Naslov
Aktivnost promotora Dc3 u transformiranim somatskim embrijima Pančićeve omorike Picea omorika (Panč) Purk.
(Dc3 promoter activity in tranformed somatic embryos of omorika spruce (Picea omorika (Panč.) Purk.))

Autori
Mihaljević, Snježana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
16.07

Godina
1999

Stranica
85

Mentor
Jelaska, Sibila

Ključne riječi
Agrobacterium; kanamicin; karbenicilin; Picea omorika; promotori; somatski embriji; transformacija
(Agrobacterium-mediated transformation; kanamycin; carbenicillin; Picea omorika; promoters; somatic embryos)

Sažetak
Somatski embriji jako embriogene linije BB19 zaraženi su bakterijama A. tumefaciens soj LBA 4404 s binarnim vektorom pBI121 ili pBI101Dc3. Privremena ekspresija gena gusA histokemijski je kvantificirana. Učinkovitost privremene transformacije izražena je kao postotak GUS-pozitivnih somatskih embrija (50%) i kao postotak GUS-aktivne površine somatskih embrija (1,5-5%), nakon 30 dana rasta na selekcijskoj podlozi. Uspješnost transformacije nije ovisila o postupku zaražavanja (intaktni embriji, dodatak acetosiringona, dvodnevni pretretman na podlozi za indukciju IM, ozljeđivanje embrija). Privremena ekspresija gena gusA bila je jednaka pod transkripcijskom kontrolom promotora CaMV 35S ili ABA-induciranog promotora Dc3. GUS-pozitivni somatski embriji upotrebljeni su za ponovno poticanje embriogenoga tkiva. Tamnjenje tkiva somatskih embrija koji su rasli na selekcijskoj podlozi duže od mjesec dana onemogućilo je daljnje histološko dokazivanje transformacije. Selekcija potencijalno transformiranoga tkiva na subletalnoj koncentraciji kanamicina (5 mg/L) nije bila učinkovita. Somatski embriji u kotiledonarnom stadiju razvoja bili su najpogodniji za poticanje sekundarne embriogeneze i transformaciju posredstvom agrobakterija. Određen je utjecaj karbenicilina i cefotaksima (antibiotici koji se upotrebljavaju za uklanjanje agrobakterija iz kulture) na indukciju sekundarne embriogeneze Pančićeve omorike. Karbenicilin (500 mg/L) je kočio indukciju sekundarne embriogeneze Pančićeve omorike suprotno cefotaksimu (500 mg/L). Embriogeno tkivo Pančićeve omorike bilo je vrlo osjetljivo na selekciju kanamicinom. Smrtna koncentracija kanamicina za stanice netransformiranoga embriogenoga tkiva bila je 10 mg/L. Subletalna koncentracija kanamicina (smanjenje embriogenoga potencijala za 80% u odnosu na kontrolu) bila je 5 mg/L. Higromicin je imao izrazito toksično djelovanje na netransformirano embriogeno tkivo Pančićeve omorike (2 mg/L). Neomicin je bio 10 puta manje toksičan od kanamicina i paromomicina te se može upotrijebiti za optimalizaciju selekcije nptII-transformiranoga tkiva Pančićeve omotike.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA