Naslov
Izoelektrično fokusiranje proteina stanične stijenke kvasca Saccharomyces cerevisiae
(Isoelectric focusing of Saccharomyces cerevisiae cell wall proteins)

Autori
Gradvol, Vedran

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Prehrambeno-tehnološki fakultet Osijek

Mjesto
Osijek

Datum
30.09

Godina
2009

Stranica
39

Mentor
Strelec, Ivica

Ključne riječi
Saccharomyces cerevisiae; stanicna stijenka; kovalentno vezani proteini; nekovalentno vezani proteini; izoelektricno fokusiranje; imunokemijska detekcija
(Saccharomyces cerevisiae; cell wall; covalently linked proteins; noncovalently linked proteins; isoelectric focusing; immunochemical detection)

Sažetak
U ovom radu su nekovalentno i kovalentno vezani proteini stanicne stijenke razlicitih mutanata kvasca koji su se razlikovali u proteinima stanicne stijenke ekstrahirani pomocu 20 mM NaOH i 20 IU/μL beta-1, 3-glukanaze, nakon cega je uslijedilo izoelektricno fokusiranje u gradijentu pH 3-10, te nespecificna i specificna detekcija proteina. Nespecificna detekcija proteina je provedena bojanjem srebrom, a specificna detekcija imunokemijski nakon kapilarno-difuzijskog prijenosa proteina na PVDF membranu. Nespecificnom detekcijom proteina htjelo se ustanoviti da li postoje razlike u kolicini ekstrahiranih proteina i rasporedu proteinskih vrpci razlicitih mutanata kvasca, a imunokemijskom detekcijom se htjelo utvrditi prisustvo nekovalentno vezanih proteina Scw4p, Scw10p, Scw11p i Bgl2p oznacenih hemaglutininskim epitopom. Iz provedenog izoelektricnog fokusiranja, odnosno nakon nespecificne detekcije bojanjem srebrom mogu se uociti razlike u ekspresiji proteina pojedinih mutanata kvasca u vidu razlika u intenzitetu pojedinih proteinskih vrpci, dok istovremeno nema evidentnih razlika u samom rasporedu proteinskih vrpci. Prilikom razdjeljivanja proteina došlo je i do taloženja proteina na mjestu nanošenja što se otklonilo dodatkom Tritona X-100 u uzorke ekstrahiranih proteina. Imunokemijskom detekcijom pokazano je nespecificno vezanje proteina što je vjerojatno uzrokovano pucanjem stanica kvasca prilikom ekstrakcije i nespecificne reakcije unutarstanicnih proteina sa HAprotutijelima.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija, Prehrambena tehnologija

POVEZANOST RADA