Naslov
Uloga aminokiseline F385 u određivanju supstratne specifičnosti enzima auksin-amidohidrolaze iz kineskog kupusa (Brassica rapa L.)
(The role of the amino acid F385 in the determination of a substrate specificity of an auxin amidohydrolase from chinese cabbage (Brassica rapa L.))

Autori
Kapustić, Ivana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
08.07

Godina
2010

Stranica
72

Mentor
Salopek-Sondi, Branka ; Weygand-Đurašević, Ivana

Ključne riječi
Auksin-amidohidrolaza ; Brassica rapa L. ; enzimska aktivnost ; enzim BrILL2 divlji tip ; mutant BrILL2F385L
(Auxin amidohydrolase ; Brassica rapa L. ; enzyme activity ; enzyme BrILL2 wild type ; mutant BrILL2F385L)

Sažetak
Auksin-amidohidrolaze su grupa enzima koji hidroliziraju aminokiselinske konjugate auksina oslobađajući aktivne spojeve te sudjelujući na taj način u homeostazi biljnih hormona auksina. U ovom diplomskom radu istražena je uloga aminokiseline F385 koja je dio aktivnog mjesta enzima auksin- amidohidrolaze iz kineskog kupusa (Brassica rapa L.), BrILL2. U tu svrhu pripremljen je mutant BrILL2F385L metodom usmjerene mutageneze, nakon čega su proteini - divlji tip i mutant, proizvedeni prekomjernom ekspresijom u E. coli i pročišćeni afinitetnom kromatografijom pomoću Ni- NTA agaroze. Sačuvanost strukture u mutanta s obzirom na divlji tip potvđena je metodom cirkularnog dikroizma. Određena je specifična aktivnost enzima prema tri različita supstrata (IAA-Ala, IBA-Ala i IPA-Ala), gdje su produkti reakcije analizirani metodom tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti (HPLC). Mutirani enzim znatno je izgubio aktivnost u usporedbi s divljim tipom, prema sva tri supstrata. Rezultat upućuje da je aminokiselina F385 enzima BrILL2 zaslužna za aktivnost, a ne za specifičnost kako se pretpostavilo. Provedena je bioinformatička analiza proteina BrILL2, te predložen model 3D strukture koristeći kao predložak kristalnu strukturu IAA-amidohidrolaze iz biljke Arabidopsis thaliana (pdb: 1xmb).

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija

POVEZANOST RADA