Naslov
Utjecaj 5-azacitidina na razvoj eksperimentalnog teratokarcinoma u miša
(The impact of 5-azacytidine on the development of experimental teratocarcinoma in mice)

Autori
Sinčić, Nino

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Medicinski Fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
09.07

Godina
2012

Stranica
181

Mentor
Vlahović, Maja

Neposredni voditelj
Herceg, Zdenko

Ključne riječi
teratokarcinom; miš; 5-azacitidin; Oct3/4; Nanog; DNA metilacija
(teratocarcinoma; mouse; 5-azacytidine; Oct3/4; Nanog; DNA methylation)

Sažetak
Cilj disertacije bio je istražiti epigenetičku platformu i utjecaj DNA demetilirajućeg agensa 5-azacitidina (5azaC) na razvoj eksperimentalnog teratokarcinoma miša (TCa) dobivenog transplantacijom gastrulirajućeg zametka (E 7, 5) pod čahuru bubrega odrasle životinje. Otkriveno je da se TCa razvija samo iz zametaka muškog spola. Istraživani osmotjedni razvoj TCa započeo je blagim rastom nakon kojeg je uslijedio period mirovanja. TCa je završio razvoj eksplozivnim rastom koji se dogodio istovremeno s povećanjem ekspresije proliferacijskog gena Pcna. Eksperiment in vitro ukazao je na ključnu ulogu ekspresije gena matičnosti Oct3/4 i Nanog u razvoju TCa jer je inhibicijom njihove ekspresije pomoću esiRNA došlo do supresije rasta zametka. Analizom metilacije DNA otkrili smo kontinuiranu hipometilaciju gena matičnosti Nanog tijekom razvoja TCa u usporedbi s testisom. Gen Oct3/4 pokazao je pak hipermetilacijski reprogram u usporedbi s zametkom koji se preklapao s periodom blagog rasta i mirovanja tumora. Postizanjem maksimuma hipermetilacije, TCa je započeo intenzivan rast u korelaciji s udjelom Oct3/4 demetiliranih stanica. Gen Sox2, iako s niskim stupnjem metilacije DNA, pokazao je reprogram metilacije promotora u usporedbi s zametkom tijekom razvoja teratokarcinoma sličan promotoru gena Oct3/4. Analizom metilacijskih obrazaca i njihove promjene na promotorima gena Scgb3a1, Prss21, Stat3, Brca1, Mgmt, c-Myc, Trrap i Rassf1 te globalne metilacije DNA temeljene na analizi repetitivnih sekvenci Mml, Mmetnltr i B1 moglo se zaključiti da navedeni geni i sekvence nisu bili uključeni u razvoj teratokarcinoma. 5azaC primijenjen neposredno nakon transplantacije zametka potpuno je sprječio razvoj TCa, dočim primijenjen na razvijeni TCa, statistički značajno smanjuje rast tumora. Iako je 5azaC uzrokovao globalnu hipometilaciju, nije utjecao na metilacijski status i metilacijske reprograme gena matičnosti Oct3/4, Nanog i Sox2. Dapače, 5azaC inhibirao je ekspresiju gena matičnosti Oct3/4 i Nanog u tretiranih razvijenih TCa mehanizmom koji ne uključuje promjenu metilacije DNA. Naši rezultati pokazali su da 5azaC ne izaziva promjene biljega oksidativnog stresa, niti onih povezanih s upalnim procesima. Dakle, čini se da 5azaC izaziva uspostavu metiloma koji vjerojatno potiče apoptozu i smanjuje proliferaciju tumorskih matičnih stanica TCa. Naše istraživanje otkriva epigenetičku platformu razvoja tumora i potencijal upotrebe 5azaC u liječenju tumora zametnih stanica testisa.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA