiju tumora. Preusmjeravanje Ad5 postiže se ugradnjom preusmjeravajućih motiva u proteine kapside, najčešće u HI-petlju vlakna ili u hipervarijabilnu regiju heksona 5 (HVR5). Integrini αv često su povećano eksprimirani na stanicama tumora u odnosu na normalno tkivo, a preusmjeravajući motiv kojim se mogu preusmjeravati Ad5 na αv integrine na površini stanice je RGD. U genskoj terapiji tumora mogu se ciljati i stanice koje podržavaju rast tumora kao što su endotelne stanice u angiogenezi koje stvaraju nove krvne žile u tumoru. Endotelne stanice u angiogenezi eksprimiraju aminopeptidazu N, a preusmjeravajući motiv koji se veže na APN je NGR. Poznato je da različiti aminokiselinski okoliš, posebice postojanje cisteina oko RGD i NGR motiva ugrađenih u HI-petlju vlakna Ad5 utječe na afinitet vezanja za odgovarajući receptor. Cilj ovog rada bio je istražiti postoje li disulfidne veze u dvama replikacijski defektnim Ad5 vektorima: (i) Ad5HCRGDC s preusmjeravajućim motivom CRGDC ugrađenim u HVR5 i (ii) Ad5ARAP s motivom CNGRCVSGCAGRC ugrađenim u HI-petlji vlakna Ad5. Pokazano je da obrada Ad5HCRGDC ditiotreitolom ne mijenja djelotvornost transdukcije stanica rabdomiosarkoma (RD), što znači da ne utječe na vezanje na αv integrine. Potvrda da cisteini unutar CRGDC motiva ne stvaraju disulfidne veze dobivena je spektrometrijom masa. Obrada Ad5ARAP ditiotreitolom dokida sposobnost preusmjeravanja ovog virusa na APN eksprimiran na stanicama RD, što znači da cisteini smješteni oko NGR preusmjeravajućeg motiva u CNGRCVSGCAGRC stvaraju disulfidnu/e vezu/e, istovremeno važnu/e za vezanje na receptor APN. Analiza peptidnog okoliša preusmjeravajućih motiva omogućuje bolje razumjevanje odnosa strukture i funkcije preusmjeravajućih motiva što pomaže u dizajnu preusmjerenih adenovirusa s ciljem genske terapije tumora.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA