Naslov
Neuroimunomodulacijska svojstva dipeptidil-peptidaze IV u modelu upalne bolesti crijeva u miša
(Neuroimmunomodulative Properties of Dipeptidyl Peptidase IV in a Model of Inflammatory Bowel Disease in Mice)

Autori
Batičić, Lara

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Medicinski fakultet

Mjesto
Rijeka

Datum
22.10

Godina
2010

Stranica
220

Mentor
Varljen, Jadranka ; Kučić, Natalia

Ključne riječi
Crohnova bolest; Dipeptidil-peptidaza IV (DPP IV/CD26); Interleukin-6; Interleukin 10; Molekula CD26; Upalne bolesti crijeva; Pokusni model kolitisa; Neuropeptid Y; Vazoaktivni intestinalni peptid.
(Crohn’s disease; Dipeptidyl-peptidase IV (DPP IV/CD26); CD26 molecule; Interleukin-6; Interleukin-10; Neuropeptide Y; Vasoactive intestinal peptide; Inflammatory bowel diseases; Experimental colitis.)

Sažetak
Uvod. Upalne bolesti crijeva grupa su kroničnih autoimunih bolesti gastrointestinalnog sustava nedovoljno poznate etiopatologije. Dosadašnja istraživanja ukazuju na povezanost dipeptidil-peptidaze IV (DPP IV/CD26) i molekularnih mehanizama uključenih u procese nastanka i cijeljenja upale. Pokazano je da ova molekula ima vrlo važnu ulogu u razgradnji neuroimunoendokrinih medijatora uključenih u održavanje integriteta sluznice, kao i nastanak upalnih promjena. Cilj istraživanja. Ovo se istraživanje temelji na pretpostavci da DPP IV/CD26 ima značajnu neuroimunomodulacijsku ulogu, obzirom da je biološka aktivnost mnogih neuropeptida i interleukina pod izravnim utjecajem ove molekule. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati povezanost DPP IV/CD26 i Crohnove bolesti, praćenjem profila medijatora neuroimunološkog odgovora tijekom nastanka i cijeljenja kemijski induciranog kolitisa u CD26 deficijentnom i divljem tipu miša. Materijal i metode. Model Crohnove bolesti u miša induciran je rektalnom, intraluminalnom aplikacijom etanolne otopine trinitrobenzensulfonske kiseline (TNBS). Kako bi ispitali in vivo učinke DPP IV/CD26 u razvoju i cijeljenju upalnih promjena, kolitis je izazvan u CD26 deficijentnom (CD26-/-) te divljem tipu miša soja C57BL/6, istog spola i dobi. Kontrolne skupine predstavljale su životinje odgovarajućeg soja kojima je pod istim uvjetima rektalno aplicirana sterilna fiziološka otopina, odnosno otopina etanola. Razvoj, intenzitet i cijeljenje kolitisa praćeno je u različitim vremenskim intervalima temeljem kliničkih i histoloških parametara na sistemskoj i lokalnoj razini, u oba soja pokusnih životinja. Stupanj oštećenja debelog crijeva pratio se određivanjem makroskopskih promjena, patohistološkom analizom, određivanjem mikroskopskog indeksa oštećenja te histomorfometrijskom analizom parafinskih tkivnih rezova. Aktivnost DPP IV/CD26 u C57BL/6 soja miša te aktivnost DPP IV/CD26-sličnih enzima u CD26-/- životinja u serumu, mozgu i debelom crijevu određivana je spektrofotometrijski. Proteinski izražaj DPP IV/CD26 u mozgu i debelom crijevu C57BL/6 životinja određivan je tehnikom Western blot. Sistemske (serumske) i lokalne (u ekstraktima mozga i debelog crijeva) koncentracije neuropeptida Y (NPY) i vazoaktivnog intestinalnog peptida (VIP) određivane su specifičnim imunoenzimskim testovima (ELISA), a njihov proteinski izražaj u mozgu i debelom crijevu tehnikom Western blot. Koncentracije proupalnog interleukina-6 i protuupalnog interleukina-10 u cirkulaciji te u ekstraktima navedenih tkiva također su određivane specifičnim imunoenzimskim testovima (ELISA). Rezultati. Tijekom razvoja kemijski induciranog TNBS-kolitisa u C57BL/6 i CD26-/- soju životinja dolazi do kliničke manifestacije bolesti, statistički značajnih promjena tjelesne mase, mase jetre i slezene, makroskopskih, patohistoloških i histomorfometrijskih promjena debelog crijeva uz značajan porast mikroskopskog indeksa oštećenja, čime je potvrđena uspostava modela kolitisa. Upalne promjene u obliku ulceracija u CD26-/- životinja bile su lokalizirane na površinski sloj, uz određeni broj žarišnih transmuralnih promjena. Za razliku od CD26-/-, kod C57BL/6 životinja prisutna je difuzna upala koja zahvaća cijelu cirkumferenciju crijeva. Kod ciljanih imunobiokemijskih parametara (enzimske aktivnosti, koncentracije neuropeptida, koncentracije interleukina) utvrđene su statistički značajne promjene i na sistemskoj i na lokalnoj razini u oba soja pokusnih životinja kojima je induciran kolitis u odnosu na kontrolne skupine, ali i između ispitivanih sojeva životinja. Aktivnost DPP IV u C57BL/6 životinja statistički je značajno snižena u serumu, mozgu i debelom crijevu životinja kojima je induciran kolitis, u odnosu na kontrolnu skupinu. U akutnoj fazi kolitsa, u CD26-/- životinjama utvrđene su statistički značajne razlike u promjenama koncentracija NPY-a i VIP-a te IL-6 i IL-10 u cirkulaciji i na lokalnoj razini (u mozgu i debelom crijevu), u odnosu na skupine C57BL/6 životinja. Koncentracije protuupalnih medijatora IL-10 i VIP-a u CD26-/- životinja statistički su značajno više i sistemski i lokalno, dok C57BL/6 životinje sadrže veće koncentracije NPY-a u mozgu i debelom crijevu. Zaključak. TNBS-kolitis (engl. Crohn-like colitis) uspostavljen je u oba soja miša, što je potvrđeno statistički značajnim promjenama kliničkih i histoloških parametara na lokalnoj i sistemskoj razini, s odgovarajućim razlikama u patohistološkim upalnim promjenama. Tijekom razvoja i cijeljenja kolitisa u CD26-/- životinja dolazi do statistički značajnih promjena sistemskih i tkivnih koncentracija NPY-a, VIP-a, IL-6 i IL-10 u odnosu na C57BL/6 životinje. Dobiveni rezultati ukazuju da se upalne promjene na razini debelog crijeva reflektiraju promjenama ispitivanih imunobiokemijskih parametara u mozgu. Rezultati ovog istraživanja ukazuju da DPP IV/CD26 posjeduje i neuroimunomodulacijska svojstva tijekom razvoja i cijeljenja upalne bolesti crijeva u miša.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA