Naslov
Utjecaj mutacija u ribosomskom mjestu A na bakterijski rast i rezistenciju na aminoglikozide
(Effects of ribosomal A site mutations on bacterial growth and aminoglycoside resistance)

Autori
Plečko, Andrea

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
09.07

Godina
2010

Stranica
79

Mentor
Maravić Vlahoviček, Gordana

Ključne riječi
aminoglikozidi; mutacija; ribosom; otpornost; mjesto A
(aminoglycosides; mutation; ribosome; resistance; A site)

Sažetak
Ribosomi su nukleoproteinski kompleksi čija je funkcija u stanici prevođenje slijeda nukleotida u mRNA u slijed aminokiselina tj. protein. Za pravilno čitanje genetičkog koda zadužen je dekodirajući centar male ribosomske podjedinice u čemu glavnu ulogu ima 16S rRNA. Aminoglikozidi svoje djelovanje ostvaruju tako da se vežu unutar A-mjesta 16S rRNA te onemogućavaju ribosomu prepoznavanje ispravno sparenih kodona i antikodona. Tako dovode do ugradnje pogrešnih aminokiselina u proteine, oštećenja i smrti bakterijskih stanica. Cilj ovog rada je istažiti utjecaj mutacija evolucijski očuvanih baza unutar A-mjesta 16S rRNA na rast bakterija i rezistenciju na aminoglikozide. PCR mutagenezom dobiven je fragment rrnB operona s mutacijama C1402A, G1405C i A1500U koji je potom kloniran u plazmid pLK-35. Plazmidom pLK-35 transformirane su stanice E. coli MC338 s delecijama u svih 7 operona za rRNA. Rast mutanata je praćen u LB mediju uz dodatak ampicilina na 37°C te su određena generacijska vremena. Osjetljivost mutanata na aminoglikozide utvrđena je određivanjem minimalne inhibitorne koncentracije kanamicina. Rezultati pokazuju da mutacije G1405C i A1500U dovode do rezistencije na kanamicin iz čega zaključujemo da su G1405 i A1500 ključni za vezanje kanamicina na 16S rRNA. Niti jedna od proučavanih mutacija ne utječe značajno na brzinu rasta bakterija, što znači da zamjena baza na položajima 1402, 1405 i 1500 ne utječe na ulogu dekodirajućeg centra ribosoma u translaciji. Dobiveni mutantni sojevi E. coli daju temelj za daljnja istraživanja metil-transferaza iz porodica Arm i Kam te za dizajn specifičnih inhibitora koji bi spriječili bakterijsku rezistenciju na aminoglikozidne antibiotike.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA