Naslov
Osobitosti pročišćavanja genomske DNA iz složenih bioloških suspenzija na metakrilatnim monolitnim kromatografskim nosačima
(Characterization of genomic DNA purification process from complex biological solutions using methacrylate monolithic chromatography media)

Autori
Ivančić-Jelečki, Jelena

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
22.12

Godina
2010

Stranica
116

Mentor
Forčić, Dubravko

Ključne riječi
kromatografska izolacija DNA; genomska DNA; monolitne kolone CIM
(DNA chromatographic isolation; genomic DNA; CIM monolithic column)

Sažetak
Kromatografija je jedna od najvažnijih metoda u izolaciji biomolekula, no zbog veličine i fizičke fragilnosti genomske DNA postavke za njezino uspješno kromatografsko pročišćavanje bitno su različite od onih u izolacijama drugih biomolekula, a sama odvajanja često nije moguće izvoditi na konvencionalnim nosačima. Metakrilatne kolone napravljene su od kontinuirane strukture (monolita), velikih pora. Omogućavaju brzi prijenos mase temeljen na konvektivnom toku pri niskom tlaku. Mehaničke sile koje se razvijaju tijekom postupka su relativno male. U radu je pokazano da je monolitni anionski izmjenjivač CIM DEAE pogodan kromatografski medij za izolaciju, pročišćavanje i koncentriranje genomske DNA iz niza raznovrsnih, složenih bioloških suspenzija (prokariotski i eukariotski stanični lizati, supernatant kulture stanica MRC-5 inficiranih virusom ospica, ljudska plazma, izolati plazmida, uzorci sakupljeni tijekom izolacije rekombinantnog proteina afinitetnom kromatografijom). Pri opisanim i karakteriziranim kromatografskim odvajanjima genomska DNA je bila prisutna samo u vrhu koji se pojavljuje tijekom elucije, a dobiveni izolati bili su dovoljne čistoće i kvalitete za molekularno-biološke analize kao što su detekcija i precizno određivanje količine DNA kvalitativnom i kvantitativnom lančanom reakcijom polimerazom.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA