Naslov
Enzimatska karakterizacija piruvat-kinaze bakterije Bacillus subtilis
(Enzymatic characterization of Bacillus subtilis pyruvate kinase)

Autori
Kovač, Kristina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
23.11

Godina
2012

Stranica
40

Mentor
Franjević, Damjan

Neposredni voditelj
Mijaković, Ivan

Ključne riječi
piruvat-kinaza; enzimska karakterizacija; Bacillus subtilis
(pyruvate kinase; enzymatic characterization; Bacillus subtilis)

Sažetak
Piruvat-kinaza je ključni enzim glikolize i metabolizma ugljika. Katalizira završni korak glikolitičkog puta, prenoseći fosforilnu skupinu fosfoenolpiruvata (PEP) na ADP, stvarajući ATP i piruvat. Reakcija je ireverzibilna, te predstavlja važno regulatorno mjesto u glikolizi. U ovom istraživanju piruvat-kinaza je izolirana iz aerobne Gram-pozitivne bakterije Bacillus subtillis, te pročišćena metodom afinitetne kromatografije do homogenosti. Enzimska rekacija se odvijala pri pH 7.5, uz prisustvo supstrata (PEP i ADP), te iona - K+ i Mg2+ koji s ADP-om tvori Mg2+-ADP kompleks, koji djeluje kao pravi substrat enzimu. Cilj istraživanja je bio utvrditi kinetičke parametre – Km i Vm piruvat-kinaze. Eksperimentalni podaci dobiveni spektrofotometrijskom metodom prikazani su Michealis-Menten modelom enzimske kinetike, te su pomoću linearizacijskih prikaza izračunate vrijednosti Km=1, 2138 mM, Vm=227, 062 µmol NADH/min/µg proteina za ADP, te Km=0, 9081 mM, Vm=97, 1125 µmol NADH/min/µg proteina za PEP. Navedni su rezultati dobiveni Hanes-Woolf linearizacijskim prikazom.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA