Naslov
Optimiranje priprave i karakterizacija biokatalizatora za oksido-redukcije
(Optimization of isolation and characterization of biocatalyst for oxido-reduction)

Autori
Vukoje, Marina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Fakultet kemijskog inženjerstva i tehnologije

Mjesto
Zagreb

Datum
26.09

Godina
2011

Stranica
76

Mentor
Vasić-Rački, Đurđa

Ključne riječi
alkohol dehidrogenaza ; izolacija i pročišćavanje enzima ; gel kromatografija ; oksidacija ; N-Cbz-etanolamin
(alcohol dehydrogenase ; isolation and purification of enzymes ; gel chromatography ; oxidation ; N-Cbz-ethanolamine)

Sažetak
Alkohol dehidrogenaza (ADH) pripada skupini oksidoreduktaza, klasi enzima koji su odgovorni za reakcije biološke oksidacije i redukcije. ADH može katalizirati reverzibilnu oksidaciju alkohola u odgovarajući aldehid ili keton. U ovom radu opisan je proces izolacije i pročišćavanja alkohol dehidrogenaze (YADH) iz pekarskog kvasca (Saccharomyces cerevisiae) te reakcija oksidacije zaštićenog etanolamina (N-Cbz-etanolamina) koju katalizira enzim alkohol dehidrogenaza. Proces pročišćavanja enzima sastojao se od nekoliko koraka u kojima je provedeno centrifugiranje, taloženje (amonij sulfatom) i pročišćavanje gel filtracijskom kromatografijom na kolonama punjenim Sephadex G-50, Sephadex G-100 te Superdex 200 gelovima. Nakon svakog pojedinog koraka određene su koncentracije proteina i aktivnost YADH. Kinetika oksidacije etanolamina u smjeru nastajanja aldehida mjerena je metodom početnih reakcijskih brzina. Mjerenja su provedena na spektrofotometru, a iz dobivenih eksperimentalnih podataka procijenjeni su kinetički parametri u programskom paketu Scientist. Pokazalo se da N- Cbz-etanolamin inhibira alkohol dehidrogenazu kao supstrat u području visokih koncentracija. Uz pročišćeni enzim provedena je oksidacija etanolamina u kotlastom reaktoru pri pH 8, 6 i temperaturi 25 oC. Rezultati su pokazali da se koncentracija etanolamina smanjuje s vremenom i da je nakon četiri sata njegova konverzija iznosila 40%.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA