Pregled bibliografske jedinice broj: 549586
Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom
Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom, 2011., diplomski rad, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
CROSBI ID: 549586 Za ispravke kontaktirajte CROSBI podršku putem web obrasca
Naslov
Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom
(Archaeal RNA polymerase subunit H: from cloning to investigation of interaction with atypical seryl-tRNA-synthetase)
Autori
Marasović, Mirela
Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad
Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet
Mjesto
Zagreb
Datum
04.07
Godina
2011
Stranica
77
Mentor
Weygand-Đurašević, Ivana
Neposredni voditelj
Jarić, Jelena
Ključne riječi
arheje; Methanothermobacter thermoautotrophicus; seril-tRNA-sintetaza metanogenog tipa; podjedinica H arhejske RNA-polimeraze; gel-retardacijska elektroforeza; supročišćavanje kompleksa na koloni
(archaea; Methanothermobacter thermoautotrophicus; methanogenic-type seryl-tRNA synthetase; RNA polymerase subunit H; gel-retardation electrophoresis; pull-down assay)
Sažetak
Interakcija podjedinice H arhejske RNA-polimeraze (RpoH) i seril-tRNA-sintetaze metanogenog tipa iz arheje Methanothermobacter thermautotrophicus (MtSerRS) detektirana je ranije u laboratoriju sustavom dvaju hibrida. Asocijacija MtSerRS:RpoH vrlo je zanimljiva budući da se radi o proteinima uključenim u proces koji je od vitalne važnosti za život stanice - ekspresiju gena. Funkcija arhejske RNA-polimeraze je transkripcija svih gena, dok MtSerRS aminoacilira tRNASer serinom te na taj način opskrbljuje ribosom supstratima za elongacijsku fazu translacije. U svrhu potvrde stvaranja kompleksa MtSerRS:RpoH tehnikama in vitro, bilo je potrebno pročistiti pojedine proteine u dovoljnim količinama. Zato je gen rpoH umnožen lančanom reakcijom polimeraze i ugrađen u vektor pod kontrolom jakog T7 promotora. Optimiran je sustav za prekomjernu ekspresiju i pročišćavanje RpoH iz bakterije E.coli, a zatim je RpoH pročišćen u preparativnoj količini. Također, prekomjerno je eksprimirana i pročišćena MtSerRS. Interakcija dvaju proteina istražena je gel-retardacijskom elektroforezom i supročišćavanjem kompleksa na koloni. Preliminarni rezultati dali su naznaku stvaranja kompleksa na nativnom gelu, međutim supročišćavanjem kompleksa na koloni asocijacija MtSerRS:RpoH nije detektirana.
Izvorni jezik
Hrvatski
Znanstvena područja
Kemija, Biologija
POVEZANOST RADA
Projekti:
119-0982913-1358 - Strukturna raznolikost seril-tRNA sintetaza i točnost biosinteze proteina (Rokov Plavec, Jasmina; Weygand Đurašević, Ivana, MZOS ) ( CroRIS)
Ustanove:
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
