Naslov
Uspostava klonova stanica CAL 27 s trajno utišanim genom nm23-H2
(Formation of CAL 27 clones with permanently silenced nm23-H2 gene)

Autori
Barabaš, Ivana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
05.05

Godina
2011

Stranica
41

Mentor
Herak Bosnar, Maja

Ključne riječi
nm23-H2; lipofection; gene silencing; shRNA
(nm23-H2; lipofekcija; utišavanje gena; shRNA)

Sažetak
Gen nm23 je prvi otkriveni supresor metastaziranja. Do danas je otkriveno deset članova obitelji nm23 gena od kojih većina posjeduje aktivnost nukleozid-difosfatske kinaze. NDP kinaze kataliziraju prijenos fosfatne skupine između nukleozid difosfata i nukleozid trifosfata preko histidina na poziciji 118. Iz obitelji Nm23 najviše su proučavani Nm23-H1 i Nm23-H2. Uz spomenutu NDP kinaznu aktivnost ovi proteini posjeduju i aktivnost DNaze, transkripcijskog regulatora te proteinske kinaze. Pokazano je da Nm23 proteini sudjeluju u nizu važnih bioloških funkcija u stanici od proliferacije, diferencijacije i razvoja, do transporta vezikulama i apoptoze. Cilj ovog rada bio je stvoriti sustav s utišanim izražajem nm23-H2 u stanicama CAL 27 (stanice karcinoma pločastog epitela jezika). Za utišavanje nm23-H2 korišten je plazmid retrovirusnog porijekla, pSHAG-MAGIC2. Plazmid nosi umetnutu sekvencu za shRNA, koja utišava nm23-H2. Vektor smo transfecirali u stanice CAL 27 kako bismo dobili stabilne transfektante sa smanjenim izražajem Nm23-H2. Pozitivne klonove odabrali smo na temelju otpornosti na puromicin. Učinkovitost utišavanja odgovarajućih transfektanata provjerili smo metodom Western blot.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija, Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA