Naslov
Pročišćavanje i djelomična karakterizacija rekombinantne ljudske dipeptidil-peptidaze III
(Purification and partial characterization of recombinant human dipeptidyl-peptidase III)

Autori
Andrejević, Marina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
07.06

Godina
2010

Stranica
40

Mentor
Abramić, Marija

Neposredni voditelj
Vukelić, Bojana

Ključne riječi
dipeptidil-peptidaza III ; porodica M49 ; metalopeptidaza
(dipeptidyl-peptidase III ; M49 family ; metallopeptidase)

Sažetak
Ljudska dipeptidil-peptidaza III (DPP III), član porodice metalopeptidaza M49, enzim je s ulogom u intracelularnom katabolizmu proteina. S ciljem istraživanja uloge visoko sačuvanog ostatka Asn406, u ovom diplomskom radu su proizvedeni divlji tip DPP III i mutirani oblik N406S prekomjernom ekspresijom u bakteriji Escherichia coli transformiranoj plazmidom koji je sadržavao cDNA za ljudsku DPP III s privjeskom od 6 His. Nakon pročišćavanja afinitetnom kromatografijom, rekombinantnim proteinima je određena molekulska masa (81 kDa) SDS-elektroforezom, specifična aktivnost za hidrolizu kromogenog supstrata Arg-Arg-2-naftilamida (37, 81 jmg-1 za divlji tip, 14, 52 jmg-1 za mutant N406S), optimalni pH (8, 6) i temperatura djelovanja (37 °C), te temperaturna stabilnost (do 37 °C za divlji tip, do 30 °C za N406S). Ustanovljena je inhibicija obaju enzimskih oblika kelatorima metala i sulfhidrilnim reagensom p-hidroksimerkuribenzoatom, te selektivnost za supstrat Arg-Arg-2-naftilamid. Rezultati ukazuju na važnost Asn406 za postizanje pune katalitičke aktivnosti i za termičku stabilnost ljudske DPP III.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA