Naslov
Biokemijska i strukturna karakterizacija dipeptidil- peptidaze III iz kvasca Saccharomyces cerevisiae
(Biochemical and structural characterization of dipeptidyl-peptidase III from yeast Saccharomyces cerevisiae)

Autori
Jajčanin Jozić, Nina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
11.04

Godina
2011

Stranica
128 + XII

Mentor
Abramić, Marija

Ključne riječi
dipeptidil-peptidaza III ; porodica M49 ; Saccharomyces cerevisiae ; reaktivni cisteinski ostaci ; usmjerena mutageneza
(dipeptidyl-peptidase III ; M49 family ; Saccharomyces cerevisiae ; reactive cysteine residues ; site-directed mutagenesis)

Sažetak
Dipeptidil-peptidaze III (DPP III) su enzimi uključeni u intracelularni katabolizam proteina, a čine zasebnu porodicu cink-metalopeptidaza (M49). Njihov katalitički mehanizam i strukturna svojstva još su nedovoljno istraženi. Sve DPP III inhibirane su tiolnim reagensima. S ciljem doprinosa poznavanju katalitičkih svojstava i prostorne građe metalopeptidaza porodice M49, kloniran je i prekomjerno eksprimiran gen za DPP III kvasca Saccharomyces cerevisiae, a protein pročišćen i biokemijski okarakteriziran. Nadalje, ciljanom mutagenezom pojedinačno je zamijenjeno svih 5 ostataka cisteina, te 7 evolucijski visoko očuvanih aminokiselinskih ostataka. Usporedbom katalitičkih svojstava ''divljeg tipa'' i mutiranih proteina ustanovljeno je da su Cys639 i Cys518 odgovorni za inhibiciju sulfhidrilnim reagensima, a Cys130 za dimerizaciju enzima. U vezanju peptidnog supstrata sudjeluju Glu461, Asp381 i Arg582, dok Tyr327 i His578 doprinose stabilizaciji prijelaznog stanja. Najveći pad katalitičke efikasnosti (kcat/Km), od čak 25 000 puta, uočen je za mutant E461Q, što ukazuje na esencijalnu ulogu Glu461 u katalitičkom mehanizmu. Kroz interdisciplinarnu suradnju, mutant C130S je kristaliziran i razjašnjena mu je 3-D struktura.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija

POVEZANOST RADA