Pregled bibliografske jedinice broj: 55110
Dokazivanje herpes simpleks virusa metodom lančane reakcije polimeraze
Dokazivanje herpes simpleks virusa metodom lančane reakcije polimeraze // 5. hrvatski kongres kliničke ikrobiologije i infektologije
Zagreb: Hrvatska medicinska akademija, 1999. (poster, domaća recenzija, sažetak, znanstveni)
CROSBI ID: 55110 Za ispravke kontaktirajte CROSBI podršku putem web obrasca
Naslov
Dokazivanje herpes simpleks virusa metodom lančane reakcije polimeraze
(Herpes simplex virus detection by polymerase chain reaction)
Autori
Merle Broketa, Martina ; Vince, Adriana ; Draženović, Vladimir ; Mlinarić-Galinović, Gordana
Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni
Izvornik
5. hrvatski kongres kliničke ikrobiologije i infektologije
/ - Zagreb : Hrvatska medicinska akademija, 1999
Skup
5. hrvatski kongres kliničke ikrobiologije i infektologije
Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 14.10.1999. - 16.10.1999
Vrsta sudjelovanja
Poster
Vrsta recenzije
Domaća recenzija
Ključne riječi
herpes simpleks virus; lančana reakcija polimeraze
(herpes simplex virus; polymerase chain reaction)
Sažetak
Ispitana je učinkovitost lančane reakcije polimeraze (PCR) i neradioaktivnog obilježavanja DNA hibrida u detekciji Herpes simpleks virusa (HSV) iz 34 klinička uzorka. HSV je u uzorcima detektiran standardnim virološkim tehnikama (DTFA metodom, izolacijom na staničnim kulturama i DTFA tipizacijom). Nakon što je iz staničnih kultura (HeLa i GMK) inficiranih sa HSV-1 i HSV-2 virusom, uz pomoć fenola i kloroforma izolirana DNA, specifični DNA fragment umnožen je PCR metodom pri čemu su korištene specifične oligonukleotidne početnice. Amplifikacijski produkti elektroforetski su razdvojeni na 2%-tnom agaroznom gelu i ukoliko su bili prisutni, obilježena je specifična HSV DNA proba. DNA proba je obilježena nasumičnim ubacivanjem digoksigeninom obilježenog deoksiuridin trifosfata (DIG-dUTP). Napravljeni su Southern transfer i dot- blot na pozitivno nabijenu najlonsku membranu (Boehringer Mannheim Nylon Membran). Nakon hibridizacije digoksigeninom obilježene DNA probe i ciljane DNA, hibridi su detektirani imunološko-enzimatskom metodom koja koristi konjugat protutijela i odgovarajuću enzimom kataliziranu reakciju bojenja. HSV DNA je uspješno umnožena i detektirana u supernatantu staničnih kultura inficiranih sa HSV, a nije detektirana u supernatantu kliničkih uzoraka, što se može objasniti širenjem virusa iz stanice u stanicu i činjenicom da ne dolazi do nakupljanja virusa u međustaničnim prostorima. HSV DNA detektirana je i direktno u dva klinička uzorka. U usporedbi sa standardnim virološkim metodama osjetljivost PCR reakcije bila je 92%, a specifičnost 100%.
Izvorni jezik
Hrvatski
Znanstvena područja
Kliničke medicinske znanosti
