Naslov
Optimiziranje metode za određivanje koncentracije malondialdehida u biološkim uzorcima
(Development of the method for determination of malondialdehyde in biological samples)

Autori
Polgar, Matija

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
30.09

Godina
2011

Stranica
41.

Mentor
Domijan, Ana-Marija

Ključne riječi
oksidacijski stres; lipidna peroksidacija; malondialdehid; HPLC; validacija; optimiziranje
(oxidative stress; lipid peroxidation; malondialdehyde; HPLC; validation; optimization)

Sažetak
Malondialdehid (MDA) u organizmu nastaje kao posljedica lipidne peroksidacije, odnosno kada reaktivne kisikove vrste razgrađuju višestruko nezasićene masne kiseline pri čemu nastaju razni aldehidi pa tako i MDA. Utvrđeno je da koncentracija MDA osim na lipidnu peroksidaciju ukazuje i na oksidativni stres organizma. Stoga je cilj ovog rada bio uvesti metodu koja bi pouzdano i precizno odredila koncentraciju MDA u različitim biološkim uzorcima. Metoda koja se najčešće koristi za određivanje koncentracije MDA u biološkom uzorku je derivatizacija MDA s 2-tiobarbiturnom kiselinom (TBA) pri čemu MDA reagira s dva ekvivalenta TBA i nastaje MDA-(TBA)2 kompleks. Stoga se u ovom radu koristila ta metoda, a kako bi se povećali osjetljivost i specifičnost metode upotrijebio se HPLC. Osim validacije metode, također su ispitani uvjeti pH i temperature prilikom pripreme uzoraka. Kako bi metodu validirali pripremljeni su razrjeđivanjem standardi MDA iz komercijalnog standarda MDA koncentracija 0, 152 ; 0, 304 ; 0, 607 ; 0, 759 ; 1, 517 ; 3, 035 μmol/L. Baždarni pravac dobiven HPLC-FL metodom bio je linearan s faktorom korelacije (R2) 0, 9982, kao i baždarni pravac za HPLC-UV/Vis metodu s faktorom korelacije (R2) 0, 9906. Prema očekivanjima usporedbom FL detektora i UV/Vis detektora zaključeno je kako je FL detektor 15 puta osjetljiviji za navedenu metodu te se u daljnjim ispitivanjima koristio HPLC-FL. Ponovljivost rezultata standarda MDA bila je manja od 8 % za svaki standard, a RSD reproducibilnosti iznosio je 3, 9 %. Točnost metode određena je korištenjem komercijalnog seruma poznate koncentracije, a izračunate vrijednosti kretale su se u rasponu od 91, 2 do 107, 6% Rezultati ispitivanja parametara pripreme uzoraka pokazali su da je uzorke dovoljno zagrijavati 30 minuta na 90 °C, te da je dovoljno koristiti 0, 1 % H3PO4. Na ovaj način smanjena je ekstremnost uvjeta pripreme uzoraka, a rezultati su bili ponovljivi i točni što govori u prilog tome kako je ova metoda primjenjiva za ispitivanje bioloških uzoraka.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Farmacija

POVEZANOST RADA