Naslov
Konstrukcija kromosomskog, točkastog mutanta bakterije Echerichia coli u C-terminalnom dijelu gena recC i njegova karakterizacija
(The construction of chromosomal point mutant strain of Escherichia coli in C-terminal domain of recC gene and its characterization)

Autori
Antolović, Vlatka

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
20.12

Godina
2007

Stranica
40

Mentor
Brčić-Kostić, Krunoslav ; Zgaga, Zoran

Neposredni voditelj
Vlašić, Ignacija

Ključne riječi
Echerichia coli; enzim RecBCD; homologna rekombinacija; zamjena gena
(Echerichia coli; gene replacement; homogous recombination; RecBCD enzyme)

Sažetak
Enzim RecBCD je glavni enzim inicijacije homologne rekombinacije u bakteriji E. coli. U svrhu određivanja uloge dijela RecC podjedinice u ukupnoj aktivnosti enzimskog kompleksa RecBCD konstruirala sam mutant u kojem je arginin na poziciji 839 proteina RecC zamjenjen glicinom. Za tu aminokiselinu pretpostavljeno je da se nalazi u direktnoj interakciji s jednolančanom DNA prilikom formiranja inicijalnog RecBCD-DNA kompleksa. Za prijenos točkaste mutacije s prethodno konstruiranog plazmida na kromosom bakterije E. coli koristila sam vektor za zamjenu gena pKOV. Nakon što sam potvrdila unešenu mutaciju, novokonstruirani soj IV391 karakterizirala sam određivanjem rekombinacijske sposobnosti, efikasnosti popravka lomova u DNA i nukleazne aktivnosti. Soj IV391 pokazao je rekombinacijsku proficijentnost, efikasan popravka DNA i nukleaznu aktivnost, što znači da uvedena mutacija nije rezultirala promjenom fenotipa. Međutim, metoda zamjene gena pomoću vektora pKOV pokazala se uspješnom, te se može i ubuduće koristiti za unošenje ciljanih, točkastih mutacija u kromosom bakterije E. coli.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA