Naslov
Uloga NKG2D u razvoju, homeostazi i fektorskim funkcijama NK stanica
(The role of NKG2D in development, homeostasis and effector functions of NK cells)

Autori
Zafirova, Biljana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Medicinski fakultet u Rijeci

Mjesto
Rijeka

Datum
28.09

Godina
2010

Stranica
151

Mentor
Polić, Bojan

Ključne riječi
Embrionalne matične stanice; Ciljana mutacija gena; Cre/loxP rekombinacijski sustav; NKG2D; NKG2D deficitni miš; Razvoj NK stanica
(Embryonic stem cells; Gene targeting; Cre/loxP recombination system; NK cell development; NKG2D; NKG2D deficient mice)

Sažetak
Cilj istraživanja: NKG2D aktivacijski receptor je izražen na svim NK stanicama, gd T limfocitima, aktiviranim i memorijskim T limfocitima i makrofazima. Spada u receptore C-tipa slične lektinima. NKG2D je bitan aktivacijski receptor NK stanica djelujući kao sensor kojim NK stanice prepoznaju stanice izložene stresu, kao što su virusom inficirane ili transformirane stanice koje ispoljavaju NKG2D ligande. Cilj ovog rada je inaktivirati mišji NKG2D receptor kako bi mogli izučavati njegovu ulogu u razvoju, aktivaciji i homeostazi NK stanica in vitro i in vivo. Stoga smo razvili mišji soj u kojem ne dolazi do izražaja NKG2D receptora uvođenjem mutacije u Klrk1 gen. Iako je NKG2D izražen i na prekursorima NK stanica (NKP) nije poznato ima li ovaj receptor ulogu i u razvoju NK stanica. Glavni cilj doktorskog rada je istražiti moguće posljedice nedostatka NKG2D receptora na razvoj, homeostazu i efektorske funkcije NK stanica. Metode: NKG2D deficitnog miša sam napravila ciljanom mutacijom Klrk1 gena u embrionalnim matičnim stanicama koje su izolirane iz C56BL/6 mišjeg soja. Protočnom citometrijom i raznim funkcionalnim testovima sam analizirala razvojne subpopulacije NK stanica. Testirala sam i efektorske finkcije NKG2D deficitnih NK stanica u modelu MCMV infekcije. Rezultati: Napravila sam vektor za ciljanu mutaciju Klrk1 lokusa koji je i sekvencioniran. Bruce4 embrionalne matične stanice sam transfecirala i pikirala nakon pozitivne (G418) i negativne (ganciklovirom) selekcije, te sam ih analizirala na prisutnost homolognih rekombinanti Southern blot metodom. Odabrala sam dva klona koja su prolazno transfecirana plazmidom pIC-Cre koji producira Cre rekombinazu kako bi se izbacila neoR kazeta. G418 osjetljive kolonije su mikroinjicirane u blastociste čime je u konačnici napravljan NKG2D deficitni mišji soj. U ovom radu pokazujem dvojnu ulogu NKG2D receptora u fiziologiji NK stanica, od kojih je jedna regulatorna djelujući na razvoj, homeostazu i preživljavanje NK stanica, dok je druga efektorska funkcija. Zamijećene posljedice nedostatka NKG2D receptora su: a) brža proliferacija NK stanica, b) promjena veličine subpopulacija NK stanica i c) pojačana podložnost apoptozi. Kako je i očekivano, NKG2D deficitne NK stanice su znatno slabije aktivirane tumorskim stanicama koje ispoljavaju NKG2D ligande, čime je potvrđena njegova važna uloga u efektorskim funkcijama. Klrk1 -/- miševi pokazuju veću NK posredovanu otpornost na MCMV infekciju što je posljedica nemogućnosti regulacije NK stanica. Zaključak: Ovo istraživanje otkriva novu, dosad nepoznatu ulogu NKG2D receptora u fiziologiji NK stanica. Prvi put je pokazano koristeći genetički modificirani mišji model da NKG2D ima važnu regulatornu ulogu u razvoju NK stanica, kontrolirajući njihovu proliferaciju homeostazu i preživljenje.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA