Naslov
Uloga Cys176 i Cys509 u inaktivaciji ljudske dipeptidil-peptidaze III tiolnim reagensima
(The role od Cys176 and Cys509 in the inactivation of human dipeptidyl peptidase III by thiol reagents)

Autori
Karačić, Zrinka

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
21.12

Godina
2010

Stranica
67 + VII

Mentor
Abramić, Marija ; Weygand-Đurašević, Ivana

Neposredni voditelj
Špoljarić, Jasminka

Ključne riječi
dipeptidil-peptidaza III / ciljana mutageneza / reaktivni cisteinski ostaci / tiolni reagensi
(dipeptidyl peptidase III / site-directed mutagenesis / reactive cysteine residues / thiol reagents)

Sažetak
Ljudska dipeptidil-peptidaza III (DPP III) je član obitelji metalopeptidaza M49, koja sudjeluje u unutarstaničnom katabolizmu proteina. Sve DPP III inaktivirane su tiolnim reagensima. Da bi se razjasnilo mehanizam inaktivacije ljudskog enzima (6 Cys u molekuli), ciljanom mutagenezom su pripremljeni mutirani oblici rekombinantne DPP III-His6, Cys176Ala i Cys509Ala, heterologno eksprimirani i pročišćeni afinitetnom kromatografijom. Analizom katalitičkih svojstava uočena je smanjena (15 puta) katalitička efikasnost (kcat/Km) mutanta C176A, u usporedbi s divljim tipom i C509A. Ispitan je utjecaj nekoliko tiolnih reagenasa na aktivnost sva tri enzimska oblika. Najjači inhibitor bio je organoživin spoj p- hidroksimerkuribenzoat (pHMB), koji je u submikromolarnoj koncentraciji značajno inaktivirao samo divlji tip i mutant C509A. Oba mutirana oblika bila su osjetljivija od divljeg tipa na inhibiciju s N-etilmaleimidom i s 4, 4'- ditiodipiridinom. Dobiveni rezultati ukazuju na ulogu Cys176 u inaktivaciji ljudske DPP III s pHMB, te na moguću zaštitnu ulogu Cys176 i Cys509 pri izloženosti enzima tiol- modificirajućim spojevima in vivo.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija

POVEZANOST RADA