ࡱ>  7A23456p;~7 bjbjUU .F7|7|l,,,,,,,@^^^^dR_d@Ȭ2`^ a a a a a a aèŨŨŨŨŨŨ$ l, a a a a a,, a a a , a, aè aèğV@,, a` `Sں@Z^*+ 0Ȭ7x@@,,,,SVEU ILI`TE U ZAGREBU MEDICINSKI FAKULTET JO`KO BEZI ULOGA DNA-ANALIZE PROTO NOM CITOMETRIJOM U PROCJENI POJAVNOSTI METASTAZA U PAZU`NIM LIMFNIM VOROVIMA KOD MINIMALNIH INVAZIVNIH (T1a,b) KARCINOMA DOJKE Magistarski rad Zagreb, prosinac 2009. Rad je izraen na Klini kom zavodu za patologiju, sudsku medicinu i citologiju Klini kog bolni kog centra Split. Voditeljica rada: prof.dr.sc. Snje~ana Tomi Redni broj rada: _______________________________________ Mojim roditeljima Zahvaljujem Snje~i, Ivani, Vesni B., Vesni ., Jeleni, }aklini i Petru SADR}AJ 1.UVOD 1 1.1. Minimalni invazivni karcinom dojke 1 1.2. Epidemioloake i klini ke osobitosti minimalnih invazivnih 1 karcinoma dojke 1.3. Patohistoloake osobitosti minimalnih invazivnih karcinoma dojke 3 1.4. U estalost metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod T1a,b- 5 karcinoma dojke 1.4.1. Odnos klini ko-patoloakih osobitosti tumora i pojavnosti metastaza 6 u regionalnim limfnim vorovima kod T1a,b-karcinoma dojke 1.4.2. Odnos imbenika dobivenih DNA-analizom tumorskog tkiva 8 proto nom citometrijom i pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima kod T1a,b-karcinoma dojke 1.5. Pazuana disekcija kod T1a,b-karcinoma dojke 9 1.6. Proto na citometrija 11 1.6.1. Ploidnost i stani ni ciklus 11 1.6.2. Interpretacija DNA-histograma 12 1.6.3. Procjena stani ne populacije u S-fazi 14 1.6.4. Procjena kvalitete DNA-histograma i naj eae analiti ke greake 15 1.7. Molekularna osnova aneuploidnosti 17 2. CILJ ISTRA}IVANJA 22 3. ISPITANICI I POSTUPCI 23 3.1. Ispitanici 23 3.2. Postupci 23 4. REZULTATI 28 5. RASPRAVA 43 6. ZAKLJU CI 52 7. SA}ETAK 54 8. SUMMARY 56 9. LITERATURA 58 10. }IVOTOPIS 69 POPIS KRATICA I OZNAKA 2C  diploidan DNA-histogram CD 34 od engl. clusters of differentiation 34 CENP-E centromerni protein E CV koeficijent varijacije DCIS od engl. ductal carcinoma in situ; neinvazivni duktalni karcinom dojke DI DNA-indeks DNA dezoksiribonukleinska kiselina ER estrogenski receptor G0, G1, S, G2, M  faze stani nog ciklusa LCIS  od engl. lobular carcinoma in situ; neinvazivni lobularni karcinom dojke 2N  oznaka za diploidan sadr~aj DNA 4N  oznaka za tetraploidan sadr~aj DNA PI  proliferacijski indeks PR  progesteronski receptor PBS  otopina fosfatnog pufera Tis  in situ karcinom dojke po TNM klasifikaciji Tmic  mikroinvazivni karcinom dojke po TNM klasifikaciji T1a  invazivni karcinom dojke najveeg promjera ( 0,5 cm po TNM klasifikaciji T1b  invazivni karcinom dojke najveeg promjera 0,6-1 cm po TNM klasifikaciji T1a,b  invazivni karcinom dojke najveeg promjera (1 cm po TNM klasifikaciji T2  invazivni karcinom dojke najveeg promjera (2 cm po TNM klasifikaciji T3  invazivni karcinom dojke najveeg promjera <5 cm po TNM klasifikaciji 1.UVOD 1.1. Minimalni invazivni karcinom dojke Pojam minimalni karcinom dojke prvi su upotrijebili Gallager i Martin 1971., u svrhu racionalizacije nazivlja za niz razli itih oblika karcinoma, pri emu je taj pojam prema njihovoj definiciji uklju ivao neinvazivne duktalne (DCIS) i lobularne (LCIS) karcinome bilo koje dimenzije te male invazivne karcinome dojke iji je najvei promjer manji od 0,5 cm. Autori su ~eljeli izdvojiti skupinu karcinoma dojke s dobrom prognozom unutar aire skupine, tzv. ranog karcinoma dojke, koja je uklju ivala karcinome s razli itom prognozom (1). Hartmann 1984. godine airi pojam minimalnog karcinoma uklju ivai uz gore navedene promjene i invazivne karcinome promjera 0,5-1 cm (2). Neki autori u ovu skupinu karcinoma uklju uju i invazivne karcinome s odli nom prognozom (mucinozni, tubularni, kribriformni karcinom) bez obzira na njihov promjer (3). Prema TNM klasifikaciji pojam minimalni karcinom dojke obuhvaa sve neinvazivne karcinome (Tis), mikroinvazivne karcinome (Tmic), invazivne karcinome iji je najvei promjer 0,1-0,5 cm (T1a) te invazivne karcinome iji je najvei promjer 0,6-1 cm (T1b) (4). Pojam minimalni invazivni karcinom dojke obuhvaa invazivne karcinome dojke bilo kojeg histoloakog tipa iji je najvei promjer ( 1cm, te bi prema TNM klasifikaciji obuhvaao Tmic i T1a,b-karcinome dojke (4,5). 1.2. Epidemioloake i klini ke osobitosti minimalnih invazivnih karcinoma dojke Uvoenje programa ranog otkrivanja raka dojke, osobito mamografskog probira, dovelo je do dramati nih promjena brojnih karakteristika karcinoma dojke. Meu najva~nijim su poveanje broja novootkrivenih neinvazivnih karcinoma, kao i smanjenje prosje ne veli ine invazivnih karcinoma dojke. Postotak otkrivenih neinvazivnih duktalnih karcinoma (DCIS) je narastao od 3-5% svih novootkrivenih karcinoma u razdoblju prije probira na 25-30% svih novootkrivenih karcinoma dojke u razdoblju nakon uvoenja mamografskog probira (1,6,7). Prije uvoenja probira u zapadnim zemljama minimalni invazivni karcinomi dojke (T1a,b) su sa injavali manje od 10% svih otkrivenih invazivnih karcinoma. Danas se taj postotak u zemljama s razvijenim sustavom probira kree od 25 do 40%, pri emu se vjeruje da e u dogledno vrijeme medijan veli ine svih invazivnih karcinoma iznositi 1 cm (8-10). `vedska Two-County studija je uz prikaz smanjenja mortaliteta od raka dojke za 30% u skupini ~ena obuhvaenih mamografskim probirom prikazala i poveanje relativnog broja novootkrivenih T1a,b-karcinoma ija je proporcija iznosila 34% svih probirom otkrivenih karcinoma (11). Gotovo identi an postotak od 35% T1a,b-karcinoma meu karcinomima otkrivenim probirom bilje~i se u Francuskoj (12). Postotak otkrivenih T1a,b-karcinoma u centrima mamografskog probira u SAD-u 90-tih je godina iznosio oko 25% svih otkrivenih karcinoma dojke, a isti postotak nalazimo i u nekim centrima probira u Velikoj Britaniji (10,13-16). Najvei postotak od 40% T1a,b-karcinoma, meu karcinomima otkrivenim probirom, zabilje~en je u Finskoj (17). U Hrvatskoj raspola~emo podatkom iz splitskog podru ja, gdje u estalost T1a,b-karcinoma iznosi 15% svih otkrivenih karcinoma dojke, prema studiji provedenoj prije uvoenja nacionalnog mamografskog probira (18). Temeljni princip programa ranog otkrivanja raka dojke, odnosno mamografskog probira kao metode izbora, je shvaanje karcinoma dojke kao progresivne bolesti, pri emu se smanjenjem pojavnosti tumora u uznapredovalim klini kim stadijima zna ajno smanjuje mortalitet od ove bolesti. Korisni u inak probira se ostvaruje putem utjecaja na klasi ne prognosti ke imbenike raka dojke: veli inu tumora, histoloaki stupanj diferencijacije te status limfnih vorova. Klju an je u inak mamografskog probira u prevenciji rasta tumora prema veim i letalnijim oblicima, otkrivajui i odstranjujui ih dok su joa mali i bez metastaza u regionalne limfne vorove (19). Klini ki pokusi kojima se procjenjivala u inkovitost mamografskog probira potvruju gore navedene injenice, bilje~ei smanjenje mortaliteta od raka dojke za 20-39% medu ~enama starijim od 50 godina podvrgnutim mamografskom probiru (20,21). Podaci koji se odnose na pre~ivljenje i rizik povrata bolesti kod T1a,b- karcinoma govore o odli noj prognozi bolesnika s ovim tumorima. Petogodianje pre~ivljenje bolesnika s T1a,b-karcinomima koji su bez metastaza u regionalnim limfnim vorovima kree se u rasponu od 91 do 97% (8,14,22,23). Vjerojatnost da e bolesnici biti bez petogodianjeg lokalnog povrata bolesti (engl. relapse-free survival) iznosi od 92 do 98% za ovu skupinu karcinoma (14,24,25). Kod du~eg praenja kroz razdoblje od 10 do 20 godina udio bolesnika bez lokalnog povrata bolesti se u veini studija kree u rasponu od 80 do 90% (26). Ovi podaci kazuju da je kod veine bolesnika s T1a,b-karcinomima izlje enje mogue koriatenjem samo lokalnog, kirurakog lije enja. Ipak, mala skupina ovih bolesnika do~ivi recidiv ili umre od diseminirane bolesti, te je utvrivanje skupine bolesnika s loaijom prognozom od presudne va~nosti za prosuivanje potrebe za sistemskom terapijom (8). Najva~niji prognosti ki imbenik u tom smislu je status limfnih vorova (N0/N1), pri emu veina studija pokazuje smanjenje ukupnog pre~ivljenja i poveanje vjerojatnosti povrata bolesti kod bolesnika s T1a,bN1- karcinomima dojke (20,27,28,29). Kada se status limfnih vorova kombinira s dobi bolesnica najbolju prognozu, s obzirom na povrat bolesti, ima skupina postmenopauzalnih bolesnica s T1a,bN0-tumorima, dok je kod T1a,bN1-tumora prognoza ista bez obzira na dob (30). Ostali imbenici udru~eni s loaijom prognozom kod T1a,b-karcinoma su veli ina tumora (T1b-karcinomi imaju loaiju prognozu u odnosu na T1a-karcinome), visoki histoloaki gradus, visoki gradus jezgre, postojanje peritumoralne limfokapilarne invazije, na in otkrivanja tumora (palpabilni tumori imaju loaiju prognozu u odnosu na nepalpabilne, mamografski otkrivene tumore) te postojanje ekstenzivne neinvazivne komponente visokog histoloakog gradusa (8). Tako je National surgical adjuvant breast and bowel project (NSABP) protokol B-21 koji je prou avao rezultate dugogodianjeg praenja skupine od 1259 T1a,bN0- karcinoma pokazao postojanje veeg rizika za povrat bolesti i manje pre~ivljenje bez bolesti kod bolesnika sa karcinomima visokog gradusa jezgre, dok je limfokapilarna invazija bila jedini nezavisni prognosti ki imbenik koji je utjecao na ukupno pre~ivljenje (31). Bolesnici s malim invazivnim karcinomima koji izra~avaju bazalni imunofenotip, odnosno pokazuju izra~enost citokeratinskih biljega karakteristi nih za bazalne-mioepitelne stanice (citokeratini 5, 6 i 14), imaju loaije pre~ivljenje od onih s T1a,b-karcinomima koji ne izra~avaju bazalne imunobiljege (32). 1.3. Patohistoloake osobitosti minimalnih invazivnih karcinoma dojke T1a,b-karcinomi dojke posebice oni nepalpabilni, otkriveni mamografskim probirom, imaju odreene patohistoloake karakteristike koje ih razlikuju od karcinoma veih promjera (8). Jedna od najva~nijih razlika je vea proporcija histoloakih tipova karcinoma s odli nom prognozom, kao ato su tubularni, kribriformni, mucinozni i tubulolobularni karcinomi (23,33). Proporcija ovih karcinoma zna ajno opada pri veli ini tumora > 1 cm. Dva su mogua objaanjenja ove pojave: tubularni, kribriformni, mucinozni i tubulolobularni karcinomi rijetko rastu iznad promjera od 1 cm, ili ovi karcinomi ulaze u proces dediferencijacije kako se pribli~avaju veli ini od 1 cm. Zadnja tvrdnja je vjerojatnija budui da se uo ava porast prijelaznih formi u kojima udio specijalnog histoloakog tipa iznosi 50-80% ukupne mase tumora (npr. tubularni mijeaani oblik) kako se tumor pribli~ava i prelazi grani nu veli inu od 1 cm (14). Veina studija potvruje da su T1a,b-tumori bolje diferencirani, s relativno malom proporcijom visokog histoloakog stupnja diferencijacije (16,34,35). Sveukupno izmeu 21 i 48% T1a,b-karcinoma je dobro diferencirano (gradus 1) (8). Zanimljivo je da odreivanje histoloakog stupnja diferencijacije kod T1a,b-karcinoma mo~da nema isti prognosti ki zna aj kao kod karcinoma dojke veih promjera. Samo je nekolicina studija potvrdila prognosti ku vrijednost Nottinghamskog sustava stupnjevanja u univarijatnim i multivarijatnim analizama pre~ivljenja kod T1- karcinoma dojke, dok su druge dale prednost stupnju jezgrine diferencijacije ili broju mitoza (36,37). Jedno od moguih objaanjenja je relativno nizak ukupni mitotski zbroj kod T1-karcinoma, koji je sastavnica Nottinghamskog indeksa, zbog ega neki autori smatraju da su predlo~ene grani ne vrijednosti mitotskog zbroja unutar indeksa previsoke za ovu skupinu tumora (38). T1a,b-karcinomi su esto udru~eni s neinvazivnom komponentom, obi no duktalnog tipa. Pri tome neki autori razlikuju skupinu T1a,b-karcinoma koji su predominantno invazivni, tj. kod kojih neinvazivna sastavnica sa injava <50% ukupnog volumena tumora, te skupinu T1a,b-karcinoma koji su predominantno graeni od neinvazivne komponente koja sa injava 60-99% ukupnog volumena tumora uz obi no multipla ~ariata mikroinvazije ili invazije (39). Bolesnici s tumorima koji su predominantno neinvazivni, a graeni su od neinvazivne i invazivne komponente visokog histoloakog stupnja diferencijacije (gradus 3), imaju loaije pre~ivljenje, veu u estalost metastaza u regionalnim limfnim vorovima i veu stopu lokalnog povrata bolesti (39,40). Takoer, ti su tumori eae HER-2/neu i p53 pozitivni, uz slabije izra~en pozitivitet na hormonske receptore u odnosu na predominantno invazivne tumore (39). Naposljetku, neke studije pokazuju da se znakovi agresivnijeg bioloakog ponaaanja, kao ato su limfokapilarna invazija i perineuralna invazija, rijetki u T1a,b-karcinomima (15,41). 1.4. U estalost metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod T1a,b- karcinoma dojke Postotak zahvaenosti limfnih vorova kod T1a,b-karcinoma dojke se prema navodima iz literature kree u rasponu od 3 do 27% (8,42-44). Ovako airok raspon u estalosti metastaza je najvjerojatnije izazvan razli itim na inima mjerenja veli ine tumora, i razlikama u prosje nom broju izoliranih limfnih vorova te u na inu njihova pregleda u razli itim studijama (8). Pri tome treba dodati da su najvee postotke zahvaenosti pokazivale najstarije studije, kod kojih su tumori uglavnom otkrivani klini kim pregledom, a ne mamografijom (43). Danaanji, airoko prihvaen stav je da mikroskopsko mjerenje invazivne komponente tumora predstavlja najrelevantniji oblik mjerenja, te se mjerenje samo invazivne komponente koristi u odreivanju veli ine tumora u TNM klasifikaciji (4, 45). Kada se mjerenje veli ine tumora zasniva na makroskopskom mjerenju koje uklju uje invazivnu i neinvazivnu komponentu tumora, postotak metastaza u regionalnim limfnim vorovima je zna ajno manji u odnosu na tumore kod kojih se mjerila samo veli ina invazivne komponente (46). Dodatni imbenik koji mo~e onemoguiti stvarnu procjenu veli ine tumora je mogue postojanje ostatnog tumora u uzorku naknadne, proairene ekscizije, iji se promjer ne pribroji promjeru prethodno odstranjenog tumora. U estalost metastaza u regionalnim limfnim vorovima je zna ajno vea ako se ostatno tumorsko tkivo nae u uzorku naknadne, proairene resekcije (42). Prosje an broj izoliranih limfnih vorova je razli it u raznim studijama, od kojih su mnoge bez navoda o prosje nom broju izoliranih limfnih vorova, ili je spomenuti broj manji od preporu enog minimuma od 10 izoliranih limfnih vorova (47). Naposljetku, imunohistokemijske metode poveavaju u estalost otkrivenih metastaza u regionalnim limfnim vorovima. Dokazano je da izmeu 12 i 25% pazuanih limfnih vorova koji su bez metastaza prilikom rutinske histoloake analize sadr~i mikrometastaze otkrivene imunohistokemijskim metodama. Zna aj tako otkrivenih mikrometastaza joa uvijek je nepoznat (42,48). 1.4.1. Odnos klini ko-patoloakih osobitosti tumora i pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod T1a,b-karcinoma dojke Postoji linearna povezanost izmeu veli ine tumora i nalaza metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod bolesnika s rakom dojke. Kada je rije  o skupini T1a,b-karcinoma veina radova pokazuje veu u estalost pozitivnih limfnih vorova kod T1b-tumora u odnosu na T1a-tumore (8,43,44,49,50-55). Radovi kod kojih se veli ina tumora procjenjivala mikroskopskim mjerenjem invazivne komponente pokazuje da je u estalost zahvaanja limfnih vorova u skupini T1a-tumora izmeu 0-5%, dok je u skupini T1b-tumora izmeu 3-27% (8,43,44). `toviae, jedno je istra~ivanje pokazalo da je veli ina jedini faktor koji je statisti ki zna ajno povezan sa postojanjem metastaza u regionalnim limfnim vorovima (56). Na in otkrivanja tumora zna ajno utje e na rizik pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima. U seriji Van Nuys Centra za rak dojke prikazana je incidencija metastaza u regionalnim limfnim vorovima od 8% kod mamografski otkrivenih T1b-tumora, u usporedbi s incidencijom metastaza od 22% kod T1b- tumora otkrivenih palpacijom, ato predstavlja statisti ki zna ajnu razliku. U T1a skupini tumora incidencija metastaza kod mamografski otkrivenih promjena iznosila je 3%, dok je u skupini promjena otkrivenih palpacijom iznosila 7%, ato ne predstavlja statisti ki zna ajnu razliku (49). Ovi rezultati objaanjavaju visoke postotke zahvaenosti limfnih vorova kod T1a,b-karcinoma dojke (20-27%) u starijim istra~ivanjima kod kojih je veina karcinoma otkrivena klini kim pregledom (43). Razli iti su rezultati prikazani u radovima o odnosu histoloakog stupnja diferencijacije i pojavnosti metastaza u limfnim vorovima kod T1a,b-tumora. U veini radova pojavnost metastaza je u statisti ki zna ajnoj mjeri povezana s histoloakim stupnjem diferencijacije, s najveom u estaloau metastaza kod najslabije diferenciranih tumora (51,53,55,57-61). U nekim je radovima histoloaki stupanj diferencijacije zadr~ao prognosti ko zna enje i u multivarijatnoj analizi (51,53,57,58). Manji broj radova pokazuje da ne postoji statisti ki zna ajna povezanost izmeu histoloakog stupnja diferencijacije i pojavnosti metastaza u limfnim vorovima u skupini T1a,b-tumora (44,62,63). Jedan je od radova istra~ivao utjecaj svake sastavnice Nottinghamskog histoloakog stupnja diferencijacije, gdje je samo gradus jezgre pokazivao statisti ki zna ajnu povezanost s metastazama u limfnim vorovima (44). U radu Bartha i suradnika umjesto histoloakog stupnja diferencijacije koriaten je stupanj diferencijacije tumorskih jezgara, koji je pokazao prognosti ku vrijednost za postojanje pazuanih metastaza u univarijatnoj i multivarijatnoj analizi (54). Kada se istra~uje utjecaj histoloakog tipa na pojavnost metastaza u regionalnim limfnim vorovima u skupini T1a,b-karcinoma dojke rezultati su proturje ni. Radovi koji se odnose na tubularni karcinom dojke navode vrlo nizak rizik za postojanje metastaza (0-1%) kod karcinoma iji je promjer manji od 1 cm (64,65). Radovi u kojima je izdvojena skupina prognosti ki povoljnih histoloakih tipova T1a,b-karcinoma (tubularni, mucinozni, kribriformni, papilarni) navode manju u estalost metastaza u regionalnim limfnim vorovima u toj skupini tumora. Pri tom je negdje razlika statisti ki zna ajna, a negdje zbog malog broja tumora u skupini razlika ne dosti~e statisti ku zna ajnost (50,62). Naposljetku, radovi koji ne definiraju prognosti ki povoljnu skupinu tumora s obzirom na histoloaki tip nisu utvrdili povezanost histoloakog tipa s postojanjem metastaza, uz izuzetak rada Maibenica i suradnika koji su utvrdili veu u estalost metastaza kod lobularnih u odnosu na duktalne karcinome u skupini T1a-tumora (44,51,59). U mnogim je studijama T1-karcinoma dojke limfokapilarna invazija prikazana kao najsna~niji nezavisni predskazatelj postojanja metastaza u limfnim vorovima (53,54,57,66,67). Zanimljivo je da kod radova koji su se odnosili samo na skupinu T1a,b-karcinoma dojke, a kod kojih je limfokapilarna invazija istra~ivana kao prognosti ki imbenik za nastanak metastaza u limfnim vorovima, limfokapilarna invazija nije prikazana kao statisti ki zna ajan imbenik, ili je prikazana kao statisti ki zna ajan imbenik samo u univarijatnoj analizi (44,59,63). Tek se u rijetkim radovima istra~ivala veza izmeu postojanja neinvazivne komponente unutar T1a,b-karcinoma i metastaza u regionalnim limfnim vorovima. Sinn i suradnici izvjeatavaju o dvostruko veoj u estalosti metastaza u vorovima kod T1a,b-karcinoma u kojima je neinvazivna sastavnica dvostruko vea od invazivne, ato objaanjavaju veom u estaloau multiplih invazivnih ~ariata u toj skupini tumora (40). S druge strane Arisio i suradnici navode da postojanje neinvazivne komponente u skupini T1a-karcinoma smanjuje rizik za postojanje metastaza u limfnim vorovima sugerirajui da su karcinomi nastali progresijom iz neinvazivnih stadija bioloaki manje agresivni (50). Druga skupina autora ne navodi zna ajnu razliku u metastatskom potencijalu kod T1a,b-tumora s predominantnom neinvazivnom komponentom (39). Veina radova ne navodi razliku u izra~enosti hormonskih receptora izmeu T1a,bN0 i T1a,bN1-karcinoma (44,54,55,59). U tri se rada negativni hormonski receptori navode kao statisti ki zna ajni predskazatelji metastaza u univarijantnoj analizi (53,57,60). Lokalizacija primarnog tumora se u nekim radovima pokazala zna ajnim imbenikom u nastanku metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod T1a,b- karcinoma, s veom u estaloau kod tumora smjeatenih u vanjskim kvadrantima (51,55). Drugi radovi nisu potvrdili zna aj lokalizacije u predvianju postojanja pazuanih metastaza (53,56,63). Dob i menopauzalni status se u nekim istra~ivanjima navode kao zna ajan imbenik u nastanku pazuanih metastaza kod T1a,b-karcinoma, koje su eae u mlaih (< 40 godina) i premenopauzalnih bolesnica (51,59,67). Druga istra~ivanja ne potvruju navedenu povezanost (44,55,63). 1.4.2. Odnos imbenika dobivenih DNA-analizom tumorskog tkiva proto nom citometrijom i pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima kod T1a,b- karcinoma dojke Rijetki su radovi koji istra~uju odnos imbenika dobivenih DNA-analizom tumorskog tkiva proto nom citometrijom i metastaza u pazuanim limfnim vorovima kod T1-karcinoma dojke. `toviae, ta se analiza radila u samo jednom istra~ivanju koje se odnosilo samo na skupinu karcinoma dojke promjera manjeg od 1 cm, i to u podskupini T1b-karcinoma. U tom se istra~ivanju ploidnost i S-faza tumorskog tkiva nisu razlikovale u skupinama T1b-karcinoma sa i bez metastaza u regionalnim limfnim vorovima (44). U nekolicini drugih radova analiza DNA proto nom citometrijom koristila se u airoj skupini T1-tumora iji je najvei promjer manji od 2 cm, a koja obuhvaa i T1a,b-tumore. U radu Chade i suradnika navodi se visoka S- faza kao statisti ki zna ajan predskazatelj metastaza u regionalnim limfnim vorovima u univarijatnoj analizi kod T1-tumora (68). Zanon i suradnici definiraju skupinu diploidnih T1-karcinoma s niskom S-fazom kao skupinu bez metastaza u regionalnim limfnim vorovima (69). Preostala tri istra~ivanja u kojima se koristila DNA-analiza proto nom citometrijom u skupini T1-karcinoma dojke nisu dokazala utjecaj ploidnosti i postotka tumorskih stanica u S-fazi na pojavnost metastaza u limfnim vorovima (53,54,70). 1.5. Pazuana disekcija kod T1a,b-karcinoma dojke Pazuana disekcija se u zbrinjavanju bolesnika s rakom dojke radi s ciljem odreivanja stadija i prognoze bolesti te potrebe za adjuvantnom citotoksi nom ili visokodoznom kemoterapijom, kao i radi, po nekim mialjenjima, terapijskog u inka (71). Izvoenje pazuane disekcije je povezano sa specifi nim komplikacijama i poveanim morbiditetom. Prolazne postoperacijske komplikacije su infekcije, hematomi, ote~ano cijeljenje rane te seromi (43). Rane postoperacijske komplikacije su ozljede ~ivaca (pektoralnog, interkostobrahijalnog i torakodorzalnog ~ivca) s posljedi nom miainom atrofijom, deformitetima prsiata i skapule, pazuanom anhidrozom, parestezijama i kutanom anestezijom (72). Kasne postoperacijske komplikacije su vezane za poremeaj limfati ke i venske drena~e ruke, pri emu je edem ruke najva~nija dugoro na komplikacija pazuane disekcije, uz mogui naknadni razvoj limfangiosarkoma (72,73). U novije se vrijeme postavlja pitanje o potrebi rutinske pazuane disekcije kod bolesnika sa T1a,b-rakom dojke, a s obzirom na relativno nisku u estalost metastaza u regionalnim limfnim vorovima. ini se da je neracionalno podvri veliki broj bolesnika postupku koji je glavni uzrok morbiditeta u poatednoj kirurakoj terapiji raka dojke, a u svrhu otkrivanja tek nekolicine s pozitivnim vorovima (42,74). To se posebno odnosi na slu ajeve T1a-tumora niskog histoloakog stupnja diferencijacije koji su bez limfokapilarne invazije, kao i na histoloake tipove T1a,b-tumora s posebno dobrom prognozom (tubularni, mucinozni, papilarni i kribriformni karcinomi dojke) (51,52,60,75,76,77). Takoer, neki bolesnici s rakom dojke trebaju dobiti postoperacijsku citotoksi nu kemoterapiju ak i kada su bez metastaza u pazuanim limfnim vorovima, tj. kod njih status pazuanih limfnih vorova nema nikakvu ulogu u postoperacijskom terapijskom odlu ivanju (42,74). Kod takvih se bolesnika odluka o daljnjem lije enju zasniva na primarnim karakteristikama tumora (veli ini, histoloakom stupnju diferencijacije, hormonskoj osjetljivosti, limfokapilarnoj invaziji, izra~enosti HER2/neu onkogena), tako da saznanje o statusu limfnih vorova mjenja odluku o daljnoj terapiji u vrlo malom broju slu ajeva (0-17% slu ajeva, ovisno o grupama bolesnika) (78,79-81). Kada je rije  o skupini T1a,b-tumora, a koji su bez metastaza u regionalnim limfnim vorovima, postoperacijska kemoterapija se prema St Gallen dogovoru preporu uje u slu ajevima mlae ~ivotne dobi, prisutne peritumoralne limfokapilarne invazije, visokog tumorskog gradusa i tumorske hormonske neosjetljivosti (82). Na kraju, mnogi vjeruju da pazuana disekcija nema zna ajan terapijski u inak, tj. da je terapijski u inak preslab u odnosu na mogue komplikacije postupka, ato su potvrdile i neke studije prikazavai nepostojanje razlike u pre~ivljenju izmeu grupa s neposrednom i odgoenom disekcijom (43,78,83). S obzirom na suprotna glediata po kojima bioloake karakteristike tumora nisu primjereni predskazatelji metastatskog potencijala, a u ~elji izbjegavanja zna ajnih komplikacija i poveanog morbiditeta vezanih uz pazuanu diskeciju, mnogi centri pribjegavaju metodi limfnog vora uvara u procjeni zahvaenosti regionalnih limfnih vorova (74,83). Rije  je o minimalno invazivnoj dijagnosti koj metodi koja koristei boju ili radioaktivne tvari otkriva limfni vor ili skupinu vorova unutar pazuha koji prvi dreniraju tumorom zahvaeno podru je dojke. Osim ato je ova tehnika dobar predskazatelj metastaza unutar pazuanih limfnih vorova, ona omoguuje otkrivanje takozvanih preska uih (engl. skip) metastaza, kao i otkrivanje mogue zahvaenih limfnih vorova u slivu unutarnje mamarne arterije (74). Ipak, nakon po etnog oduaevljenja ovom tehnikom, javljaju se prve kritike. To se u prvom redu odnosi na visok postotak la~no negativnih rezultata, koji u velikim multicentri nim istra~ivanjima iznose 7-13%, kao i na mogunost nastanka komplikacija sli nih onima kod pazuane disekcije (78,84-86). Premda je postotak la~no negativnih rezultata u skupini T1a,b-tumora neato manji, postavlja se pitanje opravdanosti izvoenja ove tehnike u pojedinim podskupinama ovih tumora kod kojih je rizik zahvaenosti limfnih vorova manji od 10% (78). Cserni i suradnici na osnovi rezultata velike multicentri ne studije o biopsiji limfnog vora uvara kod malih invazivnih karcinoma dojke preporu uju ovu tehniku kao nezaobilaznu u odreivanju stadija bolesnika s malim invazivnim karcinomima dojke, uz mogui izuzetak T1a-tumora veli ine do 4 mm, te T1a,b-tumora niskog gradusa koji nisu multifokalni (87). Uzevai u obzir gore navedene injenice, neki se autori zala~u za odgoenu procjenu zahvaenosti limfnih vorova kod T1a,b-karcinoma biopsijom limfnog vora uvara ili pazuanom disekcijom, i to nakon procjene patobioloakih karakteristika tumora te uvida koliko zahvaenost limfnih vorova mo~e utjecati na odluku o postoperacijskoj terapiji u svakom pojedinom slu aju (78,88,89). 1.6. Proto na citometrija Mjerenje stani nog DNA-sadr~aja (ploidnost) i proliferacijskog kapaciteta (S- faza) stani ne populacije solidnih tumora proto nim citometrom koristi se kao dopuna tradicionalnim prognosti kim imbenicima (histoloakom stupnju diferencijacije, tumorskom stadiju, hormonskim receptorima i dr.) u predvianju pre~ivljenja bolesnika s malignim bolestima. Openito, abnormalni DNA-sadr~aj (aneuploidnost) je u korelaciji s viaim tumorskim stupnjem diferencijacije, viaim klini kim stadijem te s loaijom prognozom, dok je visoka S-faza povezana s klini ki agresivnijom boleau. Iako ove varijable ne moraju biti nezavisne prognosti ke varijable u statisti kim analizama prognosti kih imbenika pojedinih solidnih tumora, one mogu u inkovito predskazivati bioloaki potencijal neoplasti nih stani nih populacija. `toviae, u istra~ivanju novotvorina morfometrijske i citometrijske analize trebale bi biti reproducibilnije te imati veu dijagnosti ku i prognosti ku vrijednost od konvencionalnih histopatoloakih obilje~ja (90,91). 1.6.1 Ploidnost i stani ni ciklus Koli ina DNA u stani nim jezgrama odreuje se proto nom citometrijom upotrebom flourescentnih boja, pri emu je intezitet flourescencije svake pojedina ne stanice podra~ene laserskim svjetlom citometra upravo proporcionalan DNA-sadr~aju podra~ene stanice. S obzirom da se svaka stanica mo~e svrstati u odreeni dio stani nog ciklusa na osnovu njenog sadr~aja DNA, ovom je tehnikom mogue odrediti postotak stanica u svakoj fazi stani nog ciklusa. Stanice u fazi mirovanja (G0) ili stanice koje ulaze u stani ni ciklus (G1) imaju diploidan (2N) sadr~aj DNA (23 para kromosoma), ato odgovara koli ini od 7.1-12pg DNA po stani noj jezgri. Ulaskom u stani ni ciklus stanice po inju podvostru ivati DNA-sadr~aj, pri emu je u sintetskoj fazi ciklusa sadr~aj DNA izmeu 2N i 4N (S-faza). Nakon ato je replikacija DNA zavraena, stanice ulaze u postsintetsku (G2) fazu u kojoj imaju 4N koli inu DNA. S obzirom da proto na citometrija ne razlikuje stanice u postsintetskoj i mitotskoj (M) fazi stani nog ciklusa (u obje faze sadr~aj DNA je 4N), za populaciju stanica u ovim fazama koristi se termin G2+M-faza (Slika 1) (90). Slika 1: Prikaz stani nog ciklusa i histograma DNA-sadr~aja. Sadr~aj DNA raste napredovanjem stanica kroz stani ni ciklus, pri emu je najvei broj stanica u odreenoj populaciji u G0/G1-fazi. 1.6.2. Interpretacija DNA-histograma Mjerei DNA-sadr~aj nekoliko tisua jezgara dobiva se histogram DNA- sadr~aja analizirane populacije. U diploidnoj stani noj populaciji veina stanica je u G0/G1-fazi stani nog ciklusa s 2N sadr~ajem DNA, s odgovarajuim intezitetom flouresecencije na arbitrarno odreenom kanalu na apscisi. Zna ajno manji broj stanica u G2+M-fazi, s 4N sadr~ajem DNA ima otprilike dvostruki intezitet flourescencije na dvostruko veem kanalu na apscisi u odnosu na kanal G0/G1-faze. Stanice u S-fazi imaju srednji intezitet flourescencije koji je izmeu inteziteta G0/G1- faze i G2/M-faze (90) (Slika 2).  EMBED Word.Picture.8  Slika 2: Diploidni DNA-histogram. Veina stanica je s diploidnim sadr~ajem DNA (2N) u G0/G1-fazi stani nog ciklusa. Manji broj stanica je s dvostrukim DNA-sadr~ajem (4N) u G2/M-fazi stani nog ciklusa. Podru je izmeu dvaju vrakova odgovara S-fazi. Normalne diploidne stanice s 2N sadr~ajem DNA imaju 2C (C od citometrija) DNA-histograme. Tetraploidne stanice imaju dvostruki sadr~aj DNA (4N). Stani ni klonovi s DNA-sadr~ajima koji su viaekratni umnoaci broja 2 (4, 8, 16, ...) nazivaju se poliploidnima. Stani ni klonovi s abnormalnim DNA-sadr~ajima koji nisu viaekratni umnoaci broja 2 nazivaju se aneuploidnima, a mogu biti hipodiploidni (vrlo rijetko) ili hiperdiploidni (Slika 3). Aneuploidni tumori s viae od jednog aneuploidnog stani nog klona nazivaju se multiploidnima (91).  EMBED Word.Picture.8  Slika 3: Aneuploidni DNA-histogram. Uz G0/G1-vraak diploidne stani ne populacije (D) nalazi se dodatni G0/G1-vraak aneuploidne populacije s 2,8N sadr~ajem DNA (A). Vrakovi s 4N i 5,6N sadr~ajem DNA su G2/M-vrakovi diploidne i aneuploidne populacije stanica. Tkivni DNA-sadr~aj se takoer izra~ava pomou DNA-indeksa koji ozna ava koli inu DNA u odnosu na diploidnu kontrolu prema sljedeoj jednad~bi: DNA-indeks (DI)= broj ana vrijednost kanala aneuploidnog G0/G1-vraka / broj ana vrijednost kanala diploidnog G0/G1-vraka Diploidne populacije su po definiciji one s DI=1, dok su aneuploidne one s DI(1. U standardnoj praksi tako oatra podjela esto nije mogua, esto zbog neoatro prikazanih G0/G1-vrakova (fenomen ramena) s nemogunoau prikaza jasno odvojenih vrakova (90). Stoga se preporu a mnogo airi raspon DNA-indeksa diploidne populacije koji iznosi od 0,95 do 1,05 (92). 1.6.3. Procjena stani ne populacije u S-fazi Proliferacijska aktivnost tumorskih stanica mo~e se odrediti na nekoliko na ina, pri emu su neka mjerenja stati ka, a neka dinami ka. Kod stati kih mjerenja proliferacijskog indeksa nije mogue utvrditi koliko e stanica u S-fazi uistinu dovraiti ciklus mitozom, tj. stati ko mjerenje obuhvaa i stanice koje su zamrznute u S-fazi (S0). Primjeri stati kog mjerenja proliferacijske aktivnosti su brojanje mitoza ili metoda obilje~avanja timidinom, radioaktivnim izotopom koji je neophodni prekursor u sintezi DNA. Proto na citometrija omoguuje i stati ko i dinami ko mjerenje proliferacijske aktivnosti, ovisno o upotrebljenoj metodologiji. U klasi noj primjeni, uz upotrebu interkalirajuih DNA-boja, mjerenje je stati ko, gdje postotak stani ne populacije u S- fazi ozna ava onu populaciju stanica iji je sadr~aj DNA izmeu 2N i 4N. Taj postotak uklju uje stanice kako u aktivnoj tako i u zamrznutoj S-fazi, a odreuje se posebnim matemati kim modelima koji su dio kompjutorskog programa za analizu histograma. Ti su programi posebno razvijeni u svrhu odgovarajueg izra una S-faze kod preklapajuih populacija na histogramu, naj eae u slu ajevima aneuploidnih histograma s DI izmeu 1.3 i 1.8, kod kojih se diploidna G2M populacija preklapa sa S-fazom aneuploidne populacije (90). Dinami ko mjerenje proliferacijske aktivnosti proto nom citometrijom mogue je uporabom posebnih boja (bromodeoxyuridin  BrdUrd) ili protutijela (Ki-67) koje se selektivno ve~u za jezgre sintetski aktivnih stanica. Pri tome BrdUrd mjeri aktivne stanice u S-fazi, a Ki-67 aktivne stanice u svim fazama stani nog ciklusa (G1, S, G2 i M) (90). Osim procjene proliferacijske aktivnosti tumorskih stanica odreivanjem postotka stanica u S-fazi, ista se mo~e procjenjivati odreivanjem proliferacijskog indeksa (PI), koji se definira kao odnos proliferacijskog odjeljka (S+G2+M) i svih stani nih odjeljaka (G0+G1+G2+M) prema sljedeoj formuli: PI= S+G2+M / G0+G1+G2+M x 100 (90). Ipak, prema preporukama dogovora za odreivanje proliferacijske aktivnosti tumora bolje je koristiti odjeljak stanica u S-fazi nego itav proliferacijski odjeljak (S+G2+M). Na to upuuju podaci koji se odnose na prognosti ku korist mjerenja S- faze u itavom nizu solidnih tumora, kao i injenica da se zbog preklapanja agregata s G2/M-vrakom histograma otkriva vea varijabilnost u mjerenju G2/M-faze u odnosu na S-fazu (92). Preporuka je da za svaku vrstu solidnog tumora svaki laboratorij izra una vlastite grani ne vrijednosti S-faze po tercilama (niski, srednji i visoki postotak S- faze), i to posebno za diploidne, a posebno za aneuploidne tumore. Pri tome se kod aneuploidnih tumora koristi srednja vrijednost S-faze koja uklju uje S-faze diploidne i aneuploidne populacije. Neke studije upuuju na veu prognosti ku vrijednost odreivanja S-faze samo aneuploidne populacije (92). 1.6.4. Procjena kvalitete DNA-histograma i naj eae analiti ke greake U procjeni kvalitete DNA-histograma koristimo brojne kontrolne kategorije. Najva~nija je koeficijent varijacije (CV) koji odgovara sposobnosti razlikovanja dvaju vrakova te se statisti ki definira kao standardna devijacija podjeljena sa srednjom vrijednoau (kod DNA-histograma to se odnosi na srednju vrijednost kanala G0/G1- vraka i njenu standardnu devijaciju). `to je numeri ka vrijednost CV manja, bolja je sposobnost razlikovanja vrakova, ato je vrijednost vea, vrakovi su airi s veom mogunosti neprepoznavanja abnormalnih vrakova (vrakovi u blizini 2N vraka). Takoer, kod veih CV-vrijednosti procjena regije S-faze DNA-histograma nije toliko pouzdana (90,92,93). Prema dogovoru CV za DNA-histograme dobivene analizom u parafin uklopljenih uzoraka mora biti manji od 8, pri emu se u rutinskom radu redovito posti~e manji od 5 (92,93). Kvalitetni histogrami ne bi smjeli imati visoke postotke dogaaja koji odgovaraju pozadini histograma, agregatima i debriju (BAD) koji takoer ometaju inerpretaciju varijabli koje se izvode iz histograma. Visoki sadr~aj debrija ometa mjerenje S-faze, a uz to mo~e prekriti male hipodiploidne vrakove (93). Viaak agregata dovodi do teakoa u otkrivanju tetraploidnih tumora, kao i u odreivanju S-faze tetraploidne frakcije (92). Takoer je za pouzdanu analizu aneuploidnih histograma va~no da postotak stanica koje odgovaraju aneuploidnom G0/G1-vraku iznosi najmanje 10%, uz mogunost otkrivanja odgovarajueg aneuploidnog G2/M-vraka (90). Osjetljivost i specifi nost odreivanja ploidnosti proto nom citometrijom je mala. Kvantitativne promjene u sadr~aju DNA mogu biti otkrivene tek pri gubitku ili dobitku koli ine DNA zastupljene u jednom itavom kromosomu, a nekad i viae od toga. Promjene u sadr~aju DNA kao ato su manje delecije ili translokacije nije mogue otkriti. S druge strane specifi nost je niska jer ploidnost govori o zna ajnoj promjeni DNA-sadr~aja, bez ikakvog saznanja o mehanizmu koji je do promjene doveo, te o vrsti specifi ne genetske promjene. Mogue je da stanica ima normalan kariotip i ploidnost, a potpuno abnormalan alelotip (91). Odreeni broj tumorskih uzoraka mo~e biti la~no diploidan jer je broj aneuploidnih stanica vrlo mali te se one ne mogu otkriti meu prevladavajuim brojem diploidnih stanica od kojih su mnoge netumorske stanice. Smanjeni sadr~aj DNA mo~e takoer biti izazvan apoptozom i nekrozom. Stoga se preporu a da se za analizu upotrebe uzorci koji u svom ukupnom volumena sadr~e najmanje 15-20% tumorskog tkiva, a koji uz to ne sadr~e podru ja nekroze, upale, krvarenja i fibroze, ato se kontrolira na standardno obojenim histoloakim rezovima (90,92,93). Uz to ne postoji vizualna kontrola uzorka u trenutku analize, uz brojne mogue artefakte kao ato su npr. stani ne nakupine ili frakcionirane tetraploidne stanice koje mogu biti prikazane kao aneuploidni klonovi (91). Glavne analiti ke greake u DNA-citometriji mogu se razvrstati u sljedee skupine: neodgovarajui uzorak za analizu (uzorci s malo tumorskog tkiva, nekroti na i upalna podru ja) neodgovarajua tkivna obrada (naro ito va~no je adekvatno fiksiranje tkiva u fiksativu s 5<pH<9 jer neadekvatna fiksacija mo~e izazvati stvaranje la~nih hipodiploidnih vrakova); neodgovarajua priprava uzorka za analizu (va~no je osigurati pojedina ne stanice/jezgre, onemoguiti stvaranje nakupina i velike koli ine debrija) nepostojanje standardne diploidne kontrole (osigurati postojanje normalnog tkiva u uzorku, dodavanje vanjske diploidne kontrole uzorku poput pileih eritrocita u svje~im analiti kim uzorcima) tehni ki imbenici mjerenja (prethodna kalibracija ureaja uporabom standardnih flourescentnih estica, dovoljan broj kanala uz odgovarajuu volta~u, dovoljan broj sakupljenih dogaaja (izmeu 10000-20000 jezgara), odgovarajua brzina protoka u svrhu dobivanja odgovarajuih CV-a (tipi no izmeu 100 i 300 dogaaja u sekundi)) (91,92,93). 1.7. Molekularna osnova aneuploidnosti Postoji viae moguih puteva nastanka abnormalnog sadr~aja DNA u stanici. Aneuploidnost openito nastaje preko meustadija poliploidnosti-tetraploidnosti. Poliploidnost je uobi ajena u nekim normalnim stani nim populacijama kao ato su mekakariociti i hepatociti u kojima se odvija proces endoreplikacije u kojem se DNA- replikacija programirano obavlja bez stani ne podjele (94). Slu ajno nastale poliploidne (naj eae tetraploidne) stanice su genetski nestabilne, te su naj eae meustadij prema aneuploidnosti i nastanku raka (Slika 4). Ova jednostavna hipoteza objaanjava zaato mnoge novotvorine sadr~avaju velike promjene u broju kromosoma, a ne tek jednostavne gubitke ili dodatke genetskog materijala na pojedinim kromosomima (94). Posljedica tetraploidnosti, barem u nekim stani nim linijama, je nagomilavanje broj anih i strukturalnih kromosomskih aberacija tj. kromosomska nestabilnost. Velike broj ane kromosomske promjene (engl. whole-chromosome aneuploidy) naj eae nastaju zbog prekomjernih centrosoma u tetraploidnim stanicama koje dovode do abnormalnih mitoza s neodgovarajuim razdvajanjem itavih kromosoma (Slika 4) (94). Manje je jasno kako u uvjetima tetraploidnosti nastaju strukturalne kromosomske promjene poput kromosomskih lomova i translokacija. Postoje dva mogua objaanjenja tog fenomena. Prvo je objaanjenje da podvostru enje u sadr~aju DNA poveava u estalost spontanog oateenja DNA. Drugo je da viaak DNA-sadr~aja, potpuno suprotno, djeluje stabilizirajue na stani ni genom dozvoljavajui produ~eni rast stani ne linije (bijeg od apoptoze i stani nog aresta) sve do nastanka nove klju ne transformirajue mutacije (94).  EMBED Word.Picture.8  Slika 4: Tetraploidnost kao meufaza prema aneuploidnosti. Greaka u citokinezi dovodi do stvaranja tetraploidnosti s prekomjernim centrosomima koji dovode do kaoti nih multipolarnih mitoza s posljedi nom aneuploidnosti. Tetraploidnost mo~e nastati i procesom mitotskog bijega te opstati zahvaljujuim bipolarnim mitozama unato  viaku centrosoma. Prilagoeno prema: Ganem NJ, Storchova Z, Pellman D. Tetraploidy, aneuploidy and cancer. Current Opinion in Genetics & Development 2007; 17:157-62 (94). Sudbina tetraploidnih stani nih linija vjerojatno ovisi i o tipu stanice i o njenoj genetskoj podlozi. U mnogih stanica tetraploidnost udru~ena s genetskom nestabilnoau dovodi do zastoja u rastu i/ili stani ne smrti. To se naj eae odvija aktiviranjem supresorskog gena p53 (engl. p53 dependent tetraploidy checkpoint) koji kontrolira broj kromosoma i/ili centrosoma prije zavranih faza stani ne diobe. U stani nim linijama bez ovakvih kontrolnih mehanizama tetraploidne stanice nesmetano dobivaju kriti ne genetske promjene za nastanak maligne transformacije (94). Mehanizmi koji dovode do nastanka abnormalnog sadr~aja DNA (tetraploidnost, aneuploidnost) mogu se podjeliti u sljedee skupine: greake u kromosomskoj segregaciji greake u kontroli nastanka diobenog vretena greake u citokinezi tetraploidnost generirana fuzijom stanica mutacija gena odgovornih za kontrolu stani ne diobe. Masivne greake u kromosomskoj segregaciji dovode do nakupljanja velike koli ine kromatina koji fizi ki onemoguava nastanak mitotske pukotine (engl. mitotic furrow), te onemoguivai citokinezu dovodi do tetraploidnosti (94). Neodvajanje sestrinskih kromatida mo~e izazvati regresiju mitotske pukotine i posljedi nu tetraploidnost u tkivnim stani nim kulturama (95). Tetraploidnost mo~e nastati kao posljedica produ~enog zastoja u diobi nastalog aktivacijom kontrolnog sustava koji nadzire stvaranje diobenog vretena. Ovaj kontrolni sustav zaustavlja mitozu ukoliko postoji poremeaj koji onemoguava normalno spajanje kromatida s diobenim vretenom (onemoguavanje spajanja kinetohore i mikrotubula). Ipak, zastoj ne traje neograni eno dugo vrijeme, ve stanice, zahvaljujui fenomenu mitotskog bijega (engl. mitotic slippage), ponovno ulaze u G1-fazu mitotskog ciklusa kao tetraploidne (slika 4) (96). Osnova mitotskog bijega je degradacija ciklina B proteasomskom proteolizom do koli ine koja je premala za nastavak mitoze, tako da tetraploidna stanica izlazi iz mitotskog ciklusa bez anafaze ili citokineze (97). est razlog formiranja tetraploidnih stani nih linija je onemoguavanje citokineze, zbog poremeaja nekog od mnogih citokinetskih proteina (98). Tetraploidne stanice mogu nastati i stani nom fuzijom. Virusom inducirana fuzija humanih stanica dovodi do nastanka tetraploidne stani ne linije koja je sposobna za daljnju proliferaciju ukoliko je inaktiviran tumor supresorski gen p53. U ovako transformiranim, geneti ki nestabilnim tetraploidnim humanim stanicama mo~e doi do aktivacije onkogena koje omoguuju neoplasti nu transformaciju, otkrivajui joa jednu moguu vezu izmeu virusne infekcije i nastanka raka (99). Mutacije gena odgovornih za stani nu diobu te njenu kontrolu, predstavljaju u novije vrijeme najzanimljiviju skupinu uzroka aneuploidnosti (100,101). Naime, prevladavajua dogma genetske osnove novotvorina govori da mutacija gena mo~e izazvati rak, ili aktivacijom protoonkogena u onkogene, i/ili inaktivacijom tumor supresorskih gena (engl. somatic gene mutation hypotesis). Poatujui ovu dogmu aneuploidnost je posljedica, a ne uzrok, maligne transformacije i progresije. Meutim, u novije vrijeme se o aneuploidnosti govori kao o specifi nom obliku kromosomske mutacije koja doprinosi malignoj transformaciji. Upotrebom in situ hibridizacije i komparativne genomske hibridizacije pokazalo se da specifi ne kromosomske aneusomije koreliraju sa specifi nim tumorskim fenotipovima (npr. trisomija kromosoma 7 kod hereditarnog papilarnog karcinoma bubrega) (100). Joa va~nije, itav niz gena koji kontroliraju kromosomsku segregaciju ili primjereno stvaranje diobenog vretena (engl. spindle checkponit genes) mutirani su u tumorskim stanicama ljudskih karcinoma, ato upuuje da su takve mutacije odgovorne za izazivanje aneuploidnosti koja u kona nici dovodi do maligne transformacije (101). Primjeri takvih mutacija su mutacija gena za centromerni protein E (CENP-E) koji kodira protein uklju en za primjereno redanje kromosoma u medijalnoj liniji na diobenom vretenu, pri emu su heterozigotne stani ne linije za ovaj gen eae aneuploidne u odnosu na normalne stanice (102) (Slika 5). Protein CENP-E igra ulogu i u moduliranju sustava kontrole diobenog vretena koji prekida mitozu pri neprimjerenoj kromosomskoj segregaciji. Gubitak funkcije ovog proteina izaziva dvostruku atetu: stanice eae rade greake u kromosomskoj segregaciji, a istovremeno slabije popravljaju nastale greake.  EMBED Word.Picture.8  Slika 5: U stanicama sa o uvanim CENP-E svaka stanica kerka dobija po jednu kopiju kromosoma. Kod heterozigota za CENP-E sestronske kromatide se ne odvajaju dovodei do aneuploidnosti (engl. whole-chromosome aneuploidy). Prilagoeno prema: Pellman D. Aneuploidy and cancer. Nature 2007; 446:38-9 (101). Pretjerana izra~enost gena Mad2, obi no povezana s inaktivacijom Rb tumor supresorskog gena dovodi do aneuploidnosti ometanjem citokineze ili ometanjem odvajanja sestrinskih kromatida sa zadr~avanjem istih u podru ju citokinetske pukotine (engl. lagging chromosome) s posljedi nim kromosomskim lomovima (Slika 6). Za razliku od mnogih drugih signalnih molekula, inaktivacija ovog gena, nakon ato je tumor ve formiran, nema nikakav u inak na daljnji rast tumora potvrujui ulogu genetske nestabilnosti izazvane pretjeranom izra~enoau gena Mad2 u ranoj fazi nastanka tumora (103).  EMBED Word.Picture.8  Slika 6: Pretjerana izra~enost gena Mad 2 izaziva neodvajanje sestrinskih kromatida, pri emu aneuploidnost nastaje na dva na ina. Retrakcija mitotske pukotine dovodi do tetraploidnosti s kromosomskom nestabilnoau koja vodi ka aneuploidnosti. Alternativno kromosomski lomovi zaostalog kromosoma u mitotskoj pukotini tijekom citokineze dovode do aneuploidnosti stanica keri. Prilagoeno prema: Pellman D. Aneuploidy and cancer. Nature 2007; 446:38-9 (101). 2. CILJ ISTRA}IVANJA 1. Istra~iti ulogu ploidnosti, DNA-indeksa i S-faze dobivenih DNA-analizom tumorskog tkiva proto nom citometrijom u procjeni rizika pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod minimalnih invazivnih karcinoma dojke. 2. Istra~iti ulogu tradicionalnih patohistoloakih imbenika (veli ine, histoloakog tipa, Nottinghamskog histoloakog stupnja diferencijacije sa svojim sastavnicama, izra~enosti proteina HER2/neu, peritumoralne limfokapilarne invazije, postojanja neinvazivne komponente, izra~enosti hormonskih receptora) u procjeni rizika pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod minimalnih invazivnih karcinoma dojke. 3. Istra~iti jesu li imbenici dobiveni DNA-analizom tumorskog tkiva proto nom citometrijom (ploidnost, DNA-indeks i S-faza) bolji prognosti ki skup varijabli od tradicionalnih patohistoloakih imbenika u procjeni rizika pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod minimalnih invazivnih karcinoma dojke. 3. ISPITANICI I POSTUPCI 3.1. Ispitanici Istra~ivanje je provedeno na operacijskom materijalu bolesnica s dijagnosticiranim minimalnim invazivnim karcinomima dojke (T1a,b) koje su operirane u Klinici za kirurgiju KBC Split u vremenskom razdoblju od po etka 1997. do kraja 2006. godine. Patohistoloaka i imunohistokemijska analiza, kao i analiza DNA-sadr~aja tumorskog tkiva proto nom citometrijom obavljena je na Klini kom zavodu za patologiju, sudsku medicinu i citologiju KBC Split. Kao materijal koriateni su: - patohistoloaka izvijeaa bolesnica s T1a,b-karcinomima dojke - parafinski rezovi tumorskog tkiva obojeni standardnom hemalaun-eozinskom metodom - deparafinirani rezovi tumorskog tkiva obojeni imunohistokemijski DAKO Herceptestom te protutijelima na estrogenske (ER) i progesteronske (PgR) receptore, te na endotelni biljeg CD34 - 40-(m parafinski rez tumorskog tkiva za analizu proto nom citometrijom. Nakon obavljene histoloake i imunohistokemijske analize te analize tumorskog tkiva proto nom citometrijom svi podaci bitni za ovo istra~ivanje bili su dostupni za 152 bolesnice sa 152 T1a,b-karcinoma. Pri tome je 40 karcinoma pripadalo ispitivanoj skupini (T1a,b-karcinomi s metastazama u pazuanim limfnim vorovima), dok je 112 karcinoma pripadalo kontrolnoj skupini (T1a,b-karcinomi bez metastaza u pazuanim limfnim vorovima). 3.2.Postupci Histoloaka obrada Revizijom standardnih hemalaun eozinskih preparata tumorskog tkiva provjereni su svi standardni patohistoloaki imbenici koji se opisuju u patohistoloakom izvjeau kod karcinoma dojke: veli ina tumora, histoloaki tip tumora, Nottinghamski histoloaki stupanj diferencijacije sa svojim sastavnicama, izra~enost proteina HER2/neu, postojanje peritumoralne limfokapilarne invazije tumorskim stanicama, postojanje neinvazivne tumorske komponente te status hormonskih receptora. Imunohistokemijska analiza Imunohistokemijska analiza koriatena je kod odreivanja limfokapilarne invazije, statusa hormonskih receptora te izra~enosti proteina HER-2/neu. Koriatena su slijedea protutijela: CD 34 (DAKO, Glostrup, Danska, Mouse Anti-Human, M 7168, u razrijeenju 1:50), ER (DAKO 1D5, Glostrup, Danska, Mouse Anti-Human, M 7047, u razrijeenju 1:300), PgR (DAKO, Glostrup, Danska, Mouse Anti-Human, A 0098, u razrijeenju 1:600) te HercepTestTM (DAKO, Golstrup, Danska, Rabbit Anti-Human HER2/neu) koristei standardni imunohistokemijski protokol uz upotrebu automatskog boja a (DAKO Autostainer). Proto na citometrija Svakom je karcinomu analiziran sadr~aj DNA metodom proto ne citometrije te je odreena ploidnost, DNA-indeks i proliferacijska aktivnost tumorskih stanica odreivanjem postotka tumorskih stanica u S-fazi. Suspenzija stanica tumorskog tkiva za DNA-analizu proto nom citometrijom pripremala se iz parafinskih kocaka tumorskog tkiva koristei se modificiranom metodom Hedley-a i suradnika (104). Izre~u se jedan do dva 40-(m reza za DNA- analizu proto nom citometrijom te jedan dodatni kontrolni 4-(m hemalaun-eozinski rez. Rezovi su prvo deparafinirani u ksilolu, zatim rehidrirani u silaznom nizu alkohola (100%, 95% i 70%) te isprani destiliranom vodom. Tkivo je potom inkubirano u 2 ml 0,5% pepsina (Sigma, St.Louis, MO, USA) (pH 1.5) na 37C(/1h. Nakon toga je suspenzija stanica filtrirana kroz 42-(m najlonsku mre~icu, centrifugirana na 2000 rpm/3 min, isprana s 2 ml otopine fosfatnog pufera (PBS) te ponovno centrifugirana na 2000 rpm/3 min kako bi dobili sediment jezgara. Zatim se dodaje 200 l ribonukleaze (Sigma, St. Louis, MO, USA) u koncentraciji od 1mg/ml te 200 l propidij jodida (Sigma, St. Louis, MO, USA). Uzorci se inkubiraju u tami, na +4C od 2 do 24h prije propuatanja. Suspenzija 25000 jezgara se propuata na FACScan proto nom citometru (Becton-Dickinson, San Jose, CA) s 15 mw argon ionskim laserom (potreban je minumum od 10000 jezgara pri emu su isklju eni debrij i agregati) (104). O itavanje rezultata Budui da su svi ispitivani T1a,b-karcinomi u cjelosti uklopljeni u jedan parafinski blok, mikroskopskim mjerenjem uz pomo okularnog mikrometra potvren je najvei promjer od (1 cm. Pri tome je mjeren najvei promjer invazivne komponente, ime se iz njegovog mjerenja isklju uje neinvazivna sastavnica. Ispitivana skupina minimalnih invazivnih karcinoma (T1a,b) po TNM klasifikaciji obuhvaa invazivne karcinome najveeg promjera ( 5mm (T1a) i invazivne karcinome najveeg promjera 6-10mm (T1b) (4). Zahvaenost limfnih vorova procjenjivana je patohistoloakom analizom limfnih vorova izoliranih iz pazuanog masnog tkiva, a u istra~ivanje su uklju eni karcinomi kod kojih su izolirana najmanje 4 limfna vora. Grani na vrijednost od 4 izolirana limfna vora je uzeta kao najmanji dopustiv broj izoliranih limfnih vorova koji daje odgovarajuu prognosti ku informaciju vezanu za zahvaenost regionalnih limfnih vorova (5,105,106). Histoloaki tipovi invazivnih tumora procjenjivani su prema kriterijima Svjetske zdravstvene organizacije (4). Tubularni, kribriformni, mucinozni i tubulolobularni histoloaki tipovi ujedinjeni su u skupinu tumora s posebno povoljnom prognozom (5). Tumorski histoloaki stupanj diferencijacije sa svojim sastavnicama procjenjivani su prema Nottinghamskim kriterijima (107). Kod vrlo malih tumora, kod kojih nije mogue odrediti mitotski indeks i histoloaki stupanj diferencijacije po Nottingham-skim kriterijima, koriateno je odreivanje histoloakog stupnja diferencijacije po Bloom-u i Richardson-u (108). Neinvazivna komponenta procjenjivana je prema kriterijima Svjetske zdravstvene organizacije (4). Limfokapilarna invazija procjenjivana je u peritumoralnim vaskularnim prostorima nalazom tumorskih stanica unutar prostora omeenih imunohistokemijski CD34 pozitivnim endotelnim stanicama. Status hormonskih receptora procjenjivan je postojanjem obojenosti tumorskih jezgara na ER i PgR, pri emu je obojanost viae od 5% tumorskih jezgara smatrana pozitivnom vrijednoau, uz odgovarajuu pozitivnu i negativnu kontrolu (109). Hormonski pozitivnim tumorima smatrani su oni koji pokazuju pozitivnu vrijednost barem jednog hormonskog receptora. Izra~enost proteina HER2/neu procjenivao se na osnovi inteziteta i opsega membranske obojenosti izra~ene u viae od 30% tumorskih stanica prema originalnim kriterijima proizvoa a Hecep testa. DNA-histogrami analizirani su u ra unalnom programu Modfit 3.0 (Verity Software House, Inc.). Tumori s jednim G0/G1-vrakom klasificirani su kao diploidni, a oni koji imaju i dodatni odvojeni G0/G1-vraak (s viae od 10% jezgara) kao aneuplodni. Tumori s tri ili viae odvojena G0/G1-vraka su multiploidni (104). Koeficijent varijacije (CV, standardna devijacija u odnosu na srednju vrijednost) se ra unao na G0/G1-vraku, uz gornju prihvatljivu vrijednost od 8% (104). Uzorci s CV-om >8%, agregatima >10% te BAD-om (pozadina histograma, agregati i debrij) >20% su neodgovarajui za identifikaciju aneuploidnih populacija ili za odreivanje S-faze, te su po preporukama dogovora bili isklju eni iz ispitivanja (104). Stupanj aneuploidnosti se izra~avao DNA-indeksom koji predstavlja omjer relativnog sadr~aja DNA G0/G1- populacije uzorka i diploidnih stanica okolnog netumorskog tkiva dojke. DNA-indeks diploidnih stanica iznosio je 0,95-1,05 (92). Kod multiploidnih tumora koriatena je aneuploidna subpopulacija s najveim DNA-indeksom (104). Tetraploidni tumori (DNA-indeks = 1.9-2.1) su uklju eni u aneuploidnu skupinu (92). S obzirom na dobivenu vrijednost postotka stanica u S-fazi za svaki pojedini karcinom, karcinomi su podjeljeni u podskupine s niskom, srednjom i visokom proliferacijskom aktivnoau koristei dvije grani ne vrijednosti izra unom tercila. Grani ne vrijednosti postotka stanica u S-fazi odreene su posebno za diploidnu i aneuploidnu skupinu tumora, kako je preporu eno dogovorom (104). Procjenjivana je i udru~ena vrijednost tumorske ploidnosti i proliferacijske aktivnosti svrstavanjem pojedinih karcinoma u skupine s obzirom na prikazane vrijednosti gore navedenih imbenika u histogramima, a na osnovu dokazane prognosti ke vrijednosti udru~enih kategorija ploidnosti i proliferacijske aktivnosti u procjeni pre~ivljenja kod karcinoma dojke (110, 111). Prvu skupinu sa injavali su diploidni tumori s niskom proliferacijskom aktivnoau. Drugu skupinu sa injavali su diploidni tumori sa srednjom i visokom proliferacijskom aktivnoau te aneuploidni tumori s niskom proliferacijskom aktivnoau. Treu skupinu sa injavali su aneuploidni tumori s visokom proliferacijskom aktivnoau. Statisti ka analiza Mann-Whitney U test i t-test koriateni su za usporeivanje kontinuiranih varijabli ispitivane i kontrolne skupine tumora. Univarijatna analiza ( testom te univarijatna logisti ka regresija koriatene su u svrhu procjenjivanja odnosa izmeu ispitivanih varijabli i pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima. Multivarijatna logisti ka regresija koriatena je u svrhu procjene postojanja nezavisne povezanosti ispitivanih varijabli i pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima. U statisti koj obradi koriaten je ra unalni program SPSS for Windows (Chicago, IL). Statisti ka zna ajnost odreivana je na razini p< 0,05. 4.REZULTATI Istra~ivanje je provedeno na 152 minimalna invazivna karcinoma dojke, od kojih je 40 bilo s metastazama, a 112 bez metastaza u pazuanim limfnim vorovima. Svi su bolesnici bili ~enskog spola, prosje ne ~ivotne dobi 58,6(10,9 godina (raspon dobi: 33-79 godina). Prosje na veli ina tumora iznosila je 0,82(0,18 cm (medijan 0,9 cm, raspon veli ina: 0,4-1 cm). Prosje an broj izoliranih limfnih vorova iznosio je 10,13,8 (medijan 9, raspon vrijednosti: 4-23 limfna vora). Prosje an broj zahvaenih limfnih vorova kod T1a,bN1-karcinoma bio je 2,72,9 (medijan 1, raspon vrijednosti 1-15). Patohistoloaka obilje~ja Osnovna patohistoloaka obilje~ja ispitivane skupine T1a,b-karcinoma dojke prikazana su u tablici 1. Veinu minimalnih invazivnih karcinoma sa injavali su T1b-karcinomi (87,5%), meu kojima je najzastupljeniji histoloaki tip bio duktalni (69,7%). Prognosti ki povoljni histoloaki tipovi inili su po brojnosti drugu najzastupljeniju skupinu (11,8%), u kojoj su najbrojniji bili tubularni karcinomi. U skupini karcinoma koji su definirani kao ostali nalazili su se medularni, papilarni invazivni i mikropapilarni karcinomi. Karcinomi su najveim dijelom bili dobro diferencirani (57,2%), bez limfokapilarne invazije (88,2%), uz prisutnu neinvazivnu sastavnicu (61,8%). U velikoj veini slu ajeva karcinomi su izra~avali hormonske receptore (88,2%), te su bili HER2/neu negativni (94,1%). Tablica 1. Osnovna patohistoloaka obilje~ja T1a,b-karcinoma dojke Obilje~je Broj % T1a 19 12,5 T1b 133 87,5 Histoloaki tip duktalni 106 69,7 lobularni 10 6,6 duktalni+lobularni 8 5,3 prognosti ki povoljni* 18 11,8 ostali( 10 6,6 Gradus 1 87 57,2 2 47 30,9 3 18 11,8 Limfokapilarna invazija da 18 11,8 ne 134 88,2 Neinvazivna sastavnica da 94 61,8 ne 58 38,2 Hormonski receptori pozitivni 134 88,2 negativni 18 11,8 HER2/neu pozitivan 9 5,9 negativan 143 94,1 * Prognosti ki povoljnu skupinu ine tubularni, mucinozni, kribriformni i tubulolobularni karcinomi ( Skupinu ostalih ine medularni, papilarni invazivni i mikropapilarni karcinomi DNA-analiza proto nom citometrijom T1a,b-karcinomi uvrateni u istra~ivanje imaju histograme dobivene DNA- analizom tumorskog tkiva proto nom citometrijom koji zadovoljavaju prethodno opisane kvalitativne i kvantitativne kriterije. Koeficijenti varijacije diploidnih vraaka bili su u rasponu od 2,27 do 6,67, pri emu je medijan iznosio 4,14, a srednja vrijednost 4,23(1. Postotak stanica u S-fazi je kod diploidnih tumora bio u rasponu od 0,1% do 10,39%, uz medijan od 1,45% te srednju vrijednost od 1,96(1,69%, dok je isti postotak kod aneuploidnih tumora bio u rasponu od 0,22% do 18,44%, uz medijan od 2,13% te srednju vrijednost od 3,38(3,09% (t=3,5, p<0,001). Raspodjela tumora u podskupine s niskom, srednjom i visokom proliferacijskom aktivnoau na osnovi razdiobe vrijednosti S-faza po tercilama za diploidnu i aneuploidnu skupinu tumora prikazana je u tablici 2. Tablica 2. Razdioba skupina proliferacijske aktivnosti na osnovu raspodjele vrijednosti S-faza po tercilama i ploidnosti Proliferacijska aktivnost % stanica u S-fazi Diploidni tumori Aneuploidni tumori Niska (1,25 (1,48 Srednja 1,26< % (1,91 1,49< % (4,51 Visoka >1,91 >4,51 S obzirom na sadr~aj DNA, jednak broj karcinoma (76) imao je diploidne i aneuploidne histograme, uz pribli~no podjednaku distribuciju tumora s niskom, srednjom i visokom proliferacijskom aktivnoau. Kada se promatra kvartilna razdioba dobivenih vrijednosti DNA-indeksa (DI) tumorskog tkiva, uo ava se njihova bimodalna distribucija, s najveom u estaloau tumora u diploidnom podru ju (DI= 0,95-1,05) te u aneuploidnom podru ju s DI>1,57. Obilje~ja ispitivane skupine T1a,b-karcinoma dobivena DNA-analizom proto nom citometrijom prikazana su u tablici 3. Tablica 3. Obilje~ja dobivena DNA-analizom proto nom citometrijom T1a,b- karcinoma dojke Obilje~je Broj % Ploidnost diploidni 76 50 aneuploidni 76 50 DNA-indeks( <0,95 10 6,6 0,95-1,05 76 50 1,05-1,57 28 18,4 >1,57 38 25 S-faza niska 53 34,9 srednja 52 34,2 visoka 47 30,9 (kvartilna raspodjela Raspodjela T1a,b-karcinoma dojke na osnovu udru~ene vrijednosti ploidnosti i S-faze prikazana je u tablici 4. Tablica 4. Raspodjela T1a,b-karcinoma na osnovu udru~ene vrijednosti ploidnosti i S- faze skupina N % 1.diploidni+niska S-faza 27 17,8 2.diploidni+srednja ili visoka S-faza/ aneupoidni+niska S-faza 76 50 3.aneuploidni+visoka S-faza 49 32,2 S obzirom na udru~enu vrijednost ploidnosti i S-faze najzastupljenija je skupina 2 T1a,b-karcinoma koju ine diploidni tumori sa srednjom ili visokom S- fazom i aneuploidni tumori s niskom S-fazom (50%), dok su najmanje zastupljeni T1a,b-karcinomi u skupini 1 koju ine diploidni tumori s niskom S-fazom (17,8%). Analiza povezanosti klini ko-patoloakih imbenika T1a,b-karcinoma s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima (N0/N1) Prosje na dob bolesnica s T1a,bN0-karcinomima bila je 58,611 godina, dok je prosje na dob bolesnica s T1a,bN1-karcinomima bila 58,510,8 godina (t=0,03, p=0,93). U statisti koj analizi ispitanice su s obzirom na dob podjeljene u skupinu bolesnica ija je dob ( 50 godina i skupinu ija je dob > 50 godina ~ivota. Medijan veli ine T1a,bN0-tumora iznosio je 0,9 cm (raspon vrijednosti: 0,4-1 cm, prosje na veli ina 0,80,19 cm), dok je medijan veli ine T1a,bN1-tumora iznosio 1 cm (raspon vrijednosti: 0,5-1 cm, prosje na veli ina 0,880,15 cm) (z=2,18, p=0,029). U statisti koj analizi tumori su s obzirom na veli inu podjeljeni u T1a i T1b skupinu po TNM klasifikaciji. S obzirom na mali broj karcinoma u pojedinim skupinama histoloakih tipova, tumori su u statisti koj analizi podjeljeni u skupinu duktalnih i skupinu tumora ne-duktalne morfolgije (lobularni, mijeaani duktalni i lobularni, histoloaki tipovi s posebno povoljnom prognozom i ostali rijetko zastupljeni histoloaki tipovi). Univarijatna analiza ( testom povezanosti klini ko-patoloakih imbenika T1a,b-karcinoma s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima prikazana je u tablici 5. Tablica 5. Prikaz povezanosti klini ko-patoloakih imbenika T1a,b-karcinoma dojke s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima Obilje~je N0 (%) N1 (%) p( Veli ina T1a 18 (16) 1 (2,5) 0,026 T1b 94 (84) 39 (97,5) Dob (godine) (50 23 (20,9) 9 (23,7) 0,72 >50 87 (79,1) 29 (76,3) Histoloaki tip duktalni 72 (64) 34 (85) 0,014 ne-duktalni 40 (36) 6 (15) Stupanj diferencijacije 1 70 (62,5) 17 (42,5) 0,083 2 31 (27,7) 16 (40) 3 11 (9,8) 7 (17,5) Limfokapilarna invazija da 6 (5,4) 12 (30) <0,001 ne 106 (94,6) 28 (70) Neinvazivna sastavnica da 66 (58,9) 28 (70) 0,216 ne 46 (41,1) 12 (30) Hormonski receptori pozitivni 100 (89,3) 34 (85) 0,471 negativni 12 (10,7) 6 (15) HER2/neu pozitivan 4 (3,6) 5 (12,5) 0,04 negativan 108 (96,4) 35 (87,5) ( (2 test Pojavnost metastaza u regionalnim limfnim vorovima je statisti ki zna ajno povezana s veli inom (T1a/T1b) ((2 test: 4,96; p=0,026), histoloakim tipom (duktalna/ne-duktalna morfologija) ((2 test: 5,99; p=0,014), limfokapilarnom invazijom ((2 test: 17,14; p<0,001) te izra~enoau proteina HER2/neu ((2 test: 4,21; p=0,04). Takoer se uz histoloaki stupanj diferencijacije u statisti koj analizi procjenjivala povezanost pojedinih sastavnica Nottinghamskog indeksa (zastupljenosti ~ljezdane grae, diferencijacije jezgara, broja mitoza) s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima (tablica 6). Tablica 6. Prikaz povezanosti pojedinih sastavnica Nottinghamskog indeksa T1a,b- karcinoma dojke s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima Obilje~je N0 (%) N1 (%) p( }ljezdana graa 1 16 (14,3) 4 (10) 0,226 2 44 (39,3) 22 (55) 3 52 (46,4) 14 (35) Diferencijacija jezgara 1 45 (40,2) 8 (20) 0,011 2 55 (49,1) 21 (52,5) 3 12 (10,7) 11 (27,5) Broj mitoza 1 81 (72,3) 23 (57,5) 0,223 2 20 (17,9) 11 (27,5) 3 11 (9,8) 6 (15) ( (2 test Od sastavnica Nottinghamskog indeksa samo je stupanj diferencijacije tumorskih jezgara statisti ki zna ajno povezan s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima ((2 test: 8,99; p=0,011). Odnos klini ko-patoloakih imbenika T1a,b-karcinoma i pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima procjenjivan je i univarijatnom logisti kom regresijom (tablica 7). Ovom je analizom pokazana statisti ki zna ajna povezanost histoloakog tipa (RR:3,14; 95%CI:1,2-8,3; p=0,018), histoloakog stupnja diferencijacije (RR:1,72; 95%CI:1,04-2,85; p=0,034) i limfokapilarne invazije (RR:7,6; 95%CI:2,6-21,9; p<0,001) s pojavnoau metastaza. Veli ina tumora (T1a/T1b) te izra~enost proteina HER2/neu su s grani nom statisti kom zna ajnoau o ovoj analizi (p=0,054 i p=0,053). Univarijatnom logisti kom regresijom procjenjivana je i povezanost pojedinih sastavnica Nottinghamskog indeksa s pojavnoau metastaza u regionalnim limfnim vorovima (tablica 8). I ovom je analizom pokazano da je od sastavnica Elston-Ellisovog indeksa samo stupanj diferencijacije tumorskih jezgara statisti ki zna ajno povezan s postojanjem metastaza u pazuanim limfnim vorovima (RR:2,27; 95%CI:1,29-3,96; p=0,004) Tablica 7. Prikaz analize povezanosti klini ko-patoloakih imbenika T1a,b-karcinoma dojke s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima univarijatnom logisti kom regresijom Obilje~je RR( 95%CI( p Veli ina (T1b/T1a) 7,5 0,96-57,8 0,054 Dob (godine) ((50/>50) 0,85 0,35-2,05 0,72 Histoloki tip (ne-duktalni/duktalni) 3,14 1,2-8,3 0,018 Stupanj diferencijacije (3/2 ; 2/1) 1,72 1,04-2,85 0,034 Limfokapilarna invazija (da/ne) 7,6 2,6-21,9 <0,001 Neinvazivna sastavnica (ne/da) 0,61 0,28-1,33 0,218 Hormonski receptori (ne/da) 1,47 0,51-4,22 0,473 HER2/neu (pozitivan/negativan) 3,86 0,98-15,2 0,053 ( relativni rizik ( interval povjerenja Tablica 8. Prikaz analize povezanosti pojedinih sastavnica Nottinghamskog indeksa T1a,b-karcinoma dojke s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima univarijatnom logisti kom regresijom Obilje~je RR( 95%CI( p }ljezdana graa (3/2 ; 2/1) 0,86 0,51-1,45 0,574 Diferencijacija jezgara (3/2 ; 2/1) 2,27 1,29-3,96 0,004 Broj mitoza (3/2 ; 2/1) 1,4 0,9-2,46 0,117 ( relativni rizik ( interval povjerenja Analiza povezanosti imbenika dobivenih DNA-analizom T1a,b-karcinoma proto nom citometrijom s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima (N0/N1) Univarijatna analiza ( testom povezanosti imbenika dobivenih DNA- analizom T1a,b-karcinoma proto nom citometrijom s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima prikazana je u tablici 9. Tablica 9. Prikaz povezanosti imbenika dobivenih DNA-analizom T1a,b-karcinoma dojke proto nom citometrijom s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima Obilje~je N0 (%) N1 (%) p( Ploidnost diploidni 62 (55,4) 14 (35) 0,027 aneuploidni 50 (44,6) 26 (65) DNA-indeks( <0,95 8 (7,1) 2 (5) 0,035 0,95-1,05 62 (55,4) 14 (35) 1,05-1,57 15 (13,4) 13 (32,5) >1,57 27 (24,1) 11 (27,5) S-faza Niska 42 (37,5) 11 (27,5) 0,44 Srednja 38 (33,9) 14 (35) Visoka 32 (28,6) 15 (37,5) Ploidnost+S-faza 1 24 (21,4) 3 (7,5) 0,025 2 58 (51,8) 18 (45) 3 30 (26,8) 19 (47,5) ( (2 test ( kvartilna distribucija Ploidnost je u statisti ki zna ajnoj mjeri povezana s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima ((2 test: 4,89; p=0,027). Ta je razlika vidljiva i u kvartilnoj distribuciji DNA-indeksa, gdje se u T1a,bN1-skupini uz smanjenu proporciju karcinoma s DNA-indeksom 0,95-1,05 (diploidni tumori) uo ava vea proporcija tumora s DNA-indeksom 1,05-1,57 (aneuploidni tumori niskog DNA- indeksa) u odnosu na T1a,bN0-skupinu ((2 test: 8,63; p=0,035). Udru~ene vrijednosti ploidnosti i S-faze pokazuju statisti ki zna ajnu razliku u raspodjeli izmeu ispitivanih skupina, s ni~om u estalosti skupine 1 (diploidni tumori s niskom S- fazom) i viaom u estaloau skupine 3 (aneuploidni tumori s visokom S-fazom) u T1a,bN1-skupini u odnosu na T1a,bN0-skupinu karcinoma ((2 test: 7,41; p=0,025). Vrijednosti S-faze nisu u statisti ki zna ajnoj mjeri povezane s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima ((2 test: 1,61; p=0,44). Povezanost ploidnosti, S-faze tumorskih stanica te udru~ene vrijednosti ploidnosti i S-faze s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima istra~ivana je i univarijatnom logisti kom regresijom (tablica 10). Tablica 10. Prikaz analize povezanosti imbenika dobivenih DNA-analizom T1a,b- karcinoma dojke proto nom citometrijom s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima univarijatnom logisti kom regresijom Obilje~je RR( 95%CI( p Ploidnost (aneuploidni/diploidni) 2,3 1,09-4,87 0,029 S-faza (visoka/srednja ; srednja/niska) 1,33 0,85-2,09 0,209 Ploidnost+S-faza (3/2 ; 2/1) 2,17 1,23-3,84 0,008 ( relativni rizik ( interval povjerenja Ovom je analizom utvrena statisti ki zna ajna povezanost ploidnosti (RR:2,3; 95%CI:1,09-4,87; p=0,029) i udru~ene vrijednosti ploidnosti i S-faze (RR:2,17; 95%CI:1,23-3,84; p=0,008) s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima. Analiza nezavisne povezanosti klini ko-patoloakih imbenika i imbenika dobivenih DNA-analizom proto nom citometrijom T1a,b-karcinoma s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima (N0/N1) U procjeni nezavisne povezanosti svih ispitivanih imbenika s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima kod T1a,b-karcinoma dojke multivarijatnom logisti kom regresijom uklju eni su imbenici koji su u univarijatnoj analizi pokazali statisti ku zna ajnost (p<0,05): veli ina tumora (T1a/T1b), histoloaki tip (duktalni/ne-duktalni), stupanj diferencijacije jezgara (gradus jezgre), postojanje limfokapilarne invazije, izra~enost proteina HER2/neu. S obzirom da se viae prognosti kih imbenika dobivenih DNA-analizom proto nom citometrijom pokazalo statisti ki zna ajnim u univarijatnoj analizi (ploidnost, DNA-indeks, udru~ena vrijednost ploidnosti i S-faze), a isti se u odreenoj mjeri preklapaju (ploidnost je definirana DNA-indeksom, a udru~ena je sa S-fazom u procjeni udru~ene vrijednosti imbenika), za multivarijatnu analizu odabrana je udru~ena vrijednost ploidnosti i S- faze kao imbenik s najviaom statisti kom zna ajnosti u univarijatnoj analizi. Multivarijatna logisti ka regresija je pokazala da je limfokapilarna invazija jedini imbenik koji pokazuje nezavisnu povezanost s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima kod T1a,b-karcinoma dojke (RR:4,57; 95%CI 1,44-14,49; p=0,01) (tablica 11). Udru~ena vrijednost imbenika dobivenih DNA-analizom proto nom citometrijom (ploidnost+S-faza) u multivarijatnoj logisti koj regresiji pokazuje nezavisnu povezanost s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima kod T1a,b-karcinoma dojke na razini zna ajnosti od 91% (RR:1,7; 95%CI 0,92-3,17; p=0,089). Tablica 11. Prikaz analize nezavisne povezanosti ispitivanih imbenika T1a,b- karcinoma dojke s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima multivarijatnom logisti kom regresijom Obilje~je RR( 95%CI( p Veli ina (T1b/T1a) 5,08 0,63-40,84 0,126 Histoloaki tip (ne-duktalni/duktalni) 2,41 0,84-6,91 0,101 Diferencijacija jezgara (3/2 ; 2/1) 1,35 0,68-2,67 0,381 Limfokapilarna invazija (da/ne) 4,57 1,44-14,49 0,01 HER2/neu (pozitivan/negativan) 1,77 0,37-8,41 0,468 Ploidnost+S-faza (3/2 ; 2/1) 1,7 0,92-3,17 0,089 ( relativni rizik ( interval povjerenja Analiza povezanosti ispitivanih imbenika u skupini T1a,b-karcinoma bez limfokapilarne invazije s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima (N0/N1) S obzirom na nezavisnu prognosti ku vrijednost limfokapilarne invazije u procjeni postojanja pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima dojke, obavljena je univarijatna i multivarijatna analiza povezanosti ispitivanih imbenika s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima kod T1a,b-karcinoma dojke koji su bili bez limfokapilarne invazije, a u svrhu pronala~enja drugih nezavisnih prognosti kih imbenika. Takvih je tumora bilo 134, od kojih je 106 karcinoma pripadalo T1a,bN0-skupini, a 28 T1a,bN1-skupini. Univarijatna analiza ( testom povezanosti klini ko-patoloakih imbenika s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima u skupini T1a,b-karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije prikazana je u tablici 12. Pojavnost metastaza u regionalnim limfnim vorovima u skupini T1a,b- karcinoma bez limfokapilarne invazije je statisti ki povezana s histoloakim tipom (duktalni/ne-duktalni) ((2 test: 5,149; p=0,023) te izra~enoau proteina HER2/neu ((2 test: 7,961; p=0,005). Veli ina tumora u ovoj skupini karcinoma je statisti ki povezana s pojavnoau metastaza u regionalnim limfnim vorovima na razini zna ajnosti od 93% ((2 test: 3,273; p=0,07). Univarijatna analiza ( testom povezanosti pojedinih sastavnica Nottinghamskog indeksa s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima u skupini T1a,b-karcinoma bez limfokapilarne invazije prikazana je u tablici 13. Niti jedna od sastavnica Nottinghamskog indeksa u skupini T1a,b-karcinoma bez limfokapilarne invazije nije statisti ki zna ajno povezana s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima. Tablica 12. Prikaz povezanosti klini ko-patoloakih imbenika T1a,b-karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima Obilje~je N0 (%) N1 (%) p( Veli ina T1a 18 (17) 1 (3,6) 0,07 T1b 88 (83) 27 (96,4) Dob (godine) (50 23 (22,1) 6 (22,2) 0,86 >50 81 (77,9) 21 (77,8) Histoloki tip duktalni 67 (63,2) 24 (85,7) 0,023 ne-duktalni 39 (36,8) 4 (14,3) Stupanj diferencijacije 1 68 (64,2) 15 (53,6) 0,24 2 30 (28,3) 8 (28,6) 3 8 (7,5) 5 (17,8) Neinvazivna sastavnica da 63 (59,4) 20 (71,4) 0,245 ne 43 (40,6) 8 (28,6) Hormonski receptori pozitivni 96 (90,6) 24 (85,7) 0,455 negativni 10 (9,4) 4 (14,3) HER2/neu pozitivan 2 (1,9) 4 (14,3) 0,005 negativan 104 (98,1) 24 (85,7) ( (2 test Tablica 13. Prikaz povezanosti pojedinih sastavnica Nottinghamskog indeksa T1a,b- karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima Obilje~je N0 (%) N1 (%) p( }ljezdana graa 1 16 (15,1) 3 (10,7) 0,362 2 41 (38,7) 15 (53,6) 3 49 (46,2) 10 (35,7) Diferencijacija jezgara 1 44 (41,5) 7 (25) 0,194 2 52 (49,1) 16 (57,1) 3 10 (9,4) 5 (17,9) Broj mitoza 1 79 (74,5) 18 (64,3) 0,253 2 19 (17,9) 5 (17,9) 3 8 (7,5) 5 (17,9) ( (2 test Analiza povezanosti klini ko patoloakih imbenika s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima univarijatnom logisti kom regresijom prikazana je u tablici 14. I ova analiza pokazuje da je pojavnost metastaza u regionalnim limfnim vorovima u skupini T1a,b-karcinoma bez limfokapilarne invazije statisti ki zna ajno povezana s histoloakim tipom (duktalni/ne-duktalni) (RR:2,8; 95%CI:0,93-8,86; p=0,03) te izra~enoau proteina HER2/neu (RR:8,67; 95%CI:1,5-50,1; p=0,016). Tablica 14. Prikaz analize povezanosti klini ko-patoloakih imbenika T1a,b- karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima univarijatnom logisti kom regresijom Obilje~je RR( 95%CI( p Veli ina (T1b/T1a) 5,5 0,70-43,3 0,104 Dob(godine) ((50/>50) 0,99 0,36-2,75 0,99 Histoloki tip (duktalni/ne-duktalni) 2,8 0,93-8,86 0,03 Stupanj diferencijacije (3/2 ; 2/1) 1,55 0,86-2,8 0,144 Neinvazivna sastavnica (ne/da) 0,58 0,24-1,45 0,248 Hormonski receptori (ne/da) 1,6 0,46-5,5 0,459 HER2/neu (pozitivan/negativan) 8,67 1,5-50,1 0,016 ( relativni rizik ( interval povjerenja Univarijatne analize ( testom i logisti kom regresijom povezanosti imbenika dobivenih DNA-analizom proto nom citometrijom s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima u skupini T1a,b-karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije prikazane su u tablici 15 i tablici 16. Pojavnost metastaza u pazuanim limfnim vorovima statisti ki je zna ajno povezana s ploidnoau ((2 test: 3,874; p=0,049) te udru~enom vrijednoau ploidnosti i S-faze ((2 test: 6,687; p=0,035). Analizom univarijatnom logisti kom regresijom samo udru~ena vrijednost ploidnosti i S-faze pokazuje statisti ki zna ajnu povezanost s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima (RR:2,38; 95%CI:1,2-4,7; p=0,013), dok je ploidnost na granici statisti ke zna ajnosti (RR:2,35; 95%CI:0,99-5,57; p=0,053). Tablica 15. Prikaz povezanosti imbenika dobivenih DNA-analizom T1a,b-karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije proto nom citometrijom s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima Obilje~je N0 (%) N1 (%) p( Ploidnost diploidni 60 (56,6) 10 (35,7) 0,049 aneuploidni 46 (43,4) 18 (64,3) DNA-indeks( <0,95 8 (7,5) 2 (7,1) 0,094 0,95-1,05 60 (56,6) 10 (35,7) 1,05-1,57 14 (13,2) 10 (35,7) >1,57 24 (22,6) 6 (21,4) S-faza Niska 41 (38,7) 8 (28,6) 0,614 Srednja 36 (34) 11 (39,3) Visoka 29 (27,4) 9 (32,1) Ploidnost+S-faza 1 23 (21,7) 1 (3,6) 0,035 2 57 (53,8) 15 (53,6) 3 26 (24,5) 12 (42,9) ( (2 test ( kvartilna distribucija Tablica 16. Prikaz analize povezanosti imbenika dobivenih DNA-analizom T1a,b- karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije proto nom citometrijom s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima univarijatnom logisti kom regresijom Obilje~je RR( 95%CI( p Ploidnost (aneuploidni/diploidni) 2,35 0,99-5,57 0,053 S-faza (visoka/srednja ; srednja/niska) 1,26 0,75-2,12 0,38 Ploidnost+S-faza (3/2 ; 2/1) 2,38 1,2-4,7 0,013 ( relativni rizik ( interval povjerenja Analiza nezavisne povezanosti ispitivanih imbenika u skupini T1a,b-karcinoma bez limfokapilarne invazije s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima (N0/N1) U procjeni nezavisne povezanosti svih ispitivanih imbenika s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima u skupini T1a,b-karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije multivarijatnom logisti kom regresijom uklju eni su imbenici koji su u univarijatnoj analizi pokazali statisti ku zna ajnost (p<0,05). Meu klini ko-patoloakim imbenicima uklju eni su histoloaki tip (duktalni/ne-duktalni) i izra~enost proteina HER2/neu, dok je meu imbenicima dobivenim DNA-analizom proto nom citometrijom uklju ena udru~ena vrijednost ploidnosti i S-faze kao imbenik s najviaom statisti kom zna ajnosti u univarijatnoj analizi (tablica 17). Tablica 17. Prikaz analize nezavisne povezanosti ispitivanih imbenika T1a,b- karcinoma dojke bez limfokapilarne invazije s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima multivarijatnom logisti kom regresijom Obilje~je RR( 95%CI( p Histoloaki tip (duktalni/ne-duktalni) 2,52 0,78-8,13 0,784 HER2/neu (pozitivan/negativan) 8,82 1,3-56,3 0,021 Ploidnost+S-faza (3/2 ; 2/1) 2,45 1,18-5,07 0,016 ( relativni rizik ( interval povjerenja Multivarijatna logisti ka regresija je u ovoj skupini karcinoma pokazala da su imbenici koji pokazuju nezavisnu povezanost s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima izra~enost proteina HER2/neu (RR:8,82; 95%CI:1,3-56,3; p=0,021) te udru~ena vrijednost ploidnosti i S-faze dobivena DNA-analizom proto nom citometrijom (RR:2,45; 95%CI:1,18-5,07; p=0,016). 5.RASPRAVA Uvoenjem programa ranog otkrivanja raka dojke, sa mamografskim probirom kao metodom izbora, smanjuje se prosje na veli ina karcinoma dojke uz porast proporcije T1a,b-karcinoma meu novootkrivenim tumorima. Premda je prognoza bolesnica s T1a,b-karcinomima openito dobra, rije  je o heterogenoj skupini tumora kod koje postoje karcinomi s agresivnim bioloakim ponaaanjem koji zahtjevaju dodatnu sistemsku terapiju (58,82). U skupinu bioloaki agresivnih T1a,b- karcinoma spadaju karcinomi s metastazama u regionalnim limfnim vorovima, ali i tumori koji unato  nezahvaenim limfnim vorovima pokazuju nepovoljna patobioloaka obilje~ja (hormonska neosjetljivost, visoki gradus, postojanje peritumoralne limfokapilarne invazije, HER2/neu pozitivitet, mlaa ~ivotna dob bolesnica) (26,81,82). S druge strane, budui da je postotak zahvaenosti limfnih vorova u skupini T1a,b-karcinoma relativno mali, a neki od njih pokazuju bioloaki agresivan tijek unato  nepostojanja metastaza u limfnim vorovima (lokalni povrat bolesti i/ili razvoj sistemske bolesti), postavlja se pitanje potrebe rutinske pazuane disekcije u ovoj skupini karcinoma dojke (10,42,53,74,77,80,81). Tu se kao alternativa pazuanoj disekciji nudi selektivna pazuana disekcija nakon biopsije limfnog vora uvara i/ili nakon procjene patobioloakih obilje~ja tumora u svrhu otkrivanja karcinoma s malim rizikom zahvaanja limfnih vorova (78,83,88,89,112,113). S obzirom na opre na mialjenja o mogunosti utvrivanja skupine T1a,b-karcinoma dojke s povoljnim bioloakim ponaaanjem na osnovi patobioloakih obilje~ja tumorskih stanica, u ovom se radu istra~ila uloga kako tradicionalnih patohistoloakih obilje~ja, tako i obilje~ja dobivenih DNA-analizom tumorskog tkiva proto nom citometrijom u procjeni pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod ovih tumora. U ovom je istra~ivanju meu tradicionalnim patohistoloakim obilje~jima T1a,b-karcinoma univarijatnom analizom dokazana zna ajna povezanost pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima s veli inom tumora (T1a/T1b), histoloakim tipom (duktalni/ne-duktalni), histoloakim stupnjem diferencijacije, nuklearnim gradusom, limfokapilarnom invazijom i izra~enoau proteina HER2/neu. Dob ((50/>50 godina), postojanje neinvazivne sastavnice i hormonski receptori su obilje~ja koja se nisu pokazala statisti ki zna ajnima u univarijatnoj analizi. U gotovo svim istra~ivanjima pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod T1a,b-tumora dojke prikazana je vea u estalost metastaza kod T1b u odnosu na T1a-karcinome (8,43,44,49,50-55). To je potvreno i u ovom istra~ivanju, gdje se metastatska bolest u limfnim vorovima naala u samo jednom od 19 T1a-karcinoma (5,2%). S obzirom na nisku u estalost metastaza u regionalnim limfnim vorovima u T1a-skupini, koja se u veini radova kree izmeu 0-5%, izbjegavanje pazuane disekcije u ovoj skupini karcinoma ini se opravdano, pogotovo ako su niskog histoloakog gradusa, bez limfokapilarne invazije, prognosti ki povoljnih histoloakih tipova te ukoliko se javljaju u postmenopauzalnih ~ena (44,51,52,60,74-77,88,114). Uporabom modela koji obuhvaa postotak pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima ovisan o veli ini tumora, promjenama u klini kom odlu ivanju temeljene na utvrenom statusu regionalnih limfnih vorova, morbiditetu pazuane disekcije te efikasnosti adjuvantne kemoterapije, izra unato je da rizik pojavnosti lokoregionalnih limfati kih metastaza >15% opravdava pazuanu disekciju u svakom pojedinom slu aju T1-raka dojke (115). Ako bi se ovaj model odlu ivanja prihvatio, grani nik za obaveznu pazuanu disekciju bi ponovo bili T1b-tumori kod kojih je prosje na vrijednost postotka metastaza u pazuanim limfnim vorovima oko 15%, ato bi u potpunosti opravdalo izostanak disekcije kod T1a-tumora (83). Objaanjenje za stjecanje metastatskog potencijala tumorskih stanica na prijelazu T1a u T1b-karcinome dojke vjerojatno le~i u injenici da tumor postaje bioloaki agresivniji kako postaje vei (razvoj metastatskih subklonova). To potvruje i linearan odnos izmeu gradusa jezgre i veli ine tumora, kao i smanjen mortalitet od raka dojke uz smanjenje prosje ne veli ine tumora u zemljama s mamografskim probirom (14,83). U procjeni odnosa histoloakih tipova T1a,b-karcinoma i nastanka metastaza u regionalnim limfnim vorovima karcinomi su u ovom radu, zbog malog broja pojedinih histoloakih tipova u ispitivanoj skupini T1a,bN1-karcinoma, podjeljeni u skupinu tumora duktalne i skupinu tumora ne-duktalne morfologije. Ustanovljena je je statisti ki zna ajna povezanost duktalne morfologije s pojavnoau metastastaza u regionalnim limfnim vorovima. Ova je razlika uvjetovana manjom zastupljenoau prognosti ki povoljnih, ne-duktalnih histoloakih tipova (tubularni, mucinozni, kribriformni, tubulolobularni) u skupini T1a,bN1-karcinoma (5%) u odnosu na T1a,bN0-skupinu (13,4%), ato potvruju radovi u kojima je istra~ivana u estalost metastaza u limfnim vorovima kod prognosti ki povoljnih histoloakih tipova T1a,b- karcinoma (50, 62). S druge strane, u skupini T1a,bN1-karcinoma nije naen niti jedan karcinom klasi ne lobularne morfologije, dok ih je u T1a,bN0-skupini bilo 8%. Taj je rezultat u suprotnosti s rezultatom Maibenica i suradnika koji nalaze veu u estalost metastaza u limfnim vorovima kod T1a-lobularnih karcinoma u odnosu na T1a-duktalne karcinome (51). injenica da u ovom istra~ivanju nije naen niti jedan T1a,bN1-karcinom klasi ne lobularne morfologije predstavlja iznenaenje s obzirom na temeljno molekularno obilje~je ovih karcinoma  gubitak adhezijske molekule E-cadherina. Gubitak ove molekule uvjetuje, uz smanjene adhezivnosti tumorskih stanica i promjene regulacije njihove pokretljivosti zbog povezanosti s proteinima citoskeleta, aktivaciju (-catenina koji djeluje kao transkripcijski imbenik koji regulira izra~enost nekih protoonkogena (cyclin D1, c-myc) s kona no veim metastatskim potencijalom lobularnih karcinoma (116). S druge strane valja navesti da neka istra~ivanja pokazuju da je prognoza kod bolesnica s lobularnim karcinomom u klini kom stadiju 1 bolja no kod bolesnica s duktalnim karcinomom istog klini kog stadija (117). Naposljetku, citogenetske studije pokazuju da lobularni karcinomi imaju relativno mali broj kromosomskih promjena na osnovi kojih pokazuju citogenetsku sli nost sa duktalnim karcinomima niskog gradusa, koji su najmanje bioloaki agresivni (116). U ovom istra~ivanju utvrena je statisti ki zna ajna povezanost histoloakog stupnja diferencijacije s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima univarijatnom logisti kom regresijom, ato potvruje itav niz radova koji navode najveu u estalost metastaza kod najslabije diferenciranih tumora (51,53,55,57-61). Manji broj radova ne bilje~i postojanje gore navedene povezanosti (44,62,63). Istra~ujui odnos svake pojedine sastavnice Nottinghamskog histoloakog stupnja diferencijacije samo je stupanj diferencijacije tumorskih jezgara pokazao statisti ki zna ajnu povezanost s pojavnoau metastaza u limfnim vorovima, kao u istra~ivanju Saiz i suradnika u skupini T1b-tumora (44). Barth i suradnici u svom istra~ivanju koriste stupanj diferencijacije tumorskih jezgara umjesto Nottinghamskog stupnja histoloake diferencijacije te takoer nalaze statisti ki zna ajnu povezanost istog s metastazama u limfnim vorovima u skupini T1-karcinoma (54). S tim u vezi, neki radovi navode manju prognosti ku vrijednost Nottinghamskog histoloakog stupnja diferencijacije u procjeni pre~ivljenja bolesnica s T1-karcinomom dojke u odnosu na njegovu vrijednost kod bolesnica s veim karcinomima (36,37). Pri tome nije samo u pitanju subjektivna narav procjene pojedinih sastavnica ovog sustava, ve injenica da taj sustav stupnjevanja mo~da nije prikladan za ovu skupinu karcinoma (36). Frkovi-Grazio i Bra ko u svom istra~ivanju navode da su grani ne vrijednosti mitotskog zbroja unutar Nottinghamskog sustava stupnjevanja previsoke za T1-karcinome, pri emu smanjivanjem grani nih vrijednosti mitotski zbroj postaje najja i nezavisni prognosti ki imbenik u pre~ivljenju kod ovih karcinoma u njihovom radu (38). Ako prihvatimo grani nu vrijednost od >75 % ~ljezdane grae za stupanj 1 ~ljezdane diferencijacije po Notthingamskom sustavu, onda, s obzirom na mali volumen T1a,b- tumora, ne iznenauje rezultat ovog istra~ivanja prema kojem je samo 13% T1a,b- tumora imalo stupanj 1 ~ljezdane diferencijacije, a jedino je gradus jezgre pokazao statisti ki zna ajnu povezanost s pojavnoau metastaza u limfnim vorovima. Peritumoralna limfokapilarna invazija se meu tradicionalnim prognosti kim imbenicima pokazala kao imbenik sa statisti ki najzna ajnijom povezanoau s postojanjem metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod T1a,b-karcinoma u ovom istra~ivanju. `toviae, limfokapilarna invazija se pokazala kao jedini nezavisni prognosti ki imbenik meu svim istra~ivanim imbenicima. S obzirom da je postojanje metastaza u regionalnim limfnim vorovima direktna posljedica invazije peritumoralnih limfati kih ~ila, ne iznenauje podatak da je ona prikazana kao jedini nezavisni predskazatelj metastaza u regionalnim limfnim vorovima kod T1- karcinoma dojke u itavom nizu radova (53,54,57,66,67). Kada se uzmu u obzir radovi u kojima je istra~ivana samo skupina T1a,b-karcinoma, u kojima je limfokapilarna invazija istra~ivana kao prognosti ki imbenik, ovo je istra~ivanje jedino u kojem je ona prikazana kao nezavisni prognosti ki imbenik. U drugim je radovima prikazana kao statisti ki zna ajan imbenik u univarijatnoj analizi povezanosti s metastazama u limfnim vorovima (59,63). U istra~ivanju Manna i suradnika limfokapilarna invazija nije pokazala statisti ki zna ajnu povezanost s metastazama u limfnim vorovima, ali je bila povezana s loaijim pre~ivljenjem bolesnica s T1a,b-karcinomima koji su bili bez nodalnih metastaza (62). HER2/neu je protoonkogen koji kodira transmembranski protein ija je ekstracelularna domena receptor za imbenik rasta, a ija se pretjerana izra~enost rutinski odreuje kod karcinoma dojke. Ovaj je gen amplificiran kod 10-20% karcinoma dojke, pri emu je pretjerana izra~enost proteina HER2/neu povezana s visokim histoloakim gradusom, smanjenim pre~ivljenjem te loaijim terapijskim odgovorom na hormonsku terapiju kao i neke kemoterapijske protokole (117,118). U ovom radu pretjerana izra~enost proteina HER2/neu naala se u 5,9% slu ajeva T1a,b- karcinoma dojke, te se pokazala kao statisti ki zna ajan imbenik u procjeni pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima u ovoj skupini tumora. Izra~enost ovog proteina se ne spominje u radovima u kojima se istra~ivala bioloaka agresivnost T1a,b-karcinoma dojke u smislu pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima, i to uglavnom stoga ato su spomenuti radovi iz razdoblja u kojem imunohistokemijsko odreivanje ovog proteina nije bilo dio rutinske patohistoloake analize tumora dojke. Ipak, u tri rada u kojima se pratio utjecaj proteina HER2/neu na pojavnost metastaza u regionalnim limfnim vorovima u airoj skupini T1-karcinoma dojke autori ne nalaze povezanosti pretjerane izra~enosti ovog proteina s metastatskom boleau u limfnim vorovima (50,53,54). S druge strane, Fehm i suradnici u radu u kojem istra~uju odnos tumorskih bioloakih imbenika i pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima u airokoj skupini T1 do T3-karcinoma navode da je pretjerana izra~enost proteina HER2/neu bila najja i nezavisni predskazatelj metastaske bolesti u limfnim vorovima (89). U tumorskoj se patologiji dojke DNA-analiza proto nom citometrijom koristi ve viae desetljea, uz dvojake rezultate koji se odnose na njen zna aj. Zaklju ak je veine radova kojima se procjenjivao njen prognosti ki zna aj da ploidnost nema nezavisnu prognosti ku vrijednost, za razliku od postotka tumorske populacije u S- fazi (proliferacijski indeks) koji se pokazao dobrim predskazateljem poveanog rizika povrata bolesti te poveane smrtnosti bolesnica s rakom dojke (117,119,120,121,122). Proliferacijski indeks mjeren DNA-analizom proto nom citometrijom pokazao se naro ito zna ajnim u odreivanju rizika za metastatski povrat bolesti u skupini bolesnica koje su lije ene kiruraki, a koje su bile bez metastaza u regionalnim limfnim vorovima, ato je potvreno i u rijetkim radovima koji su se odnosili na T1-skupinu karcinoma dojke (123,124,125). U ovom je istra~ivanju utvreno da je u skupini T1a,b-karcinoma dojke 50% tumora bilo aneuploidno. Ottesen sa suradnicima nalazi gotovo identi an rezultat od 49% aneuploidnih tumora u skupini mamografskim probirom otkrivenih karcinoma ija je veli ina (15mm, dok Ewers i suradnici u svom istra~ivanju navode da je postotak aneuploidnih tumora u skupini T1-karcinoma iznosio 51% (126,127). Ovi rezultati upuuju na injenicu da je aneuploidnost rani dogaaj u evoluciji malignih tumora dojke, ato potvruju i podaci iz literature o visokom postotku aneuploidnih tumora u neinvazivnom stadiju ove bolesti (128,129). Pri tome je va~no naglasiti da citogenetske studije kod karcinoma dojke pokazuju da se zna ajne kromosomske promjene dogaaju prije tzv. aneuploidizacije, tj. prije velikih numeri kih i neuravnote~enih strukturnih kromosomskih promjena koje je mogue otkriti proto nom citometrijom (130). Takve velike kromosomske promjene kod raka dojke nastaju pomou tri glavna mehanizma: poremeajima kromosomske segregacije u mitozi s posljedi nim gubicima ili dodacima itavih kromosoma, neuravnote~enim strukturalnim kromosomskim promjenama, te endoreduplikacijom s udvostru enjem itavog kromosomskog materijala (131). Kvartilna raspodjela DNA-indeksa u ovom radu pokazuje karakteristi nu bimodalnu razdiobu za karcinome dojke, s najveim brojem karcinoma u diploidnoj regiji (50%) te u aneuploidnoj regiji s DNA-indeksima izmeu 1,5 i 1,9 (25%). Takva bimodalna razdioba DNA-indeksa kod karcinoma dojke je posljedica odreenog citogenetskog slijeda dogaaja. Prve promjene u DNA-sadr~aju kod raka dojke su posljedica neuravnote~enih strukturalnih kromosomskih promjena koje obi no dovode do smanjenog stani nog DNA-sadr~aja (hipodiploidnost). Hipodiploidnost kod karcinoma dojke rijetko biva zadr~ana zbog endoreduplikacije koja dovodi do stvaranja tetraploidnih stani nih linija. Nakon endoreduplikacije eaa je pojava gubitaka itavih kromosoma, ato u kona nici dovodi do stvaranja aneuploidnih tumora s DNA-indeksima izmeu 1,5 i 1,9 (131). Meutim, raspodjela DNA-indeksa u ovom istra~ivanju otkriva i relativno visok postotak T1a,b-karcinoma s DNA-indeksima izmeu 1,05 i 1,5 (18,4%), ato odgovara rezultatima Ottesen i suradnika koji nalaze velik broj tumora s DNA-indeksima izmeu 1,03 i 1,45 (aneuploidni tumori s niskim DNA-indeksom) u skupini ranih karcinoma dojke (126). Ovakvi aneuploidni tumori s DNA-indeksima izmeu 1,05 i 1,5 nastaju zbog velikih kromosomskih gubitaka nakon endoreduplikacije te takoer predstavljaju kasni dogaaj u citogenetskoj evoluciji tumora dojke (131). Manji dio ovakvih tumora nastaje broj anim promjenama kromosoma bez endoreduplikacije, dobivanjem itavih kromosoma (engl. whole chromosome gains) s posljedi nim poveanim sadr~ajem DNA u hiperdiploidnom podru ju (132). Kada je rije  o proliferacijskoj aktivnosti T1a,b-karcinoma izra~enoj u postotku tumorskih stanica u S-fazi, aneuploidni tumori imaju o ekivano viae vrijednosti proliferacijskog indeksa od diploidnih tumora, pri emu su tumori sa niskim, srednjim i visokim postotkom stanica u S-fazi podjednako zastupljeni. U ovom su istra~ivanju srednje vrijednosti postotka tumorskih stanica u S-fazi, od 1,96% za grupu diploidnih i 3,38% za grupu aneuploidnih tumora, ni~e u odnosu na veinu istra~ivanja vrijednosti S-faze u karcinomima dojke (121). U istra~ivanjima potencijalne koristi DNA-analize proto nom citometrijom u procjeni pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima rezultati su proturje ni. Bergers i suradnici u svom istra~ivanju meuodnosa citometrijskih, klini kih i patoloakih imbenika karcinoma dojke navode da se od 24 istra~ivanja u kojima se procjenjivao odnos ploidnosti i metastaza u pazuanim limfnim vorovima kod kiruraki operabilnih karcinoma dojke u samo 6 radova naala statisti ki zna ajna povezanost tih dvaju imbenika. Kada je rije  o odnosu postotka tumorskih stanica u S-fazi i metastaza u limfnim vorovima, isti autori navode da se statisti ki zna ajna povezanost tih dvaju imbenika naala u 3 rada, dok se u 11 istra~ivanja povezanost ne nalazi. Autori zaklju uju da je povezanost imbenika dobivenih analizom tumorskog tkiva dojke proto nom citometrijom sa pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima slaba (133). U istra~ivanju U~arevi i suradnika naena je statisti ki zna ajna povezanost ploidnosti i proliferacijske aktivnosti sa metastazama u pazuanim limfnim vorovima u skupini duktalnih karcinoma dojke prosje ne veli ine 2,45 cm. Pri tome je ploidnost bila povezana sa nizom drugih klini ko-patoloakih imbenika (veli ina, dob, stupanj diferencijacije, izra~enost progesteronskih receptora), dok je proliferacijska aktivnost bila povezana samo sa pojavnoau pazuanih metastaza (134). U skupini T1-karcinoma dojke rijetko se procjenjivao odnos spomenutih imbenika i pojavnosti metastaza u limfnim vorovima, a u literaturi je dostupno samo jedno istra~ivanje u kojemu se taj odnos procjenjivao u skupini karcinoma promjera manjeg od 1 cm. Saiz i suradnici u svom istra~ivanju 105 T1b- karcinoma dojke ne nalaze da su ploidnosti i postotak tumorskih stanica u S-fazi povezani s pojavnoau metastaza u regionalnim limfnim vorovima (44). Isti rezultat donose i tri istra~ivanja u kojima se odnos gore spomenutih imbenika procjenjivao u airoj skupini T1-tumora (53,54,70). Chada i suradnici u svome radu nalaze vezu izmeu visokog postotka tumorskih stanica u S-fazi (>7%) i metastaza u limfnim vorovima u univarijatnoj analizi (68). Zanon i suradnici u svom istra~ivanju kombiniranog utjecaja veli ine tumora te imbenika dobivenih DNA-analizom tumorskih stanica proto nom citometrijom nalaze da je skupina T1-tumora koji su bili diploidni, a uz to i s niskom S-fazom tumorskih stanica (<7%), bila bez metastaza u regionalnim limfnim vorovima (69). U ovom se istra~ivanju utvrdila zna ajna povezanost izmeu ploidnosti, DNA- indeksa te udru~enih vrijednosti ploidnosti i S-faze s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima u univarijatnoj analizi. U skupini T1a,bN1-karcinoma 65% tumora bilo je aneuploidno, dok je u skupini T1a,bN0-tumora aneuploidnost naena u 44,6% tumora. Saiz i suradnici navode neato ni~u vrijednost od 50% aneuploidnih tumora u skupini T1bN1- karcinoma, uz napomenu da je ta skupina bila broj ano vrlo mala (44). Kvartilna raspodjela DNA-indeksa je uz diploidnu skupinu tumora (DI=0,95-1,05), aneuploidnu skupinu razvrstala u tri podskupine: hipodiploidnu (DI<0,95), aneuploidnu s niskim DNA-indeksom (hiperdiploidni i triploidni tumori, DI=1,05-1,57) i aneuploidnu s visokim DNA-indeksom (hipotetraploidni, tetraploidni i hipertetraploidni tumori, DI>1,57). Pri tome je u T1a,bN1-skupini karcinoma, uz manji broj diploidnih tumora, o ita vea zastupljenost aneuploidnih karcinoma sa niskim DNA-indeksom (32,5%) u odnosu na T1a,bN0-skupinu (13,4%). Ottesen i suradnici u svom istra~ivanju aneuploidnosti u ranom karcinomu dojke navode da je postojanje hiperdiploidnih klonova u ranom invazivnom karcinomu dojke jedina razlika u odnosu na aneuploidnost kod neinvazivnih karcinoma, te da je vjerojatno povezana s razvojem invazivnih tumorskih klonova (126). Istra~ivanja u kojima se DNA-analiza tumorskog tkiva dojke koristila u procjeni pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima nisu procjenjivala ulogu pojedinih vrijednosnih kategorija DNA-indeksa kao moguih predskazatelja metastatskog potencijala kod T1- tumora dojke. Rezultat ovog rada upuuje da aneuploidni T1a,b-tumori s niskim DNA-indeksom imaju veu sklonost stvaranja metastaza u regionalnim limfnim vorovima nego aneuploidni T1a,b-tumori s visokim DNA-indeksom. S obzirom da su obje skupine tumora rezultat kasnih dogaaja u citogenetskoj evoluciji karcinoma dojke, mogue je da vei gubitak kromosomskog materijala nakon procesa njegove endoreduplikacije, stvara klonove s veom sklonoau metastazama u limfnim vorovima. Druga je mogunost da su T1a,bN1-tumori s ni~im DNA-indeksima citogenetski razli iti, te da pripadaju skupini hiperdiploidnih tumora koji nastaju kao posljedica poremeene segregacije kromosoma s posljedi nim kromosomskim viakovima, te da kao takvi pokazuju veu sklonost nodalnim metastazama. Na zna aj udru~ene vrijednosti ploidnosti i postotka tumorskih stanica u S-fazi prvi je upozorio Kallionemi sa suradnicima, utvrdivai da je udru~ena vrijednost tih dvaju prognosti kih parametara najzna ajniji nezavisni imbenik pre~ivljenja meu istra~ivanim prognosti kim imbenicima kod raka dojke, ato potvruju i druga istra~ivanja (110,111). Udru~ena vrijednost ovih dvaju imbenika u definirane skupine na osnovi njihovog pojedina nog prognosti kog zna enja pokazala se statisti ki zna ajnom u univarijatnoj analizi povezanosti s metastazama u limfne vorove kod T1a,b-karcinoma dojke u ovom istra~ivanju, gdje je imala najveu statisti ku snagu u univarijatnoj logisti koj regresiji. Zna aj udru~ene vrijednosti ploidnosti i S-faze u procjeni pojavnosti metastatske bolesti u regionalnim limfnim vorovima kod karcinoma dojke, prema dostupnim podacima iz literature, do sada nije bio istra~ivan. U multivarijatnoj analizi svih istra~ivanih prognosti kih imbenika samo je limfokapilarna invazija prikazana kao statisti ki zna ajna u procjeni povezanosti s metastazama u regionalnim limfnim vorovima. Kako bi se istra~ila mogua vrijednost drugih prognosti kih imbenika, posebice onih dobivenih DNA-analizom proto nom citometrijom, statisti ka analiza je ponovljena u skupini T1a,b-karcinoma koji su bili bez histoloaki dokazane limfokapilarne invazije. U univarijatnoj analizi ove skupine karcinoma dokazana je zna ajna povezanost pojavnosti nodalnih metastaza s histoloakim tipom (duktalni/ne-duktalni), izra~enosti proteina HER 2/neu, ploidnosti te udru~enom vrijednosti ploidnosti i S-faze. Multivarijatnom analizom imbenika koji su se pokazali zna ajnim u univarijatnoj analizi, gdje je od dvaju imbenika dobivenih DNA-analizom proto nom citometrijom za multivarijatnu analizu odabrana udru~ena vrijednost ploidnosti i S-faze, izra~enost proteina HER 2/neu te udru~ena vrijednost ploidnosti i S-faze prikazani su kao nezavisni prognosti ki imbenici pojavnosti metastaza u regionalnim limfnim vorovima u ovoj skupini tumora. Ako se pri tome uzme u obzir mali broj HER2/neu pozitivnih karcinoma u ovoj istra~ivanoj skupini, DNA-analiza tumorskog tkiva proto nom citometrijom u obliku udru~ene vrijednosti ploidnosti i S-faze ima najsna~niju nezavisnu prognosti ku vrijednost u skupini T1a,b-karcinoma bez limfokapilarne invazije. Taj rezultat opravdava uporabu DNA-analize T1a,b-tumora proto nom citometrijom u otkrivanju bioloaki agresivne podskupine tih tumora, posebno ako su bez limfokapilarne invazije, a koja bi zahtjevala obvezatnu procjenu zahvaenosti regionalnih limfnih vorova odreivanjem statusa limfnog vora uvara ili pazuanom disekcijom. 6.ZAKLJU CI 1. U univarijatnoj analizi povezanosti klini ko-patoloakih imbenika T1a,b- karcinoma dojke s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima naena je zna ajna povezanost s: veli inom tumora (T1a/T1b), histoloakim tipom (duktalni/ne-duktalni), histoloakim stupnjem diferencijacije, stupnjem diferencijacije tumorskih jezgara, limfokapilarnom invazijom i izra~enoau proteina HER2/neu. Nije naena zna ajna povezanost pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima s: dobi ((50/>50 godina), postojanjem neinvazivne sastavnice i izra~enoau hormonskih receptora. 2. Analizom tumorskog tkiva T1a,b-karcinoma proto nom citometrijom naena je aneuploidnost u 50% karcinoma, dok je podjednak broj karcinoma pripadao podskupinama s niskim, srednjim i visokim postotkom tumorskih stanica u S-fazi. S obzirom na vrijednosti DNA-indeksa naena je bimodalna razdioba karcinoma s najveim brojem T1a,b-karcinoma u diploidnoj regiji te u aneuploidnoj regiji s DNA- indeksom veim od 1,57. Udru~ivanjem vrijednosti ploidnosti (diploidni/aneuploidni) s podskupinama postotaka tumorskih stanica u S-fazi (niska/srednja/visoka S-faza) u definirane skupine, najvei broj T1a,b-karcinoma pripadao je skupini koju su inili diploidni tumori sa srednjom ili visokom S-fazom, odnosno aneuploidni tumori s niskom S-fazom. 3. U univarijatnoj analizi povezanosti imbenika dobivenih DNA-analizom T1a,b-karcinoma proto nom citometrijom s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima, naena je zna ajna povezanost s: ploidnosti (diploidni/aneuploidni), DNA-indeksom te udru~enom vrijednoau ploidnosti i S-faze. Pri tome je kod T1a,b-karcinoma s metastazama u pazuanim limfnim vorovima uz manji broj diploidnih karcinoma naen vei broj aneuploidnih karcinoma s DNA- indeksima izmeu 1,05 i 1,57 (aneuploidnost s niskim DNA-indeksom) u odnosu na T1a,b-karcinome bez pazuanih metastaza. Nije naena zna ajna povezanost pojavnosti pazuanih metastaza s postotkom tumorskih stanica u S-fazi (niska/srednja/visoka S-faza). 4. U multivarijatnoj analizi povezanosti imbenika koji su se pokazali zna ajnim u univarijatnoj analizi samo je limfokapilarna invazija pokazala nezavisnu vrijednost. 5. U univarijatnoj analizi povezanosti svih ispitivanih imbenika s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima u skupini T1a,b-karcinoma bez histoloaki dokazane limfokapilarne invazije naena je zna ajna povezanost s: histoloakim tipom (duktalni/ne-duktalni), izra~enoau proteina HER2/neu, ploidnosti te udru~enom vrijednoau ploidnosti i S-faze. U multivarijatnoj analizi povezanosti nezavisnu vrijednost u ovoj skupini karcinoma pokazali su izra~enost proteina HER2/neu te udru~ena vrijednost ploidnosti i S-faze. 6. Ovi rezultati opravdavaju uporabu DNA-analize T1a,b-tumora proto nom citometrijom u otkrivanju bioloaki agresivne podskupine tih tumora, posebno ako su bez histoloaki dokazane limfokapilarne invazije. Ta bi podskupina T1a,b-karcinoma zahtjevala obvezatnu procjenu zahvaenosti regionalnih limfnih vorova odreivanjem statusa limfnog vora uvara ili pazuanom disekcijom. 7. SA}ETAK Cilj ovoga rada bio je istra~iti ulogu tradicionalnih klini ko-patoloakih obilje~ja, kao i obilje~ja dobivenih DNA-analizom tumorskog tkiva (ploidnost, DNA- indeks, postotak stanica u S-fazi) malih invazivnih karcinoma dojke (T1a,b) u procjeni rizika pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima. Pri tome se ~eljelo istra~iti jesu li imbenici dobiveni DNA-analizom tumorskog tkiva bolji prognosti ki skup imbenika u odnosu na tradicionalne klini ko-patoloake imbenike u otkrivanju T1a,b-karcinoma dojke s agresivnim bioloakim fenotipom. Retrospektivno su analizirana 152 T1a,b-karcinoma dojke operirana u KBC Split u razdoblju od 1997 do 2006. godine, od kojih je 40 karcinoma bilo s metastazama u pazuanim limfnim vorovima (T1a,bN1), dok je 112 karcinoma bilo bez navedenih metastaza (T1a,bN0). Uz klini ki podatak dobi bolesnika histoloakim pregledom istra~ivana su patoloaka obilje~ja tumorskog tkiva (veli ina, histoloaki tip, histoloaki stupanj diferencijacije sa svojim sastavnicama, postojanje limfokapilarne invazije, postojanje neinvazivne sastavnice). Imunohistokemijski je istra~ivana izra~enost hormonskih receptora i proteina HER2/neu, dok je DNA-analizom tumorskog tkiva proto nim citometrom odreivana ploidnost, DNA-indeks te postotak stanica u S-fazi. Odnos izmeu ispitivanih imbenika i statusa limfnih vorova ispitivan je univarijatnom i multivarijatnom analizom. Univarijatnom analizom naena je povezanost pojavnosti metastaza u pazuanim limfnim vorovima s: veli inom tumora (T1a/T1b; p= 0,026), histoloakim tipom (duktalni/ne-duktalni; p=0,014), histoloakim stupnjem diferencijacije (p=0,034), stupnjem diferencijacije tumorskih jezgara (p=0,011), limfokapilarnom invazijom (p<0,001), izra~enoau proteina HER2/neu (p=0,04), ploidnosti (p=0,027), DNA-indeksom (kvartilna distribucija dobivenih vrijednosti, p=0,035) te udru~enom vrijednoau ploidnosti i S-faze (p=0,025). Multivarijatnom analizom samo je limfokapilarna invazija prikazana kao nezavisni imbenik povezan s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima (p=0,01). Multivarijatnom analizom skupine T1a,b-karcinoma bez limfokapilarne invazije izra~enost proteina HER2/neu (p=0,021) i udru~ena vrijednost ploidnosti i S- faze (p=0,016) prikazani su kao nezavisni imbenici povezani s pojavnoau metastaza u pazuanim limfnim vorovima. Analiza DNA tumorskog tkiva proto nom citometrijom pokazala se kao korisna dopuna tradicionalnim klini ko-patoloakim obilje~jima u odreivanju agresivne bioloake podskupine T1a,b-karcinoma dojke sa metastatskom boleau u limfnim vorovima, naro ito u slu ajevima T1a,b-karcinoma bez dokazane limfokapilarne invazije. 8.SUMMARY THE ROLE OF DNA FLOW CYTOMETRY IN ASSESSMENT OF THE LIKELIHOOD OF AXILLARY LYMPH NODE METASTASES IN MINIMALY INVASIVE (T1a,b) BREAST CANCER The aim of this work was to investigate the role of the traditional clinical and pathological features, as well as the DNA flow cytometric features (ploidy, DNA index, S-phase fraction) of small invasive breast cancers (T1a,b) in the evaluation of the likelihood of axillary lymph node metastases. We wanted to establish the importance of the DNA flow cytometry in the identification of T1a,b breast cancers with aggressive phenotype, comparing the DNA flow cytometry features with the traditional prognostic indicators. The data of 152 patients with T1a,b breast carcinoma, operated in KBC Split in the period from 1997 to 2006, were retrospectively analyzed. The analysis included 40 T1a,b cancers with axillary nodal metastases (T1a,bN1), and 112 T1a,b cancers without these metastases (T1a,bN0). The clinical information of the patients age was taken into consideration, while pathological features of the T1a,b cancers were histologically investigated (tumor size, histological type, histological grade with its elements, lymphocapillary invasion, the existence of noninvasive component). Hormone receptors and HER2/neu were investigated immunohistochemically, while the ploidy, DNA index, and S-phase fraction were determined by DNA flow cytometry. The association of the investigated factors with the likelihood of axillary lymph node metastases was analyzed by univariate and multivariate analysis. The univariate analysis showed that lymph node metastases were associated with tumor size (T1a/T1b; p= 0,026), histological type (ductal/non-ductal; p=0,014), histological grade (p=0,034), nuclear grade (p=0,011), lymphocapillary invasion (p<0,001), protein HER2/neu expression (p=0,04), ploidy (p=0,027), DNA index (quartile distribution of values, p=0,035), and with combined values of ploidy and S-phase fraction (p=0,025). The multivariate analysis revealed only lymphocapillary invasion as independent factor associated with axillary nodal metastases (p=0,01). In the group of T1a,b cancers without lymphocapillary invasion the multivariate analysis showed that HER2/neu expression (p=0,021), and combined values of ploidy and S-phase fraction (p=0,016) were independent factors associated with axillary lymph node metastases. In conclusion, the DNA flow cytometric analysis appeared to be a useful addition to the traditional clinical and pathological factors in determination of the biologically aggressive group of T1a,b breast cancers with metastatic disease in the lymph nodes, particularly in the group of T1a,b cancers without proved lymphocapillary invasion. 9. LITERATURA 1. Gallager HS, Martin JE. An orientation to the concept of minimal breast cancer. Cancer 1971; 28:1505-7. 2. Hartmann WH. Minimal breast cancer. An update. Cancer 1984; 53:681-4. 3. Ackerman LV, Katzenstein AL. The concept of minimal breast cancer and the pathologist's role in the diagnosis of early carcinoma. Cancer 1977; 39:2755-63. 4. Tavassoli FA, Devilee P, ur. World Health Organization of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of the Breast and Female Genital Organs. Lyon: IARC Press, 2003. str. 11. 5. Elston CW, Ellis IO, Goulding H, Pinder SE. Role of pathology in the prognosis and management of breast cancer. U: Elston CW, Ellis IO, ur. The breast. 3. izd. Edinburgh: Churchill Livingstone, 1998: str. 385-433. 6. Tavassoli FA. Ductal carcinoma in situ: introduction of the concept of ductal intraepithelial neoplasia. Mod Path 1998; 11:140-54. 7. Van Dongen JA, Holland R, Peterse JL, Fentiman IS, Lagios MD, Millis RR i sur. Ductal carcinoma in situ of the breast; second EORTC consensus meeting. Eur J Cancer 1992; 28:626-9. 8. Chen YY, Schnitt SJ. Prognostic factors for patients with breast cancers 1 cm and smaller. Breast Cancer Res Treat 1998; 51:209-25. 9. Miller BA, Feuer EJ, Hankey BF. Recent incidence trends for breast cancer in women and the relevance of early detection: an update. Ca Cancer J Clin 1993; 43:27-41. 10. Cady B, Stone MD, Schuler JG, Thakur R, Wanner MA, Lavin PT. The new era in breast cancer: invasion, size and nodal involvement dramatically decreasing as a result of mammographic screening. Arch Surg 1996; 131:301-8. 11. Tabr L, Fagerberg CJ, Gad A i sur. Reduction in mortality from breast cancer after mass screening with mammography: randomised trial from Breast Cancer Screening Working Group. Lancet 1985; 1:829-32. 12. Seradour B. Breast cancer: generalised screening in France from now on. Rev Prat 2004; 54:830-6. 13. Chung M, Fulton J, Cady B. Trends in breast cancer incidence and presentation in a population screened for breast cancer. Semin Breast Dis 1999; 2:55-63. 14. Meyer JS, Fahrner M, Daniel FC. Pathology and behavior of small breast carcinomas. Sem Diag Pathol 1999; 16:257-68. 15. Elkin EB, Hudis C, Begg CB, Schrag D. The effect of changes in tumor size on breast carcinoma survival in the U.S.: 1975-1999. Cancer 2005; 104:1149-57. 16. The breast screening frequency trial group. The frequency of breast cancer screening: results from the UKCCCR randomised trial. Eur J Cancer 2002; 38:1458-64. 17. Klemi PJ, Parvinen I, Pylkkanen L i sur. Breast 2003; 12:308-13. 18. Bezi J, Sutlovi D, Tomi S, Kuzmi-Prusac I, Alujevi A, Vrbi i B.. The proportion of non-invasive (Tis) and minimal invasive cancers (T1a,b) among breast cancers in Split region. Lije  Vjesn 2004; 126:60-65. 19. Tabar L, Duffy SW, Vitak B, Chen HH, Prevost TC. The natural history of breast carcinoma. What have we learned from screening? Cancer 1999; 86:449-62. 20. Kerlikowske K, Grady D, Rubin SM, Sandrock C, Ernster VL. Efficacy of screening mammography. A meta-analysis. JAMA 1995; 273:149-54. 21. Harris KM, Vogel VG. Breast cancer screening. Cancer Metastasis Rev 1997; 16:231-62. 22. Tan P, Cady B, Wanner M i sur. The cell cycle inhibitor p27 is an independent prognostic marker in small (T1a,b) invasive breast carcinomas. Cancer Res 1997; 57:1259-63. 23. Stierer M, Rosen HR, Weber R, Marczell A, Kornek GV, Czerwenka E. Long term analysis of factors influencing the outcome in carcinoma of the breast smaller than one centimeter. Surg Gynecol Obstet 1992; 175:151-60. 24. Leitner SP, Swern AS, Weinberger D, Duncan LJ, Hutter RVP. Predictors of recurrence for patients with small (one centimeter or less) localized breast cancer (T1a,bN0M0). Cancer 1995; 76:2266-74. 25. Lee AK, Loda M, Mackarem G i sur. Lymph node negative invasive breast carcinoma 1 centimeter or less in size (T1a,bN0M0). Clinicopathologic features and outcome. Cancer 1997; 79:761-71. 26. Hanrahan EO, Valero V, Gonzales-Angulo AM, Hortobagyi GN. Prognosis and management of patients with node-negative invasive breast carcinoma that is 1 cm or smaller in size (stage 1; T1a,bN0M0): a review of the literature. J Clin Oncol 2006; 24:2113-22. 27. Arnesson LG, Smeds S, Fagerberg G. Recurrence-free survival in patients with small breast cancers. Eur J Surg 1994; 160:271-6. 28. Carter CL, Allen C, Henson DE. Relation of tumor size, lymph node status, and survival in 24 740 breast cancer cases. Cancer 1989; 63:181-7. 29. Moon TE, Jones SE, Bonadonna G i sur. Development and use of a natural history data base of breast cancer studies. Am J Clin Oncol 1987; 10:396-03. 30. Fentiman IS, Hyland MA, Chaudary MA, Gregory WM. Prognosis of patients with breast cancers up to 1 cm in diametar. Eur J Cancer 1996; 32:417-20. 31. Fisher ER, Costantino JP, Leon ME i sur. Pathobiology of small invasive breast cancers without metastases (T1a/b, N0, M0): National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project (NSABP) protocol B-21. Cancer 2007; 110:1929-36. 32. Evans AJ, Rakha EA, Pinder SE, Green AR, Paish C, Ellis IO. Basal phenotype: a powerful prognostic factor in small screen-detected invasive breast cancer with long-term follow up. J Med Screen 2007;14:210-14. 33. Cowan WK, Kelly P, Sawan A i sur. The pathological and biological nature of screen-detected breast carcinomas: a morphological and immunohistochemical study. J Pathol 1997; 182:29-35. 34. Henson DE, Ries L, Freedman LS, Carriaga M. Relationship among outcome, stage of disease, and histologic grade for 22 616 cases of breast cancer: the basis for a prognostic index. Cancer 1991; 68:2142-9. 35. Tabar L, Fagerberg G, Duffy SW, Day NE, Gad A, Grontoft O. Update of the Swedish two-county program of mammographic screening for breast cancer. Radiol Clin North Am 1992; 30:187-210. 36. Tot T. The limited prognostic value of measuring and grading small invasive breast carcinomas: the whole sick lobe versus the details within it. Med Sci Monit 2006; 12:170-5. 37. Volpi A, Bacci F, Paradiso A i sur. Prognostic relevance of histological grade and its components in node-negative breast cancer patients. Mod Pathol 2004; 17:1038-44. 38. Frkovi-Grazio S, Bra ko M. Long term prognostic value of Nottingham histological grade and its components in early (pT1N0M0) breast carcinoma. J Clin Pathol 2002; 55:88-92. 39. Dublin EA, Millis RR, Smith P, Bobrow LG. Minimal breast cancer: evaluation of histology and biological marker expression. Br J Cancer 1999; 80:1608-16. 40. Sinn HP, Oelmann A, Anton HW, Diel IJ. Metastatic potential of small and minimally invasive breast carcinomas. Virchows Arch 1994; 425:237-41. 41. Silverstein MJ, Gierson E, Waisman JR, Colburn WJ, Gamagami P. Predicitng axillary node positivity in patients with invasive carcinoma of the breast by using a combination of T category and palpability. J Am Coll Surg 1995; 180:700-4. 42. Morrow M. Axillary dissection: an obsolete operation? Breast J 1998; 4:330-5. 43. Recht A, Houlihan MJ. Axillary lymph nodes and breast cancer-a review. Cancer 1995; 76:1491-512. 44. Saiz E, Toonkel R, Poppiti RJ Jr, Robinson MJ. Infiltrating breast carcinoma smaller than 0.5 centimeters: is lymph node dissection necessary? Cancer 1998; 85:2206-11. 45. American Joint Committee on Cancer: AJCC staging manual. 6 izd. Philadelphia: Lippincott-Raven, 1997; str.172-3. 46. Seidman J, Schnaper L, Aisner S. Relationship of the size of the invasive component of the primary breast carcinoma to axillary lymph node metastasis. Cancer 1995; 75:65-71. 47. Moore MP, Kinne DW. Axillary lymphadenectomy: a diagnostic and therapeutic procedure. J Surg Oncol 1997; 66:2-6. 48. Hainsworth PJ, Tjandra JJ, Stillwell RG i sur. Detection and significance of occult metastases in node-negative breast cancer. Br J Surg1993; 80:459-63. 49. Silverstein MJ, Skinner KA, Lomis TJ. Predicting axillary nodal positivity in 2282 patients with breast carcinoma. World J Surg 2001; 25:767-72. 50. Arisio R, Sapino A, Cassoni P i sur. What modifies the relation between tumour size and lymph node metastases in T1 breast carcinomas. J Clin Pathol 2000; 53:846-50. 51. Maibenco DC, Weiss LK, Pawlish KS, Severson RK. Axillary lymph node metastases associated with small invasive breast carcinomas. Cancer 1999; 85:1530-6. 52. Yiangou C, Shousha S, Sinnett HD. Primary tumour characteristics and axillary lymph node status in breast cancer. Br J Cancer 1999; 80:1974-8. 53. Bader AA, Tio J, Petru E i sur. T1 breast cancer: identification of patients at low risk of axillary lymph node metastases. Breast Cancer Res Treat 2002; 76:11-7. 54. Barth A, Craig PH, Silverstein MJ. Predictors of axillary lymph node metastases in patients with T1 breast carcinoma. Cancer 1997; 79:1918-22. 55. Halverson KJ, Taylor ME, Perez CA i sur. Management of the axilla in patients with breast cancers one centimeter or smaller. Am J Clin Oncol 1994; 17:461-6. 56. Reger V, Beito G, Jolly PC. Factors affecting the incidence of lymph node metastases in small cancers of the breast. Am J Surg 1989; 11:1536-44. 57. Brenin DR, Manasseh DM, El-Tamer M i sur. Factors correlating with lymph node metastases in patients with T1 breast cancer. Ann Surg Oncol 2001; 8:432-7. 58. Kollias J, Murphy CA, Elston CW, Ellis IO, Robertson JFR, Blamey RW. The prognosis of small primary breast cancers. Eur J Cancer 1999; 35:908-12. 59. Rivadeneira DE, Simmons RM, Christos PJ, Hanna K, Daly JM, Osborne MP. Predicitive factors associated with axillary lymph node metastases in T1a and T1b breast carcinomas: analysis in more than 900 patients. J Am Coll Surg 2000; 191:1-8. 60. Mincey BA, Bammer T, Atkinson EJ, Perez EA. Role of axillary node dissection in patients with T1a and T1b breast cancer: Mayo Clinic experience. Arch Surg 2001; 136:779-82. 61. Arnesson LG, Hatschek T, Smeds S, Grntoft O. Histopathology grading in small breast cancers (10mm results from an area with mammography screening. Breast Cancer Res Treat 1997; 44:39-46. 62. Mann GB, Port ER, Rizza C, Tan LK, Borgen PI, Van Zee KJ. Six-year follow-up of patients with microinvasive, T1a, and T1b breast carcinoma. Ann Surg Oncol 1999; 6:591-8. 63. Port ER, Tan LK, Borgen PI, Van Zee KJ. Incidence of axillary lymph node metastases in T1a and T1b breast carcinoma. Ann Surg Oncol 1998; 5:23-7. 64. McDivitt RW, Boyce W, Gersell D. Tubular carcinoma of the breast: clinical and pathological observations concerning 135 cases. Am J Surg Path 1982; 6:401-11. 65. Papadatos G, Rangan AM, Psarianos T, Ung O, Taylor R, Boyages J. Probability of axillary node involvement in patients with tubular carcinoma of the breast. Br J Surg 2001; 88:860-4. 66. Abner AL, Collins L, Peiro G i sur. Correlation of tumor size and axillary lymph node involvement with prognosis in patients with T1 breast carcinoma. Cancer 1998; 83:2502-8. 67. Mustafa IA, Cole B, Wanebo HJ, Bland KI, Chang HR. The impact of histopathology on nodal metastases in minimal breast cancer. Arch Surg 1997; 132:384-91. 68. Chadha M, Chabon AB, Friedmann P, Vikram B. Preictors of axillary lymph node metastases in patients with T1 breast cancer: a multivariate analysis. Cancer 1994; 73:350-3. 69. Zanon C, Durando A, Geuna M i sur. Flow cytometry in breast cancer: prognostic and surgical indications of the sparing of axillary lymph node dissection. Am J Clin Oncol 1998; 21:392-7. 70. Giuliano AE, Barth AM, Spivack B, Beitsch P, Evans SW. Incidence and predictors of axillary metastasis in T1 carcinoma of the breast. J Am Coll Surg 1996; 183:185-9. 71. Ruffin WK, Stacey-Clear A, Younger J, Hoover HC. Rational for routin axillary dissection in carcinoma of the breast. J Am Coll Surg 1995; 180:245-51. 72. Aitken D, Minton J. Complications associated with mastectomy. Surg Clin North Am 1983; 61:1331-152. 73. Stewart FW, Treves N. Lymphangiosarcoma in postmastectomy lymphoedema. Cancer 1948; 1:64-81. 74. Cady B. Use of primary breast carcinoma characteristics to predict lymph node metastases. Cancer 1997; 79:1856-61. 75. Querzoli P, Albonico G, Ferretti S i sur. Modulation of biomarkers in minimal breast carcinoma. A model for human breast carcinoma progression. Cancer 1998; 83:89-97. 76. Jackson JSH, Olivotto IA, Wai E, Grau C, Mates D, Ragaz J. A decision analysis of the effect of avoiding axillary lymph node dissection in low risk woman with invasive breast cancer. Cancer 2000; 88:1852-62. 77. Silverstein MJ, Gierson ED, Waisman JR, Senofsky GM, Colburn WJ, Gamagami P. Axillary lymph node dissection for T1a breast carcinoma: Is it indicated? Cancer 1994; 73:664-7. 78. Della Rovere GQ, Bonomi R, Ashley S, Benson JR. Axillary staging in women with small invasive breast tumours. Eur J Surg Oncol 2006; 32:733-7. 79. Lin PP, Allison DC, Wainstock J i sur. Impact of axillary node dissection on the therapy of breast cancer patients. J Clin Oncol 1993; 11:1536-44. 80. Dees EC, Shulman LN, Souba WW, Smith BL. Does information from axillary dissection change treatment in clinically node-negative patients with breast cancer? An algorithm for assessment of impact of axillary dissection. Ann Surg 1997; 226:279-87. 81. Colleoni M, Rotmensz N, Peruzzotti G i sur. Minimal and small size invasive breast cancer with no axillary lymph node involvement: the need for tailored adjuvant therapies. Ann Oncol 2004; 15:1633-9. 82. Goldhirsch A, Wood WC, Gelber RD, Coates AS, Thrlimann B, Senn HJ & Pannel Members. Progress and promise: highlights of the international expert consensus on the primary therapy of early breast cancer 2007. Ann Oncol 2007; 18:1133-44. 83. Velanovich V, Szymanski W. Lymph node metastasis in breast cancer: common prognostic markers lack predictive value. Ann Surg Oncol 1998; 5:613-9. 84. Barranger E, Grahek D, Antoine M, Talbot JN, Uzan S. Sentinel lymph node biopsy in breast cancer: technical aspects and results. Ann Chir 2003; 128:144-9. 85. Sener SF, Winchester DJ, Martz CH i sur. Lymphoedema after sentinel lymphadenectomy for breast carcinoma. Cancer 2001; 92:748-52. 86. Cserni G, Amendoeira I, Apostolikas N i sur. European Working Group for Breast Screening Pathology. Pathological work-up of sentinel lymph nodes in breast cancer. Review of current data to be considered for the formulation of guidelines. Eur J Cancer 2003; 39:1654-67. 87. Cserni G, Bianchi S, Vezzosi V i sur. Sentinel lymph node biopsy in staging small (up to 15 mm) breast carcinomas. Results from a European multi-institutional study. Pathol Oncol Res 2007; 13:5-14. 88. Guarnieri A, Neri A, Correale PP i sur. Prediction of lymph node status by analysis of prognostic factors and possible indications for elective axillary dissection in T1 breast cancers. Eur J Surg 2001; 167:255-9. 89. Fehm T, Maul H, Gebauer S i sur. Prediction of axillary lymph node status of breast cancer patients by tumorbiological factors of the primary tumor. Strahlenther Onkol 2005; 181:580-6. 90. Dressler LG, Bartow SA. DNA flow cytometry in solid tumors: practical aspects and clinical applications. Sem Diag Pathol 1989; 6:55-82. 91. Baak JPA, Janssen E, Hall PA. DNA ploidy analysis in histopathology. Histopathology 2004; 44:603-20. 92. Shankey TV, Rabinovitch PS, Bagwell B i sur. Guidelines for implementation of clinical DNA cytometry. Cytometry 1993, 14: 472-7. 93. Ormerod MG, Tribukait B, Giarretti W. Consensus report of the task force on standardisation of DNA flow cytometry in clinical pathology. DNA Flow Cytometry Task Force of the European Society for Analytical Cellular Pathology. Anal Cell Pathol 1998; 17:103-10. 94. Ganem NJ, Storchova Z, Pellman D. Tetraploidy, aneuploidy and cancer. Current Opinion in Genetics & Development 2007; 17:157-62. 95. Shi Q, King RW. Chromosome nondisjunction yields tetraploid rather than aneuploid cells in human cell lines. Nature 2005; 437:1038-42. 96. Rieder CL, Maiato H. Stuck in division or passing trough: what happens when cells cannot satisfy the spindle assembly checkpoint. Dev Cell 2004; 7:637-51. 97. Brito DA, Rieder CL. Mitotic checkpoint slippage in humans occurs via cyclin B destruction in the presence of an active checkpoint. Curr Biol 2006; 16:1194-200. 98. Eggert US, Mitchison TJ, Filed CM. Animal cytokinesis: from parts list to mechanisms. Annu Rev Biochem 2006; 75:543-66. 99. Duelli DM, Hearn S, Myers MP, Lazebnik Y. A primate virus generates transformed human cells by fusion. J Cell Biol 2005; 171:493-503. 100. Sen S. Aneuploidy and cancer. Curr Opin Oncol 2000; 12:82-8. 101. Pellman D. Aneuploidy and cancer. Nature 2007; 446:38-9. 102. Weaver BA, Silk AD, Montagna C, Verider-Pinard P, Cleveland DW. Aneuploidy acts both oncogenically and as a tumor suppressor. Cancer Cell 2007; 11:25-36. 103. Hernando E, Nahl Z, Juan G i sur. Rb inactivation promotes genomic instability by uncoupling cell cycle progression from mitotic control. Nature 2004; 430:797-802. 104. Hedley DW, Clark GM, Cornelisse CJ, Killander D, Kute D, Merkel D. Consensus review of the clinical utility of DNA cytometry in carcinoma of the breast. Cytometry 1993; 14:482-5. 105. Forrest AP, Everington D, McDonald CC, Steele RJ, Chetty U, Stewart HJ. The Edinburgh randomized trial of axillary sampling or clearance after mastectomy. Br J Surg 1995; 82:1504-08. 106. Steele RJ, Forrest AP, Gibson T. The efficacy of lower axillary sampling in obtaining lymph node status in breast cancer: a controlled randomized trial. Br J Surg 1985; 72:368-9. 107. Elston CV, Ellis IO. Pathological prognostic factors in breast cancer. The value of histological grade in breast cancer: experience from a large study with long-term follow-up. Histopathology 1991;19:403-10. 108. Bloom HJG, Richardson WW. Histological grading nad prognosis in breast cancer. Br J Cancer 1957; 11:359-77. 109. de Mascarel I, Soubeyran G, MacGrogan G i sur. Immunohistochemical analysis of estrogen receptors in 938 breast carcinomas. Concordance with biochemical assay and prognostic significance. Appl Immunohistochem 1995; 3:222-31. 110. Kallionemi OP, Blanco G, Alavaikko M i sur. Improving the prognostic value of DNA flow cytometry in breast cancer by combining DNA index and S-Phase fraction: A proposed clasification of DNA histograms in breast cancer. Cancer 1988; 62:2183-90. 111. Moureau-Zabotto L, Bouchet C, Cesari D i sur. Combined flow cytometry determination of S-phase fraction and DNA ploidy is an independent prognostic factor in node-negative invasive breast carcinoma: analysis of a series of 271 patinets with stage I and II breast cancer. Breast Cancer Res Treat 2005; 91:61-71. 112. Sakorafas GH, Tsiotou AG, Balsiger BM. Axillary lymph node dissection in breast cancer Current status and controversies, alternative strategies and future perspectives. Acta Oncol 2000; 39:455-66. 113. Greco M, Agresti R, Cascinelli N i sur. Breast cancer patients treated without axillary surgery Clinical implications and biologic analysis. Ann Surg 2000; 232:1-7. 114. Mustafa IA, Bland KI. Indications for axillary dissection in T1 breast cancer. Ann Surg Oncol 1998; 5:4-8. 115. Velanovich V. Axillary lymph node dissection for breast cancer: a decision analysis of T1 lesions. Ann Surg Oncol 1998; 5:131-139. 116. Hanby AM, Hughes TA. In situ and invasive lobular neoplasia of the breast. Histopathology 2008; 52:58-66. 117. DiCostanzo D, Rosen PP, Gareen I, Franklin S, Lesser M. Prognosis in infiltrating lobular carcinoma. An analysis of classical and variant tumors. Am J Surg Pathol. 1990;14:12-23. 117. Fitzgibbons PL, Page DL, Weaver D i sur. Prognostic factors in breast cancer College of American pathologists consensus statement 1999. Arch Pathol Lab Med 2000;124:966-78. 118. Mori I, Yang Q, Kakudo K. Predicitve and prognostic markers for invasive breast cancer. Pathology International 2002; 52:186-94. 119. Masood S. Prognostic factors in breast cancer. Breast J 1997; 3:267-83. 120. Frierson HF. Ploidy analysis and S-phase fraction determination by flow cytometry of invasive adenocarcinomas of the breast. Am J Surg Pathol 1991; 15:358-67. 121. Wenger CR, Clark GM. S-phase fraction and breast cancer-a decade of experience. Breast Cancer Res Treat 1998; 51:255-65. 122. Michels JJ, Duigou F, Marnay J. Flow cytometry in primary breast carcinomas. Prognostic impact of proliferative activitiy. Breast Cancer Res Treat 2000; 62:117-26. 123. Clark GM, Mathieu MC, Owens MA i sur. Prognostic significance of S phase fraction in good risk, node negative breast cancer patients. J Clin Oncol 1992; 10:428-32. 124. O'Reilly SM, Camplejohn RS, Barnes DM, Millis RR, Rubens RD, Richards MA. Node negative breast cancer: prognostic subgroups defined by tumor size and flow cytometry. J Clin Oncol 1990; 8:2040-6. 125. Stl O, Dufmats M, Hatschek T i sur. S-phase fraction is a prognostic factor in stage I breast carcinoma. J Clin Oncol 1993; 11:1717-22. 126. Ottesen GL, Christensen IJ, Larsen JK, Kerndrup GB, Hansen B, Andersen JA. DNA aneuploidy in early breast cancer. Br J Cancer 1995; 72:832-9. 127. Ewers SB, Lngstrm E, Baldetorp B, Killander D. Flow-cytometric DNA analysis in primary breast carcinomas and clinicopathological correlations. Cytometry 1984; 5:408-19. 128. Ottesen GL. Carcinoma in situ of the female breast. A clinico-pathological, immunohistological, and DNA ploidy study. APMIS Suppl 2003; 108:1-67. 129. Locker AP, Horrocks C, Gilmour AS i sur. Flow cytometric and histological analysis of ductal carcinoma in situ of the breast. Br J Surg 1990 ; 77:564-7. 130. Rennstam K, Baldetorp B, Kytl S, Tanner M, Isola J. Chromosomal rearrangements and oncogene amplification precede aneuploidization in the genetic evolution of breast cancer. Cancer Res 2001; 61:1214-9. 131. Dutrillaux B, Gerbault-Seureau M, Remvikos Y, Zafrani B, Prieur M. Breast cancer genetic evolution: I. Data from cytogenetics and DNA content. Breast Cancer Res Treat 1991; 19:245-55. 132. Molist R, Remvikos Y, Dutrillaux B, Muleris M. Characterization of a new cytogenetic subtype of ductal breast carcinoma. Oncogene 2004; 23:5986-93. 133. Bergers E, van Diest P, Baak JPA. Cell cycle analysis of 932 flow cytometric DNA histograms of fresh frozen breast carcinoma material. Correlations between flow cytometric, clinical and pathologic variables. Cancer 1996; 77:2258-66. 134. U~arevi B, Petrove ki M, Maruai M i sur. Prognostic significance of cell cycle parameters in infiltrative ductal breast carcinoma. J Clin Lab Anal 1998; 12:131-6. 10. }IVOTOPIS Roen 1970. godine u Splitu gdje je zavraio osnovnu i srednju akolu. Diplomirao na Medicinskom fakultetu Sveu iliata u Zagrebu - Studij u Splitu 1996. godine s prosje nom ocjenom 4,6. Nakon obavljenog pripravni kog sta~a u KBC Split polo~io dr~avni ispit 1999. godine. Nakon kratkog rada u primarnoj zdravstvenoj zaatiti zapo inje specijalizaciju iz patoloake anatomije na Klini kom zavodu za patologiju, sudsku medicinu i citologiju KBC Split i Zavodu za patologiju KBC Zagreb, koju zavraava polaganjem specijalisti kog ispita 2003. godine. Radi kao specijalist patoloake anatomije na Klini kom zavodu za patologiju, sudsku medicinu i citologiju KBC Split, pri emu mu je u~e podru je stru nog i znanstvenog inetresa patologija dojke te patologija ko~e i mekih tkiva. Autor je i koautor 17 znanstvenih i stru nih lanaka od kojih je 13 objavljeno u indeksiranim asopisima, 4 poglavlja u knjizi i 18 kongresnih sa~etaka. lan je Hrvatskog druatva za patologiju i sudsku medicinu Hrvatskog lije ni kog zbora. Na Zavodu za patologiju KBC Split sa suradnicima osniva Laboratorij za proto nu citometriju solidnih tumora. lan je stru nog tima za bolesti dojke pri Centru za onkologiju KBC Split. Takoer je kao asistent lan Katedre za patologiju Medicinskog fakulteta Sveu iliata u Splitu pri kojoj aktivno sudjeluje u izvoenju dodiplomske i poslijediplomske nastave. O~enjen, otac jednog djeteta. Govori engleski i talijanski jezik. R^df~24^`bd 0 j l HJXf%DvXffhJL0&2&&v'??QQPhhxyƧ 6] j j@BDFHJLNPRTVXZ\^`bd p^p`$dha$   0 2 V X @ ` b X ` `^``$dha$$dha$@ ^@  46HJFH <>ln$a$^n02dfhjlnprtvxz|~DDEde"#TVBD  JL&(fh468:<JL0%&&v')+5:dhdh`dh$dha$:`AQQQRX_fNhPhRhThh2mtuxxxxyVnddhdh`ħƧth$a$dhdhdh$dha$ $dh`a$dhdh`޴Ľ<hZDFtvxz~np~{kjM CJUVaJmH sH CJ,jz5B*CJOJQJU\^JaJphfjMM CJUVaJmH sH #5B*CJOJQJ\^JaJphf,j5B*CJOJQJU\^JaJphf 5CJ\j5CJU\CJOJQJ^JaJ H*mHsH5\mHsH6]mHsH$Z\BD|~np (6 $dha$dh` $dh`a$dh$a$(v4446<V<X<l<AAAAABBBE&HnHbJdKN,N6SVSUVtZ ]^]$bTbphrhhvjUmHsH6]mHsH CJmHsHjRUmHsHjlM CJUVaJmH sH jUmHsH6] jmHsHCJ#5B*CJOJQJ\^JaJphf,j5B*CJOJQJU\^JaJphf,j05B*CJOJQJU\^JaJphf.6  46~tv!|&r,--ҙ V  .XZXdh $dh`a$dh`dhҙ2402 Vڲܲ ־ؾvx ZhlJL\^ln "VX~rnvx*TVp j*mHsH jcmHsH j* j jCJCJ jH*mHsH H*mHsH j jc5\5\mHsH jmHsHmHsHEL|N  $^`a$$a$ $&dPa$$$d&dNPa$dh .@AZm(Bjl<dh`dh $&dPa$$a$ $^`a$<>0,<$& L~"dh` &dP&d(dPR (dR$d&dNPdh"JLZd$dha$ $&dPa$$a$$dh&dPa$$d&dNP dh[$\$dh &dPprn*xz|PRl $^`a$$a$ $&dPa$$$d&dNPa$$dha$ $dh`a$pr"'Li68:<>J$&(*,.(fh.02       # $           jH* j*H* j*mHsH H*mHsH jcmHsHCJH*mHsH jcCJmHsH CJmHsH j*CJmHsH5\mHsHmHsH jmHsH?JMg*Lij~6JL $dh`a$$dha$ $&dPa$$^a$$a$ $^`a$(j(*Z\` dh` $dh`a$$dha$$a$ $&dPa$      " F G V          < = Q u v  [$\$$a$ &dP$$d&dNPa$      2l XZtB $dh`a$$a$ &dP$$d&dNPa$[$\$&dP[$\$   2NP`blLVBlnFH%5QRSTU[\t "$X"v"x""""##ﰨƢƢƢƢ H*mHsHCJH*mHsH jcCJmHsH5\ j*mHsH jcmHsH j*CJmHsH5\mHsH jH* j*H*mHsH CJmHsH jCJmHsH@J^%De5Q[tu &dP$a$ $&dPa$$dha$u  X"""##"###$,$X$Z$2&4&'F/`$a$&dP[$\$[$\$ &dP$$d&dNPa$$dha$ $dh`a$##$$ $,$.$X$2&4&'3$5B5D5R5T5\566 7 7773747889x=z===>T@V@X@@@@,B.B0B^BBBBBDEE&G(GGGSHXH#IAIIIII j*CJ jmHsH j*mHsH jcmHsHH* jc jc5\ jH* j*H*5\ jCJmHsH CJmHsH j*CJmHsH5\mHsHmHsH=F/H133$5\5n55556656[6\6t6666666 7&dP[$\$[$\$ &dP$$d&dNPa$` 7737475789N=>^BDEEEEEEEEEF*G $&dPa$$$d&dNPa$dh $dh`a$dh``$a$[$\$*G>GzGGGGH$H4H~HHHHI#IAIUI~IIIIII$dha$ &dP $&dPa$$^a$ $^`a$$a$IIIIIIJdKKKLLLLMMMMM MNQ`S|S~SSSSTTmTqTUUZU[U\UmUnUUUUU0V2VXXXXX:YYXYǿѵё 5H*\ jc5\ jCJmHsH5\mHsH jmHsH jH* j*H*5CJ\mHsHCJH*mHsH jcCJmHsH CJmHsH j*CJmHsH j*mHsHmHsH5\CJH* jcCJCJ4IJdKKKLL7LOLnLLLLLLM MQQ`SS &dP$$d&dNPa$dhdh`$a$ $&dPa$$dha$SSTTT4T5TDTrTsTTTTTTTU#U$U-U[UmUUUWpY`&dP[$\$[$\$$a$XYZY[T]]]]]] ^!^+^,^O^P^^C_H_c_________`aaabbbbbbbbbb ejjjkkkkkkllTm^m`mbmmmmmpp8ǿѵѵѵ j j*H* jCJmHsHCJH*mHsH jcCJmHsH CJmHsH j*CJmHsH jH*5\mHsH j*mHsHmHsH5\DpY[[T]]]] ^!^-^P^q^^^^^^^__)_I_c____ &dP$a$ $&dPa$`___abbIbJbQbbbbbbb ejjkklxl`$a$&dP[$\$[$\$ &dP$$d&dNPa$xlzllllm`mmmmppp~8hνR` $dh`a$$dha$dh`$a$&dP[$\$[$\$zJPڝܝLNJLB&Z&\&^&**p>>nINBSVSSS7T8TO^]^_=a@aabcdddXeeWfflgXj^j`jllnooqcrs=vvx-||}}~~^BF؅܅܇݇JH 0J hmH sH h hmHsHmH sH 5\mH sH 5\6] jmH sH  jbmHsHmHsHM`p`p@&B&D&\&^&**00 6 6\7^7&:z;|;j>l>n>>>Bdhdh`BnInMNP@SVSXS8TBVYe[[\N^]^^^^__d`=aazbc $dh1$a$$dha$dh $dh`a$dh`ccdTeeWfflghhXjkPllWm1nnop:qqcrrstmudh1$dh$dha$dh1$ $dh1$a$mu=vvwx zz:{)|{||}~~(Z4ۂnB؅ʆ $dh1$a$dh$dha$dhʆ{=#݊.݌FH ːQ{uA1ǖf $dh1$a$$dha$dh $ːϐÒӒA14fߘ=OeSUV[{3FPҭco@Kߴ_vt5\ 0JmHsH 0JmHsH0J 0JmHsH6]mHsHh hmHsHmHsHAʙaVۜh7>]{3y`Z $dh1$a$$dha$ dh[$\$dhbv0k\گ,ų\˵!rdh$dha$dh $dh1$a$dh ,1h. A!"#$% zDd%aaB  C AjbbE>= |(2Es8DqnE>= |(2Es8PNG  IHDR%-sRGBTPLTE 999""")))333BBB___MMMUUUfffwwwy5hIIDATx {*@ޓs&*" ?/I4MڴMSz_N5f#x ?,?u<:^\x4ܺR.pCB\C:HDpGT,ˊ,!6݋`_7 %Aѹ*E^VYQ k X0fEQ{! `\ /H0!˳"+Q ϟeAeYy&! RY!8S$U"Y lɂpAlyvա(bd1+DUE[RD纬EY3 DP{]+A" p9l_0NW ƆtO1! AEtx臀}b702e |}GCrt> ߌŦqQ.gT27]t|_uޛSA`RДZ%zP U46OuV8 BW}0TO_Q8^5)r+Um\&Z%wUsɌ6$$D%)^dUx=6۴EյiJtΥC4>;(!7)\VmNVe}ڢ4MwC!2ϋx)z֏3 w"%Ѹ^4g:$!a `.EE)T&=2e7\bī!-A.FKѻ" /'JYKiw}7XM6h tYCRViz AϠLw҆5Tϣo);Յ$< RT& >(1SCqJVfrohm:Ma˦WSʓ~E%e HA|STEӨsN˫Aj'd&0@0aO雒oJf1. E٥%:ۆ*\~~,'|Jܛ]&l"]TE9xdΊK{JB겮|\eVI:4igʚ"hjRᯱ'>AhoS+3}|-d+#p5܍}7Bأ Zo}Tώ[Z G)noG }IIJ*J%c D;t1Ev8 U)D]L&.&b~gZ T1б&KٔN9\h#۬6e "-B.ŽbթTQ.8Q) QPDe9_Zjkt*uNm&&}L d6tZ:Ą\ie BN7 j~~@k`k"xkUe] ٴT|)⊮+G.Z4g|-X}UO7+X~it~(D$Fd7_hğhQ|gR x]F\R QU5uY@N8/ȹgy:/ėgYHX"`rh=P8fA|J!@CD^^. 7 -] ›(A8c'0 `BOu>t QE5ѯc "1O8UGN_R 8NOu7.YcktO싫r@œx)`wS@Vr~6SA@8@AU:iIg 8\\9nn~oިVw! ؇`yn^ۡHWY@jI !pޗӽ}}rؔ˻Y}P/pA?Im/r#]S ]18CH8BI@e]Szcf!Ce*B8o" ٮNNN|K̫Ѥ!:0\B cvX+Q]5v }rWۘL*lZ"`j)/|[.YW !p܌/tiu` 14U>~VFM 6-vid ̭ x[pbȴ#,dqu]ʅ1 x-5Ev3k~Llo- fM3!j4YY6 6J7)K?Y)7(`FViyrDPAJkŸfdP٢V61:;Ժ7$x?E/[pKABen<e'bm;zBp&fsYt?H@"VT+ h(D#"š2jNӋ+ٚq3C=X8][AzBC*,-F[OΎlM 8ì J&/w2#Vq}eB}Vɒ/E2^`9/n$ha0.[T?F A S\dy 3jFIpڢ1ΊR 짻يopU&s}(&6IDkIkhqʾd8ա n7FMLPy9襬>-f:V>JstTgf]"`Tyzhhm5sh!iM䁍mszcd+*E#jYʦ.j;)2ԍebψwd)d]gTvrpR~0lK]YV)LOY3PDnF*;*<wW@CxMv>d!6 HC{tz0?;]5vD51ٽ]~Ϩ0Fa_iSIM.6;?;͹gƼlL%0>3uAӻA˜aLl!Q'#pgg;#aHq{}y0vo!>'A͓!0>C^'v;_bR2%{@{~sQ|ޙwr_#ĮGc_0OD]]>M 3苀P71 sg !mzߛMήD?|wש!s}QK/Dأ>i=FNj۴}|9IN#6[5=#.`71WcsȇKSwiT&/B&=k b pzYmA@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@O<1(xaE;s + *Ӛm*mxa5{-O2) @XO@VC@XQ@g=2%`4Vd5)$6*`& H + hi0(`O+Va @XI45VЏ*vZ3 LX xqd! $ i0* Y aM/úreg71p4a%&USI3N瀬bYԿ{u]7> U~#j_{v/ktsl-~)7b#~?Bv)M \}Cȫ'!/}E@!?'n;pVA@,RgWo?#w~8D9(u%w~* =G}ӓ ,q`K ȳ _ K h@ `s) ;>ꩾO7,$mC@XO@ ,RRq B`1-Š.+ H b* i0,"`p7 7x" 4VPk`*tw$  HTx4^.$ x C + H /н'  Hм' Yj;5?W@`XU@`UId-^+d!4cHO*T@B HK V# 5}$ i0R@ >`x$8xJ+t٧% $ W kXQ@숀YW 4VTx!?; t!Cq>nZKw2>I#ti;v>;ڇiqO>痢oݥOw Gdzw'g_PxL z7.Sh 'G׹)]y^=; yЙݒp7s5 ةg!ϼ}un~+Yȳq5RJ 8ngPTq&74ewĿj怮;Uǿ'zX{RەMq=^3(wz* >n]Y1;"Cz8x_4wS/Ph= ]{l~{3fj.?=#cލwW7-û@@!ߊ?=u o0$*?YHwnO+(4{Vf 3oLgzEd+o!cs:HJoZB /~|w\ R_Gͫ ؅>hwF@tA .X@6H\+=&' OUz9o]kw ;~7%VM ǟP3? ~=UӿWz"70dp< ɂ7"upnCQ{ςe9z=S#M\IENDB`pDd-  S A? vA typical flow cytometric histogram in Barrett's esophagus"2VM;A8F^2q`!*M;A8F^ K_w+@(x]o$uU=3{  !"#$%&'()*+,-./0123456789:;<=>?@ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ[\]^_`abcdefghijklmnopqrstuvwxyz{|}~      !"#$%&'()*+,-./0123456789:;<=>?@ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ[\]^_`abcdefghijklmnopqrstuvwxyz{|}~      !"#%&'()*+,-./018C:;<=>?@eEFGHIJKLMNOPQRSTVWXYZ[\^_`abcdoghijklmnrstuvwxyz{|}~Root Entry- FںBData $ިWordDocument,.FObjectPool/zںں_1293001549 Fzںzں1Table9CompObjhObjInfo i8@8 NormalCJ_HaJmH sH tH >@> Heading 1$@&5CJ\mHsH<A@< Default Paragraph Font#18#148  @V8'(5900ppnl,b$8GA\lګ. @4(  6   AH  #  N  3    B CDE|F6KZ!FW<:/-%#v3 &(D2b<qAKK) N Z yiz{i6WZKZ@          `B S  ?8\t8h@ tt-t &(49 &(49@$&8UnknownGz Times New Roman5Symbol3& z Arial"hJѦJѦ!Ir0S2JBezicJBezic   FMicrosoft Word Picture MSWordDocWord.Picture.89q  FMicrosoft Word Picture MSWordDocWord.Picture.89q  FMicrosoft Word Picture MSWordDocWord.Picture.89qObjectPool zںzںWordDocumentD!SummaryInformation( UDocumentSummaryInformation8]7 pbjbjUU !7|7|2lZZZ  $$$$$$: Z B)Z7|)$$>(R$Z$8"Z$ P"h;rr(T0  n Koli ina DNA u svakoj stanici Broj stanica pjCJUmHnHsH u NPjlnp n,1hN N!"#I$J% n8GA\lګPNG  IHDR,m("sRGBPLTEaaaOOzzy,,4,,W??BffUUUkk4񣣣LL'3饥ZZLLM;;~DDϨړzzooo[[[B; pHYsB)}IDATx^]r[ ܙ0=2Ã8dKm&Y$8v,tӠn [[ư5XX3uc fdݘ5Y7fm`@`F֍YX3ucVRJ ~NRBU*W΂etN ,ƕ֭" ,XArZuӖH7,X"bF: pY`Y% V%)el,`;YIZژ5CڛoOYJZz`k+_ X5]otB6;k:䫱S􆛝5Xuؘ5iZZ7.a 瀵hm̚fgm|4i?,oieΒ^6 >]( XgnAiպ,+,h3˖͂kϼ8-[ U+Z!-˂7CQtgq24j/ӻv6O aUK< ZYeF9 /-*pr~~gadzu!i% ?%X]rƅw' X f]XO9= X<Κ^''3+ xҀYmV,ӝ"f`ɯ,rۿ;_$:16j&2S}J Ő+ŵwl^2I(ercy{吣m̚ ߭Osuژ5Y0,q:g) XP^TY!ژ5UpcDUEQ0b w̺+o6\baDi LU|UTePm@"7l^@pUݭ,xpUKorsyjE@|k/fE)Vt ߺa M0w֡-,~vNlf, &Wcb:7&z (ɬS +9*1Lf{01D[L ,GZXg=7t5^3L1nZ 2`*ϊ!ȏӊl :m0j:Z\^/P F=0x*IgNbMbjVh-qǬYߗe飛 %DQa 1Snci,Ef-I|V+'?i"Ssl(J5X?T:Y~NJFN=4%ivZ7&L)uiR:vDo*5wzFG!@z܅XYgLfvqyx"-N Kw"v] ?* nijyR,fƬ OM"0 Z泚E{slfX"X28r糚Kd%zl| IQIK3<tibxYz;'Oi6I:+~@(xx+_)^X2Lb[Uf)F^ы)X?n{i 5wBPڶ vu*`)i"XAո'Ys 8 I,x[E27 CoQSf"rmNt )eh/cVì¦j nL)YN\Y+;9M n!Wv55uG7f\^x:k`"fe6M 1Pmb_Y:GS4oKS4f]A ujNg3 ,,u4g:1\Bxb|Y0^ohe.[*XNμYY4rd5rYR ?V"[; e Rp8 ,{+G_ۯEgNG=7 yDBYh*ZT\nXWBH$GISXKH3g^f/Ja|/+=&!)Y,~ѥtv x=EX Qru|ѿ*rg:ꘪ8jRv7([bڰ]}jP2+`y+?ԍ.g pZIΨU#^`$MoM|/~~k~j/K {RuMͣv[4PJ Iww%֝HH*|R;z1XpT@S[}d4uu}^u4^JunN=+>)!¡u>9ED_C_ʹ)'tsKwGeoxJ^cojt|PߎC%1`~%fG/XjBg#ûD_֮cIp3¹`Y Z S}v/&G2@4jӃzoҾm1_]QEs;t*\GmiS`\f+'&s;p%:%Z=x Q-h.Vmxߗjڟt]{7p CnUhQIƑP V+nF;W }a%Vla{jm)Kj8P'CTǴ38ŴXh [3#(JIf BِF{[ܗO(]*`5m'!ho,+^dca4bTvowe8AGXCG~$Zjï!~`84rБB{LJ##I#KL%sMX>b8%fqW76f 0#Ƭ c_2cy}]ߎ;~<|}L_ 'v%vu*!FyEK`ES\ŀ|-jKw%S{C]b%vUk=ƝMh7! M ςi"jvMs֝YO4eu)!tZ] + m.pDCY]T"TQ}|QTS4ap Xu*ԷBӝnp orS-}ܞphy[)b2(MFjVmENH1UmEw8W@xxn@> Heading 1$@&5CJ\mHsH:@: Heading 2$@&5\mHsH<A@< Default Paragraph Font369G369<G  @VG >?ABDH000@0l,b$[0vIL-O)!. ^@ (  6   A T  C  N  3     BCDEpF2q .y!FhZd<i-nxxxTpKeG6ap # @         `  BCDE|F6K%A0-)O'   ?q"->dFiV!lK@          `h  8BGCDEFJ.. PGDo(:((X("<(+?FyS\ld_3[GU[Ly77/r7[QIsG=8..3.=i "$@               `   BC!DELF&'A6Qr1!iK-'@      `   BCDE4F i7#.w}sn*-2i @    `N  3  N  3    hBxC(DEF x(Z<  @  `B S  ? GQ tp $ t$ t  f t [  t6) $ t tz t|8h t,t-t  >?@BCH  =?ABDH@8GFG`UnknownGz Times New Roman5Symbol3& z Arial"hKѦKѦ!I~0S2JBezicJBezicObjectPoolpںpںWordDocumentqW-SummaryInformation(DocumentSummaryInformation817 bjbjUU W-7|7| :l        K M M M M M M $ Bq  N q K   K K K : K K K K K K 6K  t8"]r :K K 0 K K K K      Broj stanica Koli ina DNA u svakoj stanici D A 4|5CJ\mHsHjCJUmHnHsH u24|~ ,1hN N!"#I$J% n!![0vIL-OPNG  IHDR,m("sRGBPLTE0gg륥⼼```ޱyyy**/VVDCDWWW++VԴuqKDlWWUHH98;|d_MMM괴::|/DDؔrsskkkn] pHYsB)IDATx^]r88S.:0dgTR]k uODRL$qFEsn\xyޱ9u `:v=3 YgN@]:u'zf8a3+87ec4J43?1Vgtä%p-s ZeVxf,]7~_r/CGRBJ 5!2 hA?i ßYY 7 -Y&u1%*9aUe^4"2A^Yܤ%N5a9 4vĬb1k .R1jWT*Q^.dg,_[~$|CmhZ7Hcr$flҼH ҽa!xi~}aB %2&f-B:K !j*Qֲ WLvVL:+a@LFiX5gNxEXKY'kk.S48ݾ̒n4_YÇ8bd4쉯,v 0XK:odE7.4*~%&Q){~Yss9$XD ,:t$sHZ2` ߘx5[XF?~Z&сSEZ2+?\+(`CF%U1K}xƦ[dôhtBzä"^T4>T9rVÔq`_[:4Vàސ3ig!/0,UQk6Ibт`:,HtfQ>%/.>؅Z"Yp(^<'X!I+{|]*;ýX,S>?_"`%:k90.~ˉe/Xu(Ծ/Y* q^Pg#fmro1 fV6V[F52މɇߣ*]`AV Z U{-#!S4t+XgS_,9"Cho5 *E07nƯeV ά=P,P1|+h`|7g4t '?0b`| \~ՙRn,Z%z]1+JϐEz?כwcE"`F>@ ̺2lU{C0+%XEKҋ0%b8`E$`A3l8Đ Ĉ 2ֿy7-2td[yÓI`V"M$ {jpgֻ"_;Ǹ~&$Q#p;S`JXAbplJ|f jZ5 2v뤹|`}` Kkkv%,Rg?19CftT4IN?!YcS~U:1K#j6p{ksٛ7`Ѳ!1+P F YX>w'2`N`Mdy*kL:ffyEJP\`iYoлV /tv" 7ˮ1G͓3O2k<Dhf K u,X̲`OFsb& >De ?1ldQafa;jY{Y4w@,,>Js~ӝPlt\E`Mˬ8P𲪐(7 OXf[bT``1-7 k̊1\v|%k[l>F4ʯ3;d5frY.dOYUyjeH )ׁa61lVU6"ڂur\_G \:ԉkq$j[@; .o~)BGj?1<­@R'=kVQAaV">ro!PgYa`YLj:0?M!kS\=p N ?¨kvKYp)e[i$r0瑄=0 suMdp ({T+;ڊydtRW7+4ˉ:0XVT=EhHvK5o%ǚ_U`oǿ7HMǬVU(Ze]F"yk|0P~SJG kIҠc:?4* 6Yx+aʢphˬQS1KfXI[B;Dȱ[ uD~j݈܉Pmҍ}w!Qxg Eoר~J>xŧ;|2v^V^tj_ټaى3 _ VaW6/|ңfL-4fЈځs >uBT5쀖2kVfYPZ:_=a>'[0krzY0LBqd~b(Q{@YYYt /I0k8JFb{,Aˬf(/V<etɿʂ/Sv{}zF:m:& klh-y*Z2O<pw =ڜ*jC$:-XS,^jB'UP5gXǬJ]}i:dS:N1l"?ւ'n5ݭ.}ɴWoYy@5[aa>wiJ~,X| /=wxQXKbG!8nս~CsIs[%2k(a[fms"\bE}`sRכFԢ/HΗmW_1@;!rOn81֗m۝nxs_Xme%󷽊C zÆi;n 3k9 SQv՛_o(   ^-.oM鬭&9 ;RPVY(5Q,1t.՘5Z7R8L,XMA$X" *.clhz5;Xfe 8KX̂o$aDӰX$Š"ұlSCr1'Yl,3;[պՙ,Mi~e4}İi>DbLa:s%_C`9;.du _c<<ˬE~-XcM']Xƪ̬,kEwؙ Iu$G_WO %XV}}-mYm?x(+?l=YVk~X-] šRhyvӗYuVy6 3i6 u%EV:+QM]u` CYy물t~4?1l=K8[g_ްnY#16,LWWXc  dA\/KE;7ɬ-X[PjK 1[3ì΀{7S2k$cV>_&kWl@ssyz{+ZGUtu#iJҞ2gHnz儂w)]M+ !#1İlie w;ukg :57O^k Waq s8uIe°P*x_˜'rlži^&[W|Ɔ#%7 baNYt<,?fusyJCXVe 7J Q^KǬǬm3Dlpfpd,ƬX?ΒyhXpO[11Kܥ f9~P14 ))pOk~AbhY{ɽ3r}3+Y`\5Rp"կ(Q鬿zi:Mn-Dnb88o#]c}ɷAүu7*~XmA} 'k#/ìi6bp88"2{ojWљ,rDohVS:g`Vro;]"_e0`tǬ^F*ZoyIj: `#vqN~Gj7z̈K C,KrCsږzQu xg/LRrp'Y.=]8ܽ]!LZ!JG5" 4G"C!8ϥa?:sTmm䂤'Zgb{5TRc1H?Rȫ3yްsvÚڙOrbr)6eP C =CMfQv(bh*&gEJn,GFFCRrE0Ă|(CfM's*KXx@ccp9**Te(^7쁵sWޅRtf[u~m> g~2fgyQ0+7<18, \:LAAiE,V謀P.XfyvJ؎u-_*elo5pqFNv0Y֥tPa}c|ƬX;^W ()%ՠP@7}+Qr_d\KGR̷BWh+7tΜ0}O-rmDd8Y 753y]#P}wzF:eF.J 1$4 $le&ta1 Yd-`vC{JSU'e&e:~,` |bLRʞΖYd%>jeb]ddQ%Z/|)u1NE|@ҹZmsP loؔM4mʦdHtb `TRbm+Td"Em&7u2}-ľ3|ѧa\D Cf:?IooC[uǎ {"+WJ dt!XBDb(UJ]r]\ohTe2n1 {`m QFbXDB8Pmeup3ZrfSPy?]G/maκv6UZNxp`erؾ_,Ò6)blk2XKFSS-)7 yѻN޴Vi SE ޤiAuY0T{Mm6|ӏ(VrB#lL]bX)UxZ3ߝ Ok5b ؊k2 W_ޗo]gE[,w+k4Ժj|oqA^, ݊ ݭSJ؀W"S捻pD(~>.7*U/܊`۪,FYȮ, H@>sdEQ׵ 6b?qZ-Vj+|l%{X[/@̺ÈV-&NX ~+Gw(5m71±h*?>}N涒[UkCNQ/1L&*V̥2Izǽ[~psq8=/!qX(I0:pe.._{uvk|t *_^S]tݬ_&Kt ) 2? W8v5)lHGsH p5t돘[օ>,#f++.$:[gڰ܈{ >K9|=o1Xx0-ɚ/=۩{GF(G fr~y UW2bLDL5֛52Лy2g5xڵHn=FyuvլQ&۩`jvB^ Yk`"ozvźdSwhį%zM}F< ͪx}ՀV+znu*XZ9fL"7]qVLꥧD ;2L\Bqɦf`IքTD0٠#89ϽQuR o06_ ð±'̣5Y z VBJ{eγ3Hos2!;ukk1n/U_M "ZxbKrΧh8mGEok[og (\ux-u\Bz;U[XpkkYX|Tiv[jWudrErrN-AgXPJpƨ.'Woqnz'Wn yA`imeG L *s0e /!bZ]mrT'|[9f!dD`\X6s VJm&omRA]-6 +0 `'KcaV|rˬ-X BHh` DY'(]rpre|хșEV :2pVU0E7~0GZT@:tJ&Ӝ8(DO 'BQWY>TM{_A5܂Ebx mbxj$U1+GӵՎCda! >d1eVt3΂OlF ^48sRHRJJ*x:$u 1·au aupKړɕ n;8.@k_>0NT 5+`n[N\Vfb.ux}Gs\vkq~7oO&@         `H  #    B`CDEpF29n*]:DWi)}fL`lHe6HK -\u9@         `H  #     XB CDEFR44<D>'FD<hMN& f(Rqwl a  6 `     r T 6 # ~ J d`\X M8KE>U5&(@                 `B S  ?1 Ho t hx8tq /th8t~tjt<;t,2-2@Xp1P@UnknownGz Times New Roman5Symbol3& z Arial"hJѦJѦ!G~0S2JBezicJBezic  FMicrosoft Word Picture MSWordDocWord.Picture.89q  FMicrosoft Word Picture MSWordDocWord.Picture.89qOh+'0xObjectPoolp4ںp4ںWordDocument!xSummaryInformation(DocumentSummaryInformation87 1bjbjUU !x7|7|(lVVV  x       $. N B V    2  "R V  4"V  cTezvY2iEtJlΦEh0/Tm)nCbv,Q5UJggfXSGcխ/t:=ʤ&DiVINg-.f9=ca PMx'6hk8r/B%>tw쵴x$7Z:$.𝄝x|*˽'h+O3ϝ I"8KSueٓvSZj2ڹo)ݸ=giKf%wO_-Ą`d8s4L|? w{RvrnJ=T-Yŕp/H+x3u,Xݪb뿧_[Ro<rHy(:gC+xYrj؃]q`XKՁFM oQ3>8 gWC$ݍzVJLfZ-[{ 6*moA.Ͽ28x^<]}<vIt_wbCrVxZ9N鞜јĶژZs4?^Շ_g\Jlf4j B0vlfb$iѨֺA3T|0`{ޣA:/S*M?xN@Ѹ6]ěW`9k@Aq~OJ8Ϻ Y+i*5!Fb'-Xhvhd̖V;kېEpg'3#mmsDZٞX2<`tqU w4)C3ED^%نe%/K%p^%қv J k\6%<1g@Y-Y;O(O=NO]TؖgLvB/1L<, o'ʐB`39U6Le|y` ?^t7fSp%nq`zF-ZwV^)0xOl$y?77 ܆ʦiu+N 9"4;cq9^OToN\Oiisx hP4`0T8~Xa7.&4n^[6u71TfHSKAҶyVG4x+%c I}`8 v5B]K0]/?*=C A=\f+ m qU͈@P{>ZsSJ;0OD>V Cl~DвЬ5DrIu5Ц @147ږt#ڼ{ xe(g೉rj %[PDWQSE-ҥ 5AWFpO\$;8Qpls7_I^MlS5xY8uFe< _Q%LCrYN~ݼ5Ǥ kiOVSWKx>~IxP5tahH(ǺR ^lG1V`FI"Pk&k3w5<.+*4xcJm&Qiմ$8Pf+`z𘳤VY7h"zp \Vдx8b Q6=mpU(@;N0 > Nash0㉉fҁ6:c7ϛ.%iP⍀^H\)|s/@SCG,T,D.ؽnaaUk qh]U{%fF|$3oFǜиk\@+)n6qr)dƍ ]2cY-}09W~Q)l0;W 2y٘'~Y=v"KTa5YRxWѮjJlۙnۨnŽsNesl6y;mBϡV̳Flv6`;)w`ւZ5PVgepT4iJ5vmXLW|mAKõỨjQ&|M ]HمYPI6v6+1ϏM2{HfăLTji5?,Q9NoPZC1D=Ila3?誒5-zmjM엪Dbܩs$CHZseu4 P`4o!jrZ&.IudFbiIk (LJv?4 gD/sgkAZ1j?Zrf};VɁȐKpn=I'pS#X+ֽd֠م"|Cb횆HЗC00(F?`L *(.ĺ=]$A+Six0ZzzNjXOr4sF:G" 6q~C}!aɴE/F*)a<; 3ݸïr>m_Nw><6cόG~᱿ ,rxEe|hBbIզj[Mtx;x[ɺ0>=ڒRS+wE#ݱ—hy<83~w|RB,!m gqNןYd_JcO\)`˦&W+fj.%+4GC>{zŁ2ynͼ~l맟:N@z(4@s x% 't(<{FHh<1Ï,9}c>ø'qađ'"nNDhdQ Ij@MY7RH/jTmzZcC{{Ldز@1Cq,t_(p_uxqĬ]v='v\G;kWNR@g|B(TAq/Nt-@戕"P.L9x0cL`Qc Mօ* &>)-x@8{ 63S|8(&R] s@elbi49180 |{?H#D @xh*M9eO]ݟ>UP:z*h2 1Ջd2 Ԕ^9}@#$ Ãc0Ub/ѥؔRXTb!Ët= @8p֍<9B > kRX@ C>(`QF =Z/ǁWDoW: >ȣ0.8l2,XlqD[};7 A-p+;ې/M~X=8l*g;<+Y#kO@   Ͽ VæU48APCY['o-sX q伬.($hHԪ4v5!|vy_lnT3:l_Ua0k!bP-wq5qh1W_DYxb5`[ACFVZv$^k֓D;mC7SL,ko&n 9W1ءec9(ՀXЩA%=Uw>I 5Qu FgF!碧>³/BX~mo_Cw 8 b& h=a皰V`@ ؉t7#fC $)Rﴭ HDieaIJ^Lʝ2L>,Aw x~`PXA1AwvpۈĶ:aȀx 4Y&䢊6*CLyhD{b6E3"D~O1\RϟF$viXwPK؀V9z :l9P3C1,Liuf7*tBmN%uE+ѝSujϡ~p#]G%g~j.ާ#WYKQ1 0ղ t!0T+!FCqNȨT?paKāc2Qn.+ ]h+/6s<΄"`$AP~ɈۃoY-:MtB_b'zLj"eX?B+ ]A:,9_M@J#>qU9*y&B8 ^g$45@; A~/2 PE< @Ƽ,X/."!rɓ/U«9GI2Nv z1a!^R*]' .|$<6Bđߣ"Pw>βvJPYQ'ԨH,xtoyΘ]RB}a;O g0JN!3{daM5TUn\c$&T1IeՈp}-vqpG禑x\”?M=9Z" jVy_K7UЭ1"׋=UghxReNG?.r);=v( y5x*2u.^ӛJO_Hzv4>._ٰy=1iVy SJP1gcCNȮ#3!H9;/2 *sߏg4dd_2ƦbEA`"9b$ǣ g[u=Yf Ļ,΂ƭC];M2i4yYXh↏+OI6b hVtc^ޕ ީzU@2QIU=?d#;}ԄXaSE%w@޽^5`'X9ha_l֩Kʼn8!٩Q.5{-/`5htzɁcB:v wə_5,>7`#xΐ-e?hXWS<7;x!Ez%.k*'[cΈ. ގr1d-VwG^S'7~1&q~j_Nwa/ڰ 7WVq FmaB) uHaqD4Rr{ وK/SRx-N^$%>s?v5kԑISz̦R4WndMm5=_w~ h6M{Ma:a$r|ş#MYOǹ~Q{['n,r-s#R ^Ku fFzҬ?{U3€S<|d,8xK3:zZs_rhuۇvwNw3(' <[9XMK^O{p?,v t}=;֐)g>ޗ4͔O%7P a%{Բ&/ĭLVn{)U3 g%SI]=HRmWݜy魫b7ɘϿؒl_^06?xw}%LTaΉKݨycL6O|k{K +9s޷}fb"KZآ% ]8ʫɿ_OyFז(1$}IΠمT:܌ƓSC @@N\5N!m؝r1z[V}u褲Bi -ݴs {#Vu,Թ)xXF j3iwߖWA~Z8d-֩(]/n~)j/p45YM"1IMyyR Ce;}țddrP -S&+A}ܥv7Ԭ&&wxpLA^ۊp5 I|ޓ@ #rn*CK8oJ캗WcysOdSP$!p^f8*s_Dїu a,p6'Z>x.a6\{@pˆ斥.E:N(Ս֨ʗr!v3!$6ݕ0HgWI >>E|<Ȋ{J9،f8$jpT>`Ǚ!G3:' l6뙴F>2|D7 nϿ3\{b_e}^-Q<-F53D7w3}cK>&^H]Eݰw_pY]bkZIwes:p?v6#bhͭG)DY>Al~bkֹZ0`컣A)qF0T-ZO NkW% O:p)@;deށְ|7g.)p,핛7RsiUluUCIytuo>'wv1\)7piouQ`^^/u)iFci^wtz'sߤ/x^^Tϯ~Sm75_g. k羍AWpgKTQ?~Z_ J wᇿ*,Ł ecg4U)f3XIS~jM|"$T]_Am.66TcxJ'FEBG/GtЕ .r=GOfiރ,T!D/麬G, - x-\Jtڦzѵe+.c@wbER WbYmf'*tرөK ?},800,7:=& @9o9cyꄧ i_c.'|m}-蔵E~.^K_L(J3yEk2X.I K(`ނ gۑ:FI_U\𐒵mk%7C LCZO̤4o{0<AәE& tz 0>^4^*w|V$Y[heҾQbXG$pd t i򞦔ʢfcuCݘ';SԞ> '8T 1M<B!Zd)?x/GlTj|+e`@ԃD7qw`0$,g/#/h'C$KU<+KKj f@(<+YKd@vWU̲,냧|k:*֗ڳcԭȗx>tOnGg+o/,S@nv~t ֣ګSą9.v!y_X Goboڀ9,*='6*Oj%B/5;[|%%xwŒG: .pN)]&/Woj.ky6 g<;eT5}5 t+E{=;N_|,C}t-1.Aψ[J&}2*tV5z^K.ӲSIXYx8uQ>KĎ$+I&J'CڦҨ/G[oplQkO#omwDtBTs19->E9?זMXlΚ~j+&ecsA[͕R+껌~SAUcUF=Pbp땖dΧz/"%KkzBXgqK25=qW3ٮvw]@9%{!cR>٫ >bw򒖏YdZi\_v%%w+9/f 'i*O:rwqTr)= 1\f My|6! M f3iSag-8%ǾCŖBԮh9wvAfb\/i%5 S^ 1yU}u*<>'AҰMe_ PCEdU^4v@/p$c9c/w~Ss-hؗ79}?X+bԊaċz~ne[h> ɕf0=އu?8?~c&,o94c Z?(޶7+qsVk ,mb2wk;cd~?f-Ωs]x'Y_b1]d,m.WM}Z Y-])eRNOxG˂yPT=r$t6uH6ϴ2fˎ.FAlLqƒ޶◦vzumjZ̩ho~OSE]ef1༅?SiWir` r\5Nֆ>G47SlzoBcUu\soO`yiN,b粿io2Vw?hHwFӣhifֱ͕s,-8!x*G_0-qĞ\r)D+s1sfq\0y){#u$|kIRoNBk@`>a;X$l"]&!&G !H!ȗpBt%HiF%:Rx?.E^ O5?ʟfO OdTI/'Qhݚ|KoBif`@,b# C$Dfԅ~ cn8#ز5H \ޱuMj,|oÊWghȑm1f(4sۏwM]O\b‡PC >0[ bb8iܓ1P}HE?+$9 d4Əlڱ*/ T%i>%S5 Q)$r,c`3vpOXAn} սsY^e ?Pk~#$v( (yx>H . ,^I Dj6ݯ 8۵i{1jv ^,Yt@J<&vx~Yl`pgZOE*'RoCĎATeϚfY9(N9~t8䥇{] .\`oyA׎tPGP(6Ӻ@[DOn;=F!0G;L?vĨ4bu/XO 绸7ąx*5;}!F{bX dҘUyov[$\yOG}HOH˘@qi;Y*Cb'qW:}j4a Q(%\PiSD*7°a^[YrN@`vc*;oEu POη뷤SD'΍ 0߈'f -,q׳^[2tX&:J̬=u扁% Gd*g|FUE M"M.InWpAGGE)MGzh>%33zT*lHEP#) 8yQúueQTc`m燁:V+)UgC A`".xHƵ3:]X%`]+Da$.mfU$ƈ''. (M#X|Ps2i~V~qGgfiMB_h]woHF?bll!V4nWыЃdWVyb"ĔC^@f6?8t q):7Hd+B‘Ԁ*bB[dw c{:B Q3= i:~ *ch>t(Mybzhyz[o6d9SU[}N68q).!ˋ~" Fﷲ6-;U􌵩;I ӷxHLT%' ݣ4;sPx\zf;hD^JNmנ惻yf`w*@^*۱ d4x# 菢Ï onk=zMgo4׃@7DPV8tobm4675^V ^@mx !ͣ@-{ @y0Fcʶa0)5a{D't@3)\󦾲k^bR_uT= /ҙ`-Wʚ˨62 ׃v[쩾8?D|Ŕjɘ4^}- |z:D4%^ WXYt7(]<;هl1ɇ{Ov;L)Ik/WBW!U҉YQ*PrwpR|֌6}TT` 2r37jOT[AўeW=!`R#6wѢO #\DUu׮)X> (Yg6)]=ֽ uuIV^5"yL&]pwz.Lq6NU\F)CSt2խc(nY3լՊC0s#J|z,aNz2+xR QNh.DkL0\,Wd=%wʣdrYJ10u~DlCߏa A%ӕͱ<l#I?wmNQzWy3)'rb]i\"t uɅo,b𯼼q9zS)mο+ BFc;Nφ{uz"1hbix& J Y KeB-r~#Ƞ auvCft}'Ҝ9[Du!.rYprEFtR h3-Êu%;?Qe3çqSfL/4s##$@ "kkyLj:tDy?~1nqSzCb"ӄtwby^X%w D^K7@*-7Aj-\.Rt.pГ8M`xm{d\*t"@Lw8 Mn{?Gl`6v;lHה% xώ꛱sߐ֮ߠސG~YNQV^n^ٷ_𵣰n"bHu /i#3klɵhXgGշR9b;LN- ^N]D],->68k<ŏO~I1 s,/K0<0dS ӧpQz_>{Xiq󏶴BwoOkhKjۧ_p?Kg7fRJnWnv9V(>sm{}uWw.~WJs{yfNOp`srS32?WWj}SJgT>kr/ϯ)v^_n.HHH%<[ζU8fZ0}-!OW 4"4 yzJlCkm0vU9>D \`Is YV2Ef'AcP-i+K-<}v}X^_HMn'Njs6kvrx-R|E| 3<5'Hʼn,uTi1H,˯Kqp+fQԦ9"MĠ܅|>%t]F_M$45Su S>8!mܷ3+W=*p0_v[`2'$QJhcqMYn:k+Yݨ 0zM,Op>Ϋs|)x̋3,ԛI@2u UEg 1׫.rH5\q`UQ[1Al4-nHWjzF=/i3n`?/Wb<|kd8Ùe.Aa&֬^t˅a3g pպ&73VE.d- R;ϟi=G7V]h'?/:jMw9iEz=O]~ߘ\v5i6[v n6?;jX7ee֙mnruȭlLnYt(m}}/9Dos&.)MtBNB%ܾ,=Rk}'rZs7sw{`= ]߂?-~SknzıyR%E&Y\߯ gCvk9#G/ͼ]3&7.O yfZ24!^+<JֆS(f \_kKfZFJmI⚪νVۡ.YbrLvfU:`g^v n%nȇcb[˪B 6zTN:/xk9l-u> hĎU;xbCet2EXZU-€'d ,f1q;#_ qj(n*a$f2oB \ ]\nHw t>" ವM'n m?5xh } 'T6a;AU#1T㾶(Jh \sW+nHrb+$RW Tُxi7Ap^+VZf`'*?.G=|63RO4;6(\^7̴o}8Q4i\Z4 "V4Ro!1EcM[NO\Іdu?ͪz5-z%s2b0gBMjszB[L_He !ݞ_PV#(Ө q(-1㗼E dfYuW\X~!8϶f~#4guGx5VVCN4ٹNdLJ@n^i]kd}* =Om:=8׻\{!j/ߙ|_/NQ/s$rͽ?E! 2ۈ㣒]kSbb}hr+=~]2DJQQ/ L\z5^#呋إ'ޡZJEDeM̬TM]Ԃ+Wv%AJta$`%]+(ͧ8rSZ;_I|ڃ QGzw]KR}'&K:l`)1kNy}$pbvIv&SesrB#?"[n3䒈 Mo#Mf^ԫ,hMGd֔\ESڰF&\w)U 6^X sWTK]its9y.-B,,y貺oč:>(}8l]ɣ*-^(rjhnfs3o_op2r5~/^ Oϸ+-o~)7w+n\ղCfkKO{9mK#f9w7,ѻ޵VyVj'x]=iY߻`vQ(u-ӫ:J#0o"?6r>Wofر|]w9Ζhr3Go>eobϫ0l*b䤏)回T*|RijN;Ln8gch\8BvT-:فɅI2= 9y#_F=E ̑QBII[ȭ*ªW-;~A%q~mDAOԷB΀> 6a%iaZsJ;!cxbId_0B Ur0m*;(v 0cMۻ9j$iɷb3z˸a麡rg>J2~ (8-}gwa8Z7F&/N *.rvGDwd'<\G/xOR_2w=o,NWhl*[׷VA$sǓc:? ?J=<4!ЬA1}0g- {ɻ\Zo[>kbBRfvO٧XM#7>[:"H~yg^$/mr:ms#1$,CzJF3f6Цm:y5>%K~W DL}]WA0Q1.i ۫pA8A eiƔ|kib1)b?iVVgcӺSYP=OfNV݃tXl-Y-x0+ kWد]{dp ^Cڏs@7C D7DF$#]n"yŎ7!HRZ?ڒ&yߍtR,xQ;{&S/mYH@EZC R5_B LȦE ,ߚ5ܕ࿞HnAN'o!iRTlNsZJ9hfG~3 oFD|mēbt7@i?"H3QHcJASbi3#03awFgÃc'$C`94,abp/8a!^|c4\䀻Dz<4m_k J [~W]S8+{D_?xY$)9U 1;gל]$b71xQKO{gKܼQH\"] =H!u&:8P[Ԋa$Y tb-=|6h |3 8Q|$֯"Tg8 8 6bjWDAq_ؾ-']؟ԭخHεRo:<ڛ&DϫA/NǼ .JlNF$;aebTϾA@^z#*$ ! .5̽Va$uKt]:^$yE4uAf猕!X:˵+u"L~<߻&֌2?-.\dNė kowRVcs+On۪v}?:oi.[ҫhe:?n{Mw܆E7U6Kn͋K4s_??/}.YPrk''Fed1/gI໋>Ca-g7u=v<@u~9a 2ՂAL"e.αK]og YLj)F=Ѳ gV&ML.vݲo7{o nj~iJ Ѽs%osǕ6OHeiZp9$[[bqfءjh&Ds+MXɩ 4*-z~\4Z!W[OL ob='d?y(`g5*rߜE:X㹷u}|q/0 My?`Y] zK7o)0ʎ86ׄ5im|Y%"-H7LIBi@(tIc=(.գY0*mYQQu.SrcrW'4/Dr:>36|$&eɇ#0D _xbvboDDUpĥX!kTn%,꤁˼~_s ?fN/Eggف.{y<HGzxp7ނCzXⰺ9l5l8Z,Éreq]d^*wO nFNsGT)ɞηxF2B1My|||>-톺T"Cz[CnߗΑ}+#_()?׎󳼇)"u8<ҥm{ Оގy !VS ~:9Ul2j:w_k;鴃-ZID,>艍\ue]J:I2W "WzyZ||GrAE35 lm,$3͠#xeh,">F&4Ğ>Dwb܅$!ZMϝ|"Hnp)n)IУS~+E ɨ@bΗ F_5ۈij ~-Yk LG/'|+elj_=N<3ZP(Vc\8z qɿ_fIrpU< `1Vlm c3|6`Sb74z.wlc٪\l6Of4z {f7zIrt _IM {XhaӦ9x 2ޔ܉,7Rs`i$c`.xbTmhMuӳ;t*< [kIĥL+WcOE^QMKyXv鉉>MJo"}+K4hݺ>@C;*uRη珚6Ay-?NS}Y7]śl5DDmI, G[@4[ˆw;*GĹ x#FםL"fݒDp%&`1Nގϴu]9=%u \޷x=Zy #qP[0wsc1:)DlUL/C$h]`aPrHrcR>XwcUM [`?wjh{烽m6M->f¾nOmr'-.#;~ᖯ #8YgI\g,\w4Z].ץw/ckG_QcGa%uO{ty>zI3@!\nR 킫-jKSQ mi!s?pOfUW2/뵼s-vđA什[W|>1 XيVUɎM]oc_J4s5=OFqzI%Fmd[ᖷrГ/ .x iE_#^$+*OzɰkH#z G!r%6L_4NK KGݰ7§>$̯敷HkC;gցSߎ 9g#Ge+Ö m^-AA)\LGya;f> l/"8bml-\NfLեm5w(gc*Qؓ-~21mX\d f0;T4{A{$DYZ{kxb;2lj yK14F7-W xI]|&UF_}E"%SKbJ|;)4Jlov>،6O΁[Amb$&e 4M:?7z/8qHE $+ \+V /K(+Ox' ZEOL8@ Cj7yO<=y Ywo@f$´%ԩx/΅[:Xod24(-uCod2E$vaH:&Qē/2`a̳KNT٩W'X.p1 <4$f+λb6 TJ6}wd$@l.;`_?;CyM*[[AKӋ{wr` DbF_ʹ/@YA }^kYͷn7#A0='z'x48qXc`}"1we䆢x_Pā#Pb`hukg\7;DZgM"jڱl"S~WET"]o~yyT RDJG sG\qF#֟Dbr QA `(y)'/<ތ#=XfhqL$#iH }=7k|bxd~on]'393u{,ޛ^4;; {:H"m ~[Uӻ1jC(m'bi:#݋H'1!y'h7 @⽱Y4x{/oq\PH1kM9:PiCo >!ma[t+$˯6+obɘ0)ڠqSM~o t MX_Y(c~wld0o.}Ge냤u"2|֤47j 1X'\QߢΟ(D\@]x/@Y,Co%aό҆@o^@Zy`BX`ސ}].-קÏFHb=ylGȷ0X v>SS-P9.le}t>(ڣL̦NO 3 bl"*P0QfdK,q'L~>s3?>v ?y~Ѷ,T WRzig3sWF3B7/aGGF.]L'1H|:rz`FfmɿBDǣb+0}!nrޅ?7g} Ǟ_Q?q.뛧9]O~WW_[޾~.H?xWj>7dًb.;s|nr 7( $H~ljoؾ.~d8j@=CQPA[8oRX.6yi&Hv%Fz ٹY5j>nj.O05rԇ=wO,"blF6;>KťR)b<e%tX7.(4zWe =MHtġM.9 @mAb%kSSX{ׇ8{zIX',3iaedh_ÏӍ&͡Z5FP_{p̋gi?U֖IXi#2&6~p"4X{mHxY>D @\!Ax0u)f;v/6^C0rl0Nŕ4 @l%]c{޳ˌa}Aw,f'z3p3gCO }'.`ma [ ,[݀~.G˒1Mzfs kOzΏӞۿ!6Sr>/k`Šfʞy{(*Aq,[KVUZ9w+Zw }Ky*~ĕ`M]C4W ś~~>*IENDB`Oh+'0d   , 8DLT\ssJBezicBezBezNormalJBezic2ezMicrosoft Word 9.0@@줹;r@8?@ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ[\]^_`abcdefghijklmnopqrstuvwxyz{|}~K\-uG%/uBqD㰅#b 3s8 VP,Y8R$GB8B& RMٻ^6Sog^ꮪf0=(8"1\8Ҋ?{/uo18o[2{av)ue~' 猎~鋡߯feNQTӿֵt;o?ỉ;[b0׾}r/sb1y*raDz[3aoc=ڐ<ܚc};72"ڳQ {b sp-!2З^ ˇg1G> S0|ӟn f[ѣp1w' `W_*C? <yQx߄ַmx{O<O> O=Y+`A-@#9&2BbI }G3dYM4~F"W12 $cAAxcQڔ2hvmG(ے1A F ,Ձl3&ï=Db;4v 嵼{% 1527rrWhi; *׏ ю!gDKAm.;?ǚڼ8bq!'i*/yQ~Y \]%R{E #)l2螧d >X%^}%4>|kŽwƮL>DZX佶m'@'I$I$iJ\)rcZ/G#vl$1B:')aGzZJ;̯&ʵZy+"H*Xq{83*+xa('U\O/RUmWUZ9QVӺ]5bL\n%RKu=LcDЈ9F{08sgk{YG øVɷu +8Zy-z=5&W"V(IHc0»1XSzt/hFLM:!?)8E^HUN+ r mlBwbJݸrg\] ϥŘLXww:Quthe =TYWig?igǪ;h[ΓO_++{G<wa˘ƅ$s; z_0 eM^ ~$~@M){VE5݋l<] E;oy|41/unxP>F>%ۓo,4;CImRۜ nH6 keZ`Mp͈†SUK/X|ڹ:dI j i6ZF4抵P-oQܦ3[qhb$?j??>*ڈސ*7 0a*8`Fvul{ʷpUDsyӆGɌ>YP--͞A4a-/n5ZԂjf&aՆJUgk^7X UHBLo\ʡ hQ T2W /DZFSɫ*J V@jVK Wb՝1V6Z-4xX6*Wl+?*js:+MCc«4WRiVYW^o3tB +[Wǫw%AxiF!oMAݢS@-W:8Uk|*f jư+aU:XWK`_x`u3xvxLqVW+9J&^mڟl&VE%* CJ%^mU֝aȻǧbUl+x5!VU^ībY3+x5bK%\Z,Nr&a7w^MǙ3/1V^ eAz ҆e+-ubKT'\#y3?`tYXyW.vWS4mbB{RʀW _V>Ch}fH<6ī؁m/7\3s}ڦ.M+:SFYAjXnxkZqjNky+\[hm`\xͥ^p`٫M1MJX݅ n=qqѦmZjѻyQ3hPQpkUU4^m*t ~{9yXyU|!]WMA?x˺w *J5v^/t>SZz1EXMבY?Ts08 ZaX앪WM*X|HsY}PXXeMʁJīI.z]68Cƫ wW*ܚ}tӰw2miX-Εx岅.buiLHYWDi^7Ԕj*WDnV>D%^-FMhWWq@M1ٽy^vٌae)5/ug(W7Woe]Z{Oc0TWrtOX;+qL_q}q4MǙ> l=euk+aW 8Š8dW^wȫhw&HWoWv]hQ?H 9V5VVZz>VFa6?XWb_x3 Wêtj$ ^v?XeQڡ a%[njb^Mӛ9&Jr6xeuE{H^Pi3 V6pϫJ@E̚+Yj_^7T<{s4uWΞvX'ϫN+_y7+_UΚzEk^Uxe!mjUXpc,Rpbg+zxêrOj.fīīcq*xV?RJVY[*`ecɛJyql6!B5jr iEf0mq`J!U^+YmmK+z{{ZlpBT]Br^˛U W @%jCex$EWDA^Rx5-ՏīLīīī]g&axX ī1sU&*٫tLX`u=**]xUVc)aa- +rW4"oW~6V6H"pmCg 3 tP(.B\P lt]q}CI$I$I$I$I$I$5H=.tP8/p5m`aW>u-,xOo?e>sΣw̵֩oܱ{p n?[ ],;}=3(?vƣw6<Iin[fo#W>U?ދl0/Pklov[~]w0>w`cpcag;dog[ e_Dp?_x=eO"; ,[Ȯ/e{/fg_e.~/Se7b'q 3Q2?/08u&b`8j̯e_Cd!Dd-  S bA? DAneuploidy in Barrett's esophagus"2!cv4H .1`! cv4H|R_w+@( x} %G]{ݻ;$Mn:tnݒ}ki?,%,b W- *PR(Fb$Y4H%H%$AC OD!D+Os9s=ܳ{>2}o9gfc~cM` :;:^'{ 8./8|N/}Շ9k9<[J/n~=i_}PzO^͵_:+}JJ>^9$)c!"x?x|,/fe_/?t\xۿ_wyO]cc"!>ݍc!!r8xRƻ"<7ćȼd2܋ߗJ?Y%SRxA R8S~69ρu8xOpկ^p%e]\s5\߄믿7 7o{;q#Gw~7}o}Cpm_; nx{衇? <|_/~+կ~?˿};ַ'z ow]xwޏzx]׸5qk\׸5q{8Gy,9c4 r\iX>#_z4Қr1Xg8R/Hy3'\9}6(%$V:>)< I I̱N`|:jёOaƄNN^ e! >}$!#a:5&`c pǀKB1%0!JBc%bq b 1OBlT S,4!3*A,b,O! %2\`)e%FUdR Dx{]ȇy *%qPHV>ߘaO2:A Ob/FMKfb">tQr +Tj ^>|$<*YBp Qj N|UT2ͫ\ Rnjɯ-ty!!A},{e:at혼Q޶ #Zi_: ƌЕVjm`s$DPIkZXa' (AS $5`|'o"5Vŀ bɱri},8>jP+KD2hdoY m<֫ThM~jKj3x(]L;?i'[YAqk\׸MLm{.Yxex&ȵ e+0(뵉ŐLE˸5R.6꜕)ùqbqTc /9iYm+9.OMF*3Veffr] .:-Ӽ.Gk // [PXg%}ֵּ>EjַRuL3o $Vx!h!0Z2[W< j DA2 Ւ Fgw!e#ca]U-^5{, ! F:Vr5 r^/8$NgbxÒS:X3B/jƤ#2!+K1 v'}/>**yjnE|MbY'^ִuqmͮkpf=\0ЯnB[1j%O0y$BsyfLnZqXc4IYdG{qGۥIH"$Qv$Cl`qɌNۭFW1F ,cNg+u) wn?Yr,; iT𙕺ĩJ)w&w6:YgW:9k.Wd33,,MeK֯pfG *cv$t@ZY]4Z]P)vɎ'Ma\j[cMsUblsTZqa{sCT$iFّ^ȒP^rxRW[] Vf[nmG ٖebuC ];tQ`ҭ[&VTG-i[nX;^j-2$F}u, e}uʥ[P*V {y6V*/*SNoL*ʴ?%<vvS=UeaJ-V6v)M$`،q*HII,mIbuj'6 ecX*߃-\8p+C*`թe^ V"9ON9O*kMFǦKdbd,L$2)cۣHcjQWz^t EL1LDZ{#A)SʃIJb$I"v ub1k3myJx1vB8.6V:vI7ܝ7j ֏ԛa$)eQTn3آC{;wBv\`N rVLaDJt1`Q7|U|q*_sJcШW=:Xu0˼3:{QT*p`c75Pjcukos^a*m,͟9@y($qI0jMW+V ko8` йE2qbn +z^%D%D[m>E!i:6+Ɗz]+K F)`!0I$fVNEiAHs z%^pt+UZXFR^nPuuca3XEvk.Q ,n|~P@]2Mi2URQowб`7htUa-M)=6ᕮÊZ{JTUjOi}A7Xn5ntX$zep}eMU^ l;VidH7W(CajXv&B_ijL`W 6u-2Vd1jӏqbe3L?*Y$nFd)<5 f8^dt٨hWvQ"R~ūVWf+=j)flXaVd0nB=^e.T0ƸJe0n^zWi XK^`U$gϤ:.XukW3)Ca2QF_JmF{X#Jë2VsI\X-ӣ%-chtrmʦn/9YUhWe3 6 j*g Jcīd0IW*ބW vJj\B-cՙd22hОiiwz\xj4beN,JI}|dVle Сj`Tv T}Wm؜_,`xUjo V>-2HgsW"b*x%BdSByW-^UڍX92)Z~ RwbT%ZI`5vO*i.EՐX5:#Tvָ>MyZnPrl$b1=2h$WB3'VEMX϶58WyLMtoPBvqP`UL5;;E2/p\ikfUKcUcU N |W"cjb[]k&`-XE"hA;acWL&A2VsUZF+e?xѸcSA=(! x%8a2%B詑kڢ-+чWEH'ĦhPݮ۾J0+gڄǪkWF-kݾ@R  /~Mq:E& JHZhv@KBg=u* B1#í[ے* Iԍk[yC/u1oB9 ^U>K*_) ܠUJZN&Jmj0UWcuO 3dD4j**HlOͼTƺuH^a2]IUklM;qQ`52-vjԊ85O{6UkON nΡ^ Fi^Znx)!l8+jv OhwyGW"V}y5Xm.܆}%jx2L1.^|b##敗Ċ)5^^&W!bMo=dcë%n0.}[0NqjWVmV^u'Wɤd#ҵF[UŪeT4XipL*r"xUZ42q\ڃUn6y;>DA!yhԥ N}Ee]=dM 5l`?$Vʦ[Ϻ\`ӊ#WI՘ U">yE{㴰][1s-n5Ꙏj2yu`0c5kiCbexŦ+CH#WiIݡjHfGLXL.VSA\WX|5TWR4@$4V3ӆW++62 9$3Cۋb4p6Jr䭶v.*xĝ9J1 吹f;Vψ %V2$nW{ĬȠYkQ ɫlW4j3hPgU01PcubeƊ]*UU6 FX2,`wji7R]0V]1mabMƪ>HS bBëneVK*VXE>3*jʍ^`+v20XmWWzp4ͪ +ʿL]P^]+3,CbZV:+f6`?SUx528l=蒹ސ~Q/&dnwu9 Vΐ^T*UZ_^ 5gk=XY2+.m븽S(ސ&XyUSRNԱӘ\*}Rʫbg[ĺj_Nֳ"®V8CfV&PXf{n :5j|: ri[!2֨I& j{Qrzȕv!VjJfWLr% o/K:!`Mk硰~%YVy5.vLEDR_.^j<RM ub2 :,:+N_R :,:`(GsdM`;997X+U/ln1R33_01o{5e5r7i. V'WI W1 Ǥ,ΌS ^'b9H] )ljD*uZ )~? d'+ڢɬjT+H $0͋$D)bE㍾S6B4'քS& AñmS 4!F?Mq,q_mt;Kf 0My#D(bY0CJ;n ^k?z ̢ :YX5 |}Cm<׸5qk\׸5qk\F`܁^'{ cR!4F|Ծg$ q2OxZ"<XQ3 yC߾;σW\z,凮 o_>V_e<@)p(5$'w3C{ " }gc7+)Rx~BI-"/.Ό@"m$ĴC}Ό^?<| '_<܉vx]xpB'"o"g7er-y~?K3!/G%glχG/&G y|H=}"'iɩ>z';Bmd/Lo!),"L򭄠| 1,^r3_.\\ez)ss| 1~%I?Nr!vﻝ<&!W 9sp?ew! )ry>+Qr bp-y,ϓװ% ,[$@tzU(snr;1D?E|~܋%p?,#aK!%}z! }+z?}~C~>F+3<5z+[0mO9Tz'MGz܁̸i­FMz^@y "<^Op^IЫ0WѻOb^F?Eѻ%x4x4&3E>A>w:zTG_ Wu]wv⯫pO}ߐu|_}0uQr΂֕U,Ovt=ʳ_IR;<} jγG飈CF 1-_)?C7 oQ&_nUFVr_X<+w̽ PO?@_/34z_o d:NDd<;J  C A? "2ML+R 5$i\M,S`!TML+R 5$i b8E(*"Mxt+y6$V6Zzʣ+; g]ÉiG8ͱS 5jt V &q1#f .^#b鳱6ئb{RlbۼHs( { $@>b`0gJ +SkJ?,|\8By}g?$Db>o|s_O߇4@{/N9+;~ {קRqAyA&==awiz~w Bܧ?ӱxԸ+K7Dwwbw=]s᳁/k^jQmhA6ke~[ B_qz=kO (ˑ_/h6{Gد[itA SFHyO\07vc65iۤhyD?xW=m3Fn ?®򾲻{c;۶Ϣ&~=gkۄ·k=oϧ;j"#i{-?{Ozu]`e,\^j҂T~8׋?k뚺֟ԃA"Ԥa;޿fğ*uE*+mqt(RX]q\]zdo۵jp |![eg)>, ao8{Lw~v/qOl'x:Bup&ZPw>ֆ ]\q> ~V8 sh%;8Y/Mψ[,S"w*a fآ96i0'  i t=:p'0~_qodF{LFpw]*qb8# q G "<q=}E! _Nv?q2~1Yvi8I4s ^! cg'.Ԟm ,@?@B5OQu &BZLGG$; ] H**qӳ,v?pxSix8%5lG`x'fn{((Oq(Y-jnjDӆaΨ&TgGZ>k)DxC܇FDDqvY\tbmd b0d@lgxa.qg;A!ʥ8(CG<U>x/uC G{>Qy n0 9a  3&xF?'R{?m?Kw&j4|0飑I YCZG_AfxL'n}$Y8H3HF֢ $Ћ9]{ tLqwx/gN@_:vwZo|}_/~^yui'5'4Tu犸P[SYZ&꣪Be[nwU"O׿Dum]N cint\y".GlČZx嗼% _3p {Q'>, +/RX:b5Ζs(9KꚪtuU;7ØFg^+Y_h;qC$'uNŇ^xOVU2Jd֪ܨTpY@Ύ6 8LF/~&5[}\%~0}~*Lab*Z"x;XQ uX@cA0G[dYrjۛu2옛m"_?/~_- /ccNkۋ0$+oWJ7JRqg ص)ƶǛG1Z[嘛q m߶_GOEsG~D%# GMjQY-S6^E߭xݲky:!h)ob{Tk=eS7NدYz{WYD) mmk?2e UVU1\,4X7jƃn{SR\1qFJj^2O-9fQk__Fښ|jM^Q}׋78eџ Ѷ)luٵk<]yP2y%N Z!3 `SMؘPX]w=dn׺ELm&= dD Na=h œ9o2ܰx >V`z;e5f y'q KJ5s.)x ދ6g)-T,В8p\ @-D*ٟ.B|ȚbVVړDN&diHY5A-r|)UKjj&r̰d,Ij.+ل1q~8 ^{\Z319-׉✈{I[c_q~9@u7n{Q.r<&-3ah!m.hE}!d.kmeƆ=~!t'b,[K:ŠL4<ٺa4 iE;;ڬu⇷形UڨL\:)75h(L=%pȎHkAwEVΜ?X)yl[5mNܮzz KQK:8nmVK /ر;{>9]NhI0ô :ˢ6"@Ng''6]&c5a]v̓QpffRtTS0?:ia%mswYi%gY7/Zzi2B~yNLdqYUk1ʄE0O;LR D[uQTtFâ`síϒG/Zy[e9x]%LL$yOJZ,g55S^zD+eچ0x`1y2X4/˺١;-ÞTLZ3JgeU]RԈ͜+mf3T]մfk9~y݊a-5C V8uwvݾRnp걠P5Y H3H+UC]wF$_vz ᾧ/z>1YTD# EmGD:E)fJ1"p 'Wu.:ԡDu9FZS9jT`q-K[ycEo/|ofx_Hԣ35tSufD]<;:fuUC5ׂL[gwXDCʲz<}+n{WZ]t3nk:ޓM|Ԫ;(q,R|)R k32R(-IbҐVU[E = KZ$ma%Y]p=a ۠bq3l:R33 ]:M|iف#0JxHDԴ#2AIG]8*ybgnf)c"kK'5`rXjՆ 1qXAjA1e$b(+KSݢ_pQH`߭(QzM֪jֲjh^ 깭ךsP2n(* 0t+>\3CĠXD5O2irHجh-47m9jhsݞb|?k\h0]t?m!^S"n+eM Kat%ʉH*{6dd% BgJZ>[+ ׂ٫Z`c !6 #md)G^656x^EL3 b(ad(r,@z~t߲y^b|[[K4 زc1|Usf,3&S+IWa O$~_5ffV Tfq|OQ3&`%u}0Hňך+ W5"f\Z&mz=sj|c N%Wq&ӆ凙1f4# Xм]e|JR2q46ciNߴ"d:}Y@HxI"f(/Һ'&=Bue(ndt %Hl%MLTҩ?W:^Ҽ"3 /Os&LR->nR|.1yb;Cw|{q;~V!0K+W&;0->s[U1Ж1[UK*\Jruúgv7|5ڊO^ƼrXCwDA<Ҫn/KΊ?" 0Y8T.2(7#A͓X'-mn|([\!"dwݬ6A*󢾢]z#)$XY ,H { <p&:1];`}:k,yͰיrAti%ƣne|DWW꣬yH&IdeI\ZҚ.xU;r5U>S)Y!j6prR%8~يt륽XJ3 uS?J$|P ˞G@0lv36s[A~ܺ߮bfz˾:=C(K@(-%h_^QlTK,;sĐ@XIX$*8 -ni1K[w܀ܳ! +& y^$bm>!>w(зsTYYsY\a w`Fa -)bti42a sLҦ~ZydW åh T37AԽ򨢲=ul"gS̓-F0FʢH9!-,Cȏx- BC-xtPWvN#qVWBBquSr}=sΗB2yy>ߤPnʖY ~{}S{ڲ߫/ad59Qȃ=?Q-Jbd%.Mü s5=[Mbi;$(1vB<Y)|D<beՎ$Qlb![ЂDW9ap>oZH Tt+YN58 K*Վ*oHsUk! 1||5?n"'ݱW([~,"rdzUY>dny(.*Cãl)º^~tUQf$Q׶J4\T!㺓 FX0'Iz+-)T:fg__6"56U%6KJ"-?ی5s݉xXٖGoI+Z6嫁G-u-abpI"_r,&0Ƭ}ru/1̓~pk(=,2JmuFr{f6꧘Vf$\8#4L^Jcm:zRp ¦UUTSn0|qK$nO9[榣m5?1J(3g1T+ΉzaLVuD/Y<0hfӮWkf~f !{ ,K췼_&BZEEH[~(L~l9 bi/ J3fٸ+ m^,7nU~1XV#ixc;'KT=hHX /WFϚ"Wo<ߒ~JEIT I۶:/~rbC[|X g)U[ZY]jdMN;~/Cmfns)ԯwIk0!A4&2fƇGצMa28{iv#u=G gޅ'Fas]kYUqf(K"z u- ;uhS}S![<Q/}[c~2H^r-M쵓`JKNYۤ_~"f>OnP/?uO,AOϘW9lG`}T}T։}v!5 s`d1Jrt{p.Z;a4>_ ᑒ2g蠻ҫ^MM8#tP3yZF b#VsV6*e@uc:,GSryyOcvҒ||J@#]޵2tzq5â,lZD14e-3EE-@@)WVJMo>O$Y.S3Vۋo,>lmOw( S0!,cRmާ<|!*`h77\귶qր,5@nj솩-K`Y\%Y[aIY3 \V/?y\M ˌ?ɗwn2dyY; 8N K DowIBfQM9ֺ)G4UU3zZ)Уy39hi^{O4a]UlsF Z@Kpf6\ objT}n:lYVtW$U E3kE ̢X͂!%I6N[w_Z7o3WWU\σt RtRVyt jݡ6}?yC>ocydQt,fx3Ƭ\HWzSeƝSR{8QhMgakiB^Ӵu:g% [>$Fp=n+=r &,7iveH:IS+m^;ۖDiuv-%x`.}#-yU7Eg|_aFUQ"xx%,W E;e32I*w, 䁻Gs {D a$e HYq;g; fcM-gy+aʼ CN&~ٸ;Xj-iعeʕ$g"?H%bH>cisdXYpΛ%B%0]`o)z=QV4"g<[֒ 11WkgYU a h\ WA?hU9ᐳ},݌qĭIbo[ٯhqs>_=I6E0[7)U uݳWC awS#fanұ!`"}qV ˚z]ZRH2NhQO?&?L[g1WcjNvnGSJS|KIMFv yPUu0僬eM[h}1{9σ5tz:b+1"֩x' ^:V"#lX:_ KmLN $3j JhI=kǡZ=ewtCe@M{Gg޳̥uS*#*g*]d@_зdivB{*Ոrֈ>懥f%W7"F4!wڵ ^i.`7{粥7Jw_|4 m7ƆiF +sQnDb#J: Ή?%;8Ίjam;P\kn׋uWtꇛdߨC@w0`,C>UWN9_ g%HvѺp{/RCBT؏I^楊;dT63W'}zt),Ckv -*Pq#5lE33ӸA]V*̚ϵ4W0ndqA:݃oBPt[ևe)"͉eJ n5)z񚾲@Vh#7D+m#kBh4kR~),Z-тaqŠVU^mGȬ 1㱵Mf:05Jo} [raJc6Sx̘A1 PƲ&sizI>v*_%IQJ;Y Z놲nnA& ت|:I*+_nҤI{:I 2{`/>8F̤Y/fS>"E艵7[׏C~ݼ1iwpJ)]qۯ(Q^6LФҺE rJZ9qrVU%fliPd i,ywө)+ښRa̾7X,GsGE]SBKb{B1t͆Qdu=,YZqUc_ #;q5풑nqYX[ d i}$+*-\Q_Z/̓=a;]y{r먱)x~grѺM`SA'_ҌIFpC|/:ϕw/8-l֝_/C[>;OJ 0F%f󶫌Yucl=3d}]5LsH.W4QS4+mmǧ5a {v+Fʼ# GN_#gq˥*tlōKvؼ1wɖr?Lti˧+[}!O)]ҢGwOH(Q 35vaMkF8f[_:m^}@и{fpvmi!|baaB۫Ig4}c'=5jQZnHYZi'Uϊj;I;8|.n&n\O9m!m<#ڮMđ>wdhpHk5nLngnj̸6AkkjaU2MCNy;5ZH9TRUr"䋠a6^'-JvGܪ;vRo͆ Qq֞6l_f㆗o3 F¸NJA3Ij3g^z%SEyO凥K:)ӎ.S=DQ tqv{F15LkמԼ}nq)yVq6j,N’~ᵮJ{8Efc057ݵU.GL7MIUAY '6;7yzF˜58'|L&( m\[{˾dޙ֑'I! F]ւ747< z8fe9[46p"Quήs#VVQ_|L 0 \@HqfѠ*-J@iU}[ -^- E#:n8jN9Oȭ |B[f cw0+4̲E13L@o*g0c}rLns&a-5}.4nK΁: 9kY,AY*=$iֆد'u(m>~qeT 싴gsrhkNOG)U>Ϣ޺RRr.̹fgXWrDd=<6,2x1q^l1_Hi y]p25'uth"8u <‘l[C'htJm'rz e4ڊ ( ڡy!~T$+2&q>AQyc'쐃gp>ehF Ww*|rJ>xeE9![L9g]mMMǚwMB\F͛$#A"4"%ѳhp3iB=Jq~PA$h@ GX<XZ"9/r;+膅 ipt: 5BIKq(?ܐҥ-+ E)Q=5p*a<o>hFxh5yN-5uisH!0COˇ>Bx8 Ň xCn-p`?6dI(8Fs1wm\=>HUlw%7/6d{aP  4A@Za6!q |>p>Lblr9b_84h 4x)+*qX[9_EP(rVL^'),4QQA2"634y(w8Ls: Y-OMrԜf툭:ݨ0 ZQSpЈ`S2 E4 ߦ)/ЪړĄ\lmv8pYR0jW"-!6 (8EJW7JQiBٲkx:+P4+QS*b{Ͻq> H-aH^Ius:ړYk9F_Sw]li-s͗a&~O2fA~F|l D2;ɳU}ndtVI;erZg;-&jSq @_,s>zűxAڀG[y|S>wfc:_d:gvO*?|y$-|n),׻/WXHY7mmŰ"ͅ习<D)fer g0ՙĭ"e#r%+öfXe}OVo+.~N"Wrޗyf5o/WR]دv%%< Ӂ'֒(E4Г>;ᗫ)QN+&@$"ce6R(%L6R_2%˫<[K#QKkNalq jg-/~\rIV.cc1?fs]K#cb9/I +FzӺ3r8\}*ǬrJ†F{]"HFY;`hq/rYLf։? 0J~P=,RWb4G)$꒬-h}!Cw~RRH+j2IvbE1.Zt\ 'lnX~uDOqlWe@fH L\W#ADjK[%s8{XMgZt\r{[IZWnXӕ=-q`3~Bl-u݉iDå5մximxJ9|<8S lXvThx/_7ʪ1<æeň@ANn4"ri-n[pUf!?$?W7ŇE2)_Zy"Q g][׫쌱CVTaO$n4}_&Eͦp؝›\:2HZMJ%*c8/0$4Ӗ_=$}҃VQZ5풾S1_}{U#_r=[OcS uqrsZҌ\]I:Ҋ /e|B}UgТ &>% L>ܰ_Bd*F* دi]dԫz`t09Y%ovwE; rT !0!U`Cd_ВنP$[GQ֑{c DZPwϜ%inaz}ϗc~j;LO@JͣfQ54/ 9mUU;syz\(B/>i|Tj mII *]91_7^~IjdyB_ zć[cjfw筲σң]j']^|Gb6,%( ~1S-GrRҮ]>Umm(peoY%n|U.N*iEl!yy+nfr:9~yzJQ(Ba6 kݿd.>,RʉBo+oW*Tp.A?5-)Y t|JxQ]G|N3z}]K9|wjZx?iA`yG§'%{a'!$0/S 5GU ), Bq_?\ ᅩ^Z>2);V?>_mJ_1293007182$  FP"ںP"ں1Table2CompObj hObjInfo  i8@8 NormalCJ_HaJmH sH tH >@> Heading 1$@&5CJ\mHsH<A@< Default Paragraph Font!Ib{!Ib{  @V )*@QRjk000 @0 @0@0 @00 @0 @0 @0 @00BB@/X2$SFEᯪ:7V b$ ynѤ.. @* (  B  3 AN  3  N  3  N  3  N  3  N  3    BCDELF&-)gj~tyyv#;l -@      `  B8C\DE4F ` "2821@*NJO^\` @    `B S  ?hk  t_  tp tx$  txhtxht tmMt "(*@JQRjk "(*?JPRik@,(`UnknownGz Times New Roman5Symbol3& z Arial"hJѦJѦ!8~0S2QJBezicJBezicObjectPool"P"ںP"ںWordDocument<\SummaryInformation(!#DocumentSummaryInformation87 BbjbjUU \7|7| l ( D @@@@@    $  B     @@   ^@@  @ @4 P†Hr"e ^  0D \ \  O uvan CENP-E mitoza Heterozigot za CENP-E mitoza Diploidne stanice keri Diploidne stanice keri Aneuploidne stanice keri .DRB5CJ\mHsH CJmHsHjCJUmHnHsH u.RT<>@B@,1hN N!8"8#$% n& ynѤPNG  IHDRfMsRGBIDATx^|& =mHIwpUb%AȤuְn>iu!Ja3X/7ן02a-i+/M";1*f䤼o'֦kq/%{c[?CT]Uy{<9]V}jI&ښdjI&@Jԣ&jXL5+YӏjIf%k:P@M5 dy=wM5 $pJ@Z]ooÚ\D$P@M8F*% +ކhjo^@M5 @DK5,Y.D (E))5P$:(#So K^,̥#LdM3OC"92aڲUM5 \}.eԱiZEM)"f KL*/Y\OC5^4UCdjd }ji4z5 $p HK^.a $P" s |GB4H̹\TFzgl:o ܕ};c,J39˴RO 4%OS*'64W- ^>jdMOC狗s1U\'t/'$q<`@CϏzzo;<?84?8~ewdόLjz~ Nt=#!w[po[?G5wI&E$? qk!muzih01Ʊ聃0།"}eߚݽ+w0:GI¨>d}N||xr0[х+mm{;{SC1{B͡4]wzȩI#;|׎}O쯩`M5 \Xm^:׷ R-[k`;pvwcɃDWλvyQΎ}O S;4㾎}8Qo@ ~W5WaI>}x7ݻ߉xv(2%'ԹOcm$@4w $L tA,>`Жd'=t5G7`6amycspa@\7w7_|^/XkCX`_۶n5p˰d$VoWXV³^;0{}Z&DT" / R%/~~slƦCo>bSccI s:\ :ὢ+U\L?\|y)H惣 -PS˵ߊ?ܾEЧkvDxmh>;6v}ާN'[>W"[l⭔ M䁞;pm9o9[?6cΙ^x߿9ڂc*@w_zڽ[= M=9sltf['` ]RJ$ q#ndJ(Fr*L Š\ UTϊ )E W< 8S#uF X ֿڦ~a$?2MRb7Bw 82Pvۺnv-d!ū$FJeCtƭd \m^z} DWB*z/ ݃yjT9BKT/y;9]JMrβԫhUqfZwnKOiA}-aDvhxww*Kb3Hu?څ:υiW5/(3+Qܳ`Yټz rO︯z!(8A]ک{wEI]k##:QY5 s^K^>g͚?7":a@yUJu}C@0\?|4Ķ3K𘗶~xVyQ,DZT5ԸLl}^lN?׌PK%d>boߡ)sS] .[цD5R:U࿋wE9 ֵw,_/Y/Y[I&_K>mEʜ3f x =aH}q ]X<%dށ=+Dv9D*;DDK]oE 1v楎]y]w[{Ҧxb*6fzVo10{F߄pjU2 Bi(W1tOf.-6Zw[&r8m<~K 0q7A3c5.!h}4\ϊɟGǤ)eXh.Wҷymi=yjXx%K&Ǔ;f)Bー.cA&f QEY3Ȅ!k6C 幜$oQ*=17;,Q )l @n+vOd*"V<+`P(.*Dk ZF萐+pIf3LzQBr+2r?)KllRHg3 ~Mm 팦%' ٜ-Lr& Y&%ÀM ab5&RQ f̙S %itHh6fr mhh!_}gqG*p6rJ\YR$΢u(ҁg&H Osp xz/]@k=3df/I^,j[I,z;dȦ-Ht:D7?76-܀GM&+NnCY(Hlkkf;֥X봍QB+,ScY}2Bߋ G;Sj<LvX`!B>nh5jܔ^PףKl["/FNEdžqlB>tVs ГP,5"޻*iäd"znTJsZ)jzHlAF{Nf\I![Az>;HmTtE=ofLؔE"0~&=6z,dXIL%Ūyݐ:FmiMb 0-5&jmHkTm;񙶱%U%3G4nĶDCM!2 eR'M]񂩌tt׃ HsQo q;n LەV>#m/dDJ4TN6_N&n}X(?,ippGK Ь9r$_E> C5խmyP|cFדI\%!X*z `[E=\d"" b1Di;@e/`j `E7Eix!eA'PA-pz0jrm.Rye4F7\ӀDG6)veDt35WU?#{hx,wÕl,9=:rd U3PuȥS8 7@q/L]NZYZ=\}-T5͜fXc)_/Ø6ֆ۞CTV)F=W䆛_},nR}u,Ts[\DSXH!8R~ps(KD`9;uG;S ,_暉uR6֠ =UN^T.eK6M<[SyIbH# Ck-K}L{o\&m)H\v2}c{V7PPm xx}Ͻ<2h]}⛸1LsZn8`V@~Resg4Ąr},{"7n7onj^X7@# )AcH (|Λ6ndt SȄIL-Jɪt0G/ͦw&4uםv)eu/n>qE<c}\(O+_|fFq^Ȋ&fuJB=!u_)mcЭca@0/ܸދ|_[#Txy_/ƠڹV"r]&RgLKRLOf1So'K ti:oJ|dӃh*h~hsMvQW~D~OP$#2cSG۷&sT>sr*@-YΦCONul Ř~GvL8Mg5ʿ2oϋ6'(O=kb]̺q<-*ZFGp H 4P)YN `$)d˨w`MVbV;ӕJ7w~6iee["x\＜m&12hw U蟬 ↭bZ]̓! -Gz!~7x.No 賵^gFGSP8Szg?s%ǃ AM{#Uäpߤ$}`/̒XDP&Qa%qEk1XEc:BPp5[{|Lj<+@B^l0+YwWv`pC--ޝMt\TVȾ4 WESN`l,7?T`T&-|E!#J>ևes2t?1X-o/N5HQȽ-:}d#q7'y5w[.!ߎmW]V!['e15E #vPl%HF(L 2̙7@Rn]u'>^חѝԵc!q͢UxX/ٽ Rp #푸#Kʋz\ѥ?6sm KJC3틶{J2p}Zcpe%\$yF9b'^ {so׉,Rr (@1r^Q֦Xw`0 yV==ԣ}464 /5ի2و1aXƱC@|_H/ĞPDJ+n38afxw%wuvD/tTWCSƑ4SR}udUTmZT*`KVT9?k;eu7Cڪ@X%_eyI74N{1F,%9-Ǜ41(DX }SP|)K3Kw(DW ?bS/Xi@DZQ|<( ƒ6r%ނ*O M >p"B4;/Qsh% 61/ω#V4gI,ɑ ]m1tM}tɁ1m ID-<0d;uuλۺ?U fA* uqrCa跇9#`C\t^L" Xb4<RaFs9HNM]խh@ۻzJNzriRVn.fl9?H6nm YFoIz"foƹ;|A?\h8|087X[O^R9u7c7-@hHT| %{KrG +dCK ]L-9dC~gȷ{C$K 43ZQMꆫ^y YS̰*"ż3{r(P{A(h;B'cۢ#$Q,m+z/%9 NB%jsmѓ=K+\\jܜ2u~aj&cԩ6Y(-BG&75];F^*  bEA2RBF; #'=j?5#ܡ'{W":q&]Ȏ JNM >qpowR~Wf٘}g󶬔wZv_q$U/ M k;Y&BɎ;;+" ˖]̱WaA:Z!e"t.isስ ;S$z:# x_KDɌ ;rlpY$^WE_~EH=a+YT)mN8 N~t7 g8:Fͫ1ʖhŪ J<,4qjlQ6#a"K91g|OE/K%gN JI^Y/4et}g9ǺfcSOytg/aqe۶V~1i0#A1=/DiG4C}όFs85 2+ЁRV]{gH \FwcՋ6Q:M#+?߳ZJ GZv&.k/=)dY`)L+W*eh@KPՠbum<)Q`PD\2nK$o1E׻bi_]~`C镮,<,~*Hf"c\Q=WE.t"/74Ia2/ʉ;2+grHj>Ҿ5f̂9.:]\3k>ųw!btr5?^Q`  wۋY#I%N|(gfdUFdz!kImWLKE ns6g7qx7Z"FA+mtV^Ě01mZ8+R("\Ҽ ZߧkaF#>/|xj2yyY˅@J=eu[-~œr+$%Mz{KdL%#CX5Tbjj e' aj^m/y?JXcwo!;G#hTާU }xhRE!WvsBEpXD:"<#,}QJ/JfIKMΏ9{tfvj7fMdy/0>$1>ij ~](=(}m-L@IH-7Zple;Wh8=cgBbY~iX8bsS#[Nx֋^̍&f򱍱bٝ]b'1"m$LAi\tK>y rJ=6\X#%VtI8["޵u{fʠTCi}w6EVޙShxLE딵-Ht?dI蚐<1`T{-JDn S{Bn-Z  vd! Mׅe5NxFLmΎ'_zuJ%$^*7G7_VO) [GOx?}TK6UN{{ڴ)tH|5yTwWk{9 eDޜ;6(Ag1(9/nk;~ %agѐmɶ4MXcd(.Ǎnc~rL|]_@'wO⟉o=L*8ѝ,SR}eW'E!0;k R:Z>sʺ57_ `04?dž}q̮:ʜ@My7i412|=7O2߸Xi-)fle U$`2ykd9=/q-rX 05k\;<QI<)-@t}Fg`&dm2Uggԥ<ׯe2I_<[%[ drQʑ?˯gҳ2dW'72d컦S9nRӹ00, ?Sܯ9ذ6R6z1Iz3d^?M9غgz3h󯎷|AdKءIK)^Z)Ćk;^K2ŨFt*f6خ.dfķO@-Н]1햘zcj hʏ{u(QA[l7ϼ8X[ݷ 3\ӴX@>Z4?xKCt6lĦN/xqwWP7j4Z|7nJ<_$3\ 0ċP21lUs}f> Ozv x`}?]\~6}Jӳ?=z穘.Z!ʱKJa/s (?w__m߆am^0jXP Cߥ}`:Uj#\Ҿr2y|"; ~YiapTZpKǎ4~EBDS8r dcI!'o]0"d9"5p.R',ka2'|}Jce`8d߇Ə46~"Uzqd$ ЕnOΕ|Be&/g$A{Gߌ4 /G`IEd=YkLqr?H5x^$)WE{.%1cI`SJ2m ~ɘ]o֚i 2PwEp ϫQeMbn՛&aAPG3%n}nj=0Tj'}@"P ;%s1,FDl<4c)7_W!ȜE]Kz+Lp/ڿ>{'߬i6e tv˼PWƍI43FvrqO~aP P2W X ^_S.R HY?xsu;t**7EXϧ'7s?Dp_#?J'[c_R4nc"9ld&fvML L滳eeXU$41n!,bIEEj^ ]H7kvfKV6"ehT&Cd(LqjX6*Z<Q޸ {|W|S|%'H`3|_W ýtv;{ݩJe˩UÒ8u s.,k庲F&H򕸒r'4(R2Z(tRhC;:UFr߻6cn I{ñ!}ފǯqQ`am%)$V(+}ʤ;>h!掶Pчj?٫rb3Yw*V^gUNGxe"m28&e 7['g1yʈ*vdsNjQw!giO/KɆ^Rqۢqu9mkMK/1ؑ?FTS}u-9*e2JL_JRSqm''kk`6jvQ ]mnSrR]_1PJyLkMm<&sDŒ2^( sX2 CkvS)$gA2vf.lTUx4oPNhrbԟ8CngQ'$uC T[C}DcEp) ?~ L螐myBh5$et=DD.%@s(2u5DC<@IJ"kK뮇8Zdۖds*Q݆GVey$8HQSS5jv(ZKh!˯#:[zFSVT%/)t7&VW+1;4F[O\;t72_Ꭱ fll(Rm{ ו=˥i ,[*8;%l)Xrٖ,#!3Qb[>:҉H^2Lh]IS.}RnY_/t p"qbI R7hl!݌ |Vřُ863??U,2yd%*0YF{O/%tV[Cz>ף3]`ػ$vL`k{pGǃpQ[9i[nP}^F(4lYUNTGFKKv㰊1M<+;ctBz:̡آXr\V0cDR\.Kb>.#۹:L[kqe\|UtwlM2qQ2,iV$PCb&ϭ'8¸WC͕z5bZq 6st6~@ЖɱR I[r%LW>.$+ټ(]3ְ5ic*2S%s1lG$%YBMr/* krH[|5w7͟k 𒼗Bl`]==m+UbIW̜n77ƺPSeݨLR\980exI6ŌdH]$]Y%g߬.S1}vNe,dZXdwgo?KcϷiى%!GS<`<ɴaOž/%?u(uxjͧn x8bw5v컑kGO յ_R?"o^!jeP8nB-.oYhɛO?J$ *O">2M%XB e:? g<8AR*'Jw>I;\2%v'TX{Fwi x Jѝdf?ӄW.MYK*?\W!Rb'H\E4C'zY$4_1 G]:鴔5R"ٸc(d"b*DB·SͭY,G͞K2^r)/:fo"4g6{ϗC^8Ɵa7ToǓ-Xe#۳FfwǮCI"t%ozR& OS [_|on~t);ԇsQg?ni67}OʗŅi@ UåDߍ``afOiPWW6#+ow[oYl\kt&ni X}lʾJ7RZ)ɬW|Moi!( ;SX+Ss],gӛáƏ}\菣WBn-#4MsێweDGt2i"FhǴLߩ+m,qZqWBC*[ʂYwԝYĒ)EQ0[p%|TZ[[ը{e`7l*}h u@(`vʞX{}&E$9kCQ~>uSTzt,grgNj9=ϞЧ~,n/nj|rO)ב4wǒq_ďn J](f~m4IJR~/EZ|B2|W&uvǝIi96}90!٬dey6ұsғɟO?f #OFaE@Q$THbLI>)M\B\yk~kF!/4AmxXPCD2ߎGYecӟkۚQQ*&)rPAl{ !,z$6nByLfosbʏX 6`P.4oxs6y?T?Lf. U ihiՃwH4.grGґGX %顡ګCFqJRu(9U/Ǩ5l'UvY{]QYIMͪ\,*_4i#5=x$6 2oRiܮSaXccdqnd%LH.Ẓqe/Havt#o(`) '/q=)_Gkb ͩԓT}9;ĉ*SebL Ye?;y$qQ5U;Hi -ZYbJ=qvx-RxmBM~)H'BQx([J+ɹiƭ&; ʱ׏f*[Ga Q.Tkװu ͿA&T1|Eԝ=LH;C Rk;nOI뷿|o$~OHn{0=ͮ=:ǒXV+_BT^MknVDJ!M'zdL$R], z%0JgLG3jAE.v2w+\o$;fDhHTfl#PA{';b>PR%I%/ГC޴/Lܻs^)ъ踧 E.Pbjb`u7NJaxIR;dnPV yKj!-kB}nb*ݮyA\-N?xT* _5L%#3lE~'=ꨲ< άFYXmjf&hPh=W#HJ,ʯ%7Λ!tcvܨڤ&3;HP.MۊaτݛT﫣ZS["WFtS 젷szo+mY{f_~=OZ)lRfj%y c1]޿vBO5c'æit=[ owIqR&˶+;K=wFlch #%n-Ӱ9."/Tt 塉wK3hsxe#5ΠMhwO@%w(ܳ8C⭈kcs3fE C@e4ij&{XS8>?eҹقz]ȕt$I׹3,ZF}=}l]ObBמĘ}Oo4"Mдõv:'+Kؾ5 hގ-Cc'`jbxlݲRg(+B!!j@eu0Py;I\hɿ,,fYn]unq[mЊ̓ n|GncL o$qRl>nL5(glڮ7۟lbǺj:62uv%.~2xw62zOݹ^!J7XڅPՏq0<n[[ѥ;BNt;k򦽢ͣG9D4ϢtyTWbǾGx^-Ƀ(XyԩGc=rY-زd%ַHs*kW%/i3|DRK1Ba jvIVcchv-vU;0G>xeۙyFbah=,r%fy(ÒՀ- )#aLgG e(r]l"Nz|1B PV @z2 ,=w^;FlkMœxnR}lݼ|zK f/>SA6|q/%b'B;uҜ}>t%3&- 8,dm$8լSs3~(҇FYR8i+G{LHPS2:D͘rD(mr6d-HRJ[~>l {y>txCJnc 7bVfprݙ6\X쳌:hC&0t!D< ]s{CA+%,gi5$%^Ƶ_8zz-̿ڍ E:P$oó_wajI+n:+i?H(bk$S1u(9U (gr?n2ev75͡ƅP9!GlF♿.CFͷ ies<(d 4zϪ}Ty#7~b}DLmKzFbB*EqW^C6)i33ƛ?$w.~e{-{w5.JCQR?>Zd`}BߨBD *HF17ky VSM󧚰d}̯POHe^*o/3?ޮ>+;̧9iw/ԫ>IŝѬ؏o5OLQ=TLL"0T$#G\Zj&? &o.&) 3!oL>ꁉe\{p/|L=Ȫm^]Rʫ6&CY!8b՛41"VHMM17_JS ' ?9J&H"+l%y 7~An|2,Eg`Ivw:3[C{v;wJyg(pp ?v 2E:˵e]RS*t!V",ՁLo%EE*Ą&R0Ҵ$TǶHUgx8z>\B[xs'Xsob *^. mIB VQȤ;!8za}&2}A^FTB祾 8,j& zsx:9NΓ@M!4hX9#5wni wj&08=ynnt=O4}ݗ*9_B(Cs(Evᒞ0TOE$%?eiWBw-ei_hk=5?Z 9rQq2 vo~ff""r\0n+'ځ.'G? R}'?qfDLJퟏܻWWOHʅ\ϣۣoԚo#>\"["eŽ 2H _0tI #8}8q9w/BTd Ie^X~]AYBIt؛wn\+$U8a6޸mgXvlxxK}T -:O@M4} [P%go#ʲiamLMVﭷ6PNsy6r_ G7߲ϥcS%륶7+WOby.bHQ01+Gɋl!끎ѱD,\"ɎƢaOW&in)2sw*+`4׳(h3n岶Se7ALtSsgՁi1p핑hLJEk@"s4۷gF:p7;2|_lKӵYٱ~t`YǑ%n^gɘ嘹,^ҕVȥ0Z0izw%IzwTrG)(]aeR +=w,*k@=(4MVr4gS~F^s>Hd!>QxҨB8#˝j#>9{fԱ83O3:B > T;ou ɇƔП9F%f|8JpFnBeBk)"֮n~B}?&&}hV\bnnGtS=bħ['mʅH0M<|WqrM2cg;l?XQluz70CCBo̚(H! Lv7~+pm2 gwcJ:/yd%TkJLQ#H&g !Zp,K 2֢֡Q|XxgM9rU[G+$$0ݚ'Mxy^,(-.+ڸ0ffr/Z(tgu&VvB+wK؋fi,Yml&s30CSw>#!:Kk?Ù">ԥ!idtSa,I;q%f2v' +#['a2tߌ$w^cYe.I_mfkZu3[]9r=o]~n+ZeoۅUJ;< .Wu,loCh9x SIB@b#kY}cw3kpr=Ⱦ5_yBq8ˮL8c_q=3hjpZ+SzgΏ?8uv֮N<=gfdE/IU.R 6/yXҲ,x;~y&kӃ0^]̛̊q,>`q7?teo׃Dz<y2pD0[ 8L`i};øWYٰmcqvsxgQ mCۅwd3- .#]}O쯙Țj$:(#3ǒ땔Gdv<i ƴ17knu>4|}|;zaȌ\5Pz뉵ENIv?MaP B͸ˣϯ^%pwaLJwdSygx"[t'λkw^E:^Xj]I`%g%\$5W010Xwxࡑz?3:s["ׅf;hh[K ׷0mF٩grW?B /0gZ[G^k5 m),'37ٱT?npyJ7~ UO$P""cI&fݣhU&  8@A|]hko?P^Ν_wׅ>Äſ3o\r*!A~h'h獿4ܷg۶  F7݊Uhq.2[\dmn^n,#\u2묽-mf"{(GX$P%{ŏ|?n3~/`+`$-MkϮ]c[@hi vIw{[W4ƻm_tCkw xlCSk!4.)n- eM5 \(0%Wu+]vX ('XT@M$pq ۰fnw.9&5 $PiJV_6s$P@MI`ŹH7yd {$P@MV<ܛӄ5&jX- 6G5,YsdjIࢗ@pZjYvfGjIKְXM5 $jd $P@MHK /n:PkM.9o/ܭv͙I*E1=$Em%{̞Я -⩮*])u3<ysk7?[9V<Ú@+s7Hڔ4Ld};&%K?[+/j:2_'frIf&tzx \E?}2T:}P9xJVףՒȝqIUKoX֕f}eJ*JKCZyS i st 8ʱ#!v%Π::?sq+مSKO]Iwϟts{ Ȯ`ZYJuh_>y+ V|Wڦ"@7Q_3A-T.i? [K*O'ߊ뭬OǸ5Rw_l}wy"7;ϚſyP*tU|Ϝoa[Nq9k[$Qp梞6.Ar#5Jx ]uGPޜ?9Nm5-lO;8/A?_Ldx{-QWzT8qW0aOGMRܜW@{A-TB.)t w.Z}_F *j^W%OQUAGh8o[b"vу8W}l-ŝ|kZ_D\r9${;y 5(yHWl rM|'>o,oJƨΘŮj뜢l30Ȑ-1+'غow/Pz4o#ﯡFQWk~3q_G{9JDC1X2_׳dԠg;{a]g.k4vQ;߇m @¼ ꨶDP?tC3kW<GwB%J }H{_ȭKBqW{j`۷Ǵ VPoW#d1\?L?03kCٕ-vTYy/-v=a0v|VyLP]SX&6A~V Gvf$΄噋[.$EU5J{_8߶5Ѿ^.o $$abx_WܟsU Q9/t3@z_fBg[11x%0M$ۣ4Ǜ\9G;xsve2/A/IJ)+ž6X\ soCZǪ_y&f׻\Jv1vr~iO,LUc^͏*sMp_ ;tϪ?.xL*Vw ߮}P5a3?@];lkfn#Վ\_ ҷ6kI` `&fwc:i]q%xZKS/$2ҠVE&eH`/BҜcLa Ѐ֦̚H of\G_c1@r{6չy êuKTT_(hc K.29tdxG[; M;vw/`.Qu;nrXewǀ΋*skX3TZPm`iT3b]FϤh6QKaqCf"s#h8B/P668N{ڶsgKX[]~tlrBnAHcpWtȑm\xQsa䒇MM!BFEJo.lVOS bgk2(6tiTǶ1PMeXp<ѻ{`_o~F||؞lu!<ψM>q eU |FSF`8.Q`4 €U 7G6Ϗ tlf`FGp8֊a 8۲{ʱQ!!6Pom:DdX8cld",r 6[4o͡iw|SԳU{Vm#s#\RX*) Gn#SB4,6LSymXA3kX Kr9Tq;rm"]02g/sN#|Fȫ-ʩlY|h87:akztWiLA9dYnq~HN67c8e%lxN%2:?hojԠQ޵@9#OapM0ȳ̄2;>kOt~*uy Nu)b1?_(k}MM}_@`C \ אLqM>C|ܛ?9p_RA4֣uL,XEVȊ(7>jSi[\z ;|JR4HҸɄo,=:}\"9܌S`:4"9kY)JT=VB7" fͽo;{bO]o>&=薇ɜiZ-1M<} d:;Smn:<2K}[77‹4j\lKkʲ2/i8ʑ t}#jhXm$1mcjџ{ _B3j{USLsxtSӇ7ZvXlH.ıSwvʥӇľ;@ITӍ͹u65&|>gU1]7EHj(mP%2׻gX;fоt羫P';Lϲ2,6b9J9+]㏆9esqcQrx`8֊„wtkWrQPtX[ޡ[B<w7vYϹղxI29%zfk:Tg2#j(ssDvtT(7Sxzm4Ϸ8Ux;!ܰ)h Q~TpF^O>;s+H֦XuN,'cmVv6xKb{r<|^b t]8 c|bsw<+;\OEܜ{A`5rx2i fBo^HB%c/0sqX~3t ޭ2 Z(saT]gߑqqi#| ,YȌe1E\)v@̪ z<7O JPE[]xwvbJXz]\|b(g\9#ÌM'm?O~_j&3!^/xኰϾ65?y2[ev]PǏ$'I4%\hll ]^QwW,Ye[?ΌG_NY>8ߛ,mоdhMl{}#WD)r E-7!-C/j{q:uv%/Ry--"#??Ш5 8滳x bWH \H`PJN½-U= g̈ sE @@Df*%M ĿpF rk$GC5%DNyȍK$O}/.uR{RLz~mYfow+(4ƚh#)WX,ޤF7mmm(h^GӂWX"`y.[wfl~W+{xNdl#"y܌?v1(K4opBqAeusPq6;XS\^QO76UZKJOu꧵-w5iir6 z`+L\uMz"ow. %xC` aOΖ އ^O& U&#+iߩmd0Y{`ӪH&47S}/eq)%r}SzhxSS&Mcz>ðARWEpEyI͕ȹtv_N10M#3*3p$#YIeme^7NPIj/>.u+cZXwFD$84+<vim* _}ݲ1}D_HI6.ܱ9Lx&͜2+E :kG#u՗\yNd\6f4rӹλݚuIZRoD\5 sS9As Hioy s跶KLQұn n :4|vpW{> sI:oFG]w )Llo5 9\8ś;-k=>; +)H8Tv.#lPw21DZ?B|UT=C3Sqc,{?t_reذOw%CpE0fE)rK"ֻ0K)(WfemڲbxAp7-P+#s⡝WJiSv[\Db"߅J8 _&Қ3fzV"m9S\X{I!maSIRM2" &_\VYA^3 []\\P׃a],ƳMȢhEYxKF):.%%g25HvSHeQMGz0u 8 \+3mqωk-VZ6I|vա{HHCr؞oۣGz 3Ē"\~,ffb,4F,,,A+˰[V>7-}ʛL} A [غsU^ڎ#\LA!X:V^'&u|rhP8ȑȴA|dYg'RrcOgƌ2Z(CWRlUe2TFX<&l˴k_l@Hj>/Z*9"c9gg#MӶ-jc tvU /2E!&+r M||Qv+yf̕ L#_m䀦:u/sJl]uaP$YeaQЋ@@e5H6Շ̬y_eaCqu%U3&aBנ2P+VGRĤRO&t=;߱-m%k@@λcA5k+ӟ"/]^63oM={(A"Pمr(\7:c"}~l26uDF}]jA87X&qN#/.KVoVH~Y7:ȓSKZ`a%Yy_2ul#&] ʺKw뺧c$=VjK9T2|ZMI, _xCٛ8xfMk}+AZKjp#ќ{49+sŻ qlcUEmh@ lr,0j>7HSVE{ğYt0mmA_ƱR{C]d1v2ۈ"nbk/8A #8ơwv9j ~l'^ SST9bxQ~/`U cmѫھwh綸]dFV3[^Tz8G R5IF[c),(@ )C6B YHKSZ$+H'%-73 0e]:ϕhoĸ%6Y[Y p rqБ޴u?CxivƑ0L +-'ԹWޢV"K+ \)DFhoX)yWx{yW䘬M41S>g1ݝ!Q]Ss Dbݢu)pdmzsk\(_wAHo2Vr}^3^/͜Zc'2{ nH v[-]f|;yp8g$f8S)a.*'X ~(&WpvL[PљI^rV3LOzXkk:!I[9eҘ'M󄩡⁛g,,^Bh#?biLp! ,4=Gec)9;:SFJP9џ ؍:z*٠_C3Zgʼ= Csm+V8eW:I'5vw.&7/+Œ:J!| y˜aߴ()qM5r__ 1a {k`;oG| ,KhK,1O=6+MtzhGd[LCCdO_fO?M5ͬtR! nKsFEGN:2W(+V~y/HE95P'ixKmpYiKX.#+;l~g7L'qăyLX/j#J=aғS6]S\jҀAN6J=r^pN6jf}r(93XQNr_8>r$s$ZCi1$|IC9SCe2B|n̜jz`wBo` &ޟNJhE$_tc9h84t߀j溶aH&)"|fYںꌡ5<ٍ.[Α1i;UC+ݙMZ"ϺR/ Ε̆5n^D2.,Oz@FXWC!-C*ՏBJum]x/xʅ9β{j $3tdF6#FsoIVEPeҌG*ǔXen' %爳<tM(c{= % 7WQdP"Rkrޓ}>Wq.3IQ[C /p; 0ٽ3ҀdЌڸX{2,+̞k)cGl׹=nrlI3=٠r7ZM:ESU4o;vH'e"%\K^635X14}|q㲘 m= ,rMG7]ܷ`7qWg1+I%3/l#!#I+9Ƴ[nk,MW +ӓMm(9Ar{Lvԭ{L1=!u?o H#ܲ8s0VSbp_f33瀰W C30^)j"=h*֠P#Yي{s6J`J& >:aJBw7ۡJJBl~rc 3I "XNUu7^KPQ sjn*|Hmܤ:?‹Rb"Vrj%%H882fLq9pYUJ޳ɇ)"78k ^%Cxl^IG`H{<<ջoFivIHc!ÅxpQ1D MbI%#H68XFznk;sWvwZ78;gp6(X]rp-r-G:V;Ke e A8S&B)G7n-fq_q@,B޳#{p`Igwq+]mSS6Z_~G_=GrFi]ìy%]3VhZ)G2ѡ,H/&fQ2cfxtPU^\$;g,;f[ve/)9mK ɋ{$é\\C&Y+}}GYd٢\>RIj`ޡxk qZ]cS,&!nj#^qp&PtK`ωee̝z|*d/IȐ8_&6- $u2-A,ȧ !:r?KȐ)v%vw mPTՀmZ_^ݟ=埙&Y4o/h1.(#Z+hK2MJsN1͘ j<N5Ó(I ,[{,g<~b 9eMC)JlEv)]Kb%!%&lhfJr,yǧb=Al8-K:܈[p\z2F%z҇ƘD)c|qqeSb:abJENG\**7x S:O'rɻd , q[c {~lV<~R2bq$dbՎ ]L6B⼗exɕTeA6:c4ٝ6^cۊs/遝N\ݘY1n$/)P.͝dB+Y߀Q9d<:uXS|kg6Bt!#7J"ݱ]r`=]&N4;Xծʵjva}?p+.tGc[by/hB6+UE&Gb Y}.<( HslGw+˔UPtwY-Kʶ07g"׈7rd(WZ9;[[1#CuD4E9gq =dÄ>N7]f?ىnL?Os! SEyu<"ѝy1`|s2c fcO`A+ _c: =ӥg%| [V`~N2DB|iD" ܿ3>[o %aRƩʥD5 VOpp +()w  %FhPd^Y2Y9ځoS;AUk/SNK*/VZ*KReCgMT\ S|ךj}`l^RZ7ɺc"+ PFGߨ*gurQR'zHoN65sѢb̥o6~XL3<1Dԁf-o#gæFcqM7zcFܟvmbzkMBz06KB)/ %q;ٕig5n48CI۫L6+Y@ϳ\{[> .Oo0 @bU>M(q(j|0"Ct үv.EpWN-F61rҋ>cI(Fv/)@[w떉 m/_tGx\pνqc6}?=eorݨC'Tun~gǖ̠ =azl{`U~U/y((ThpP;r]15=!?W[D *<߮u{xIH9)Rrku˪I)=/8(Ip ޺P+ȸ+S 3J>qmb-ΣHC;i<R 'dmwfk7 ^/ˊҥp9ԒymiHBɟ)F5hREsU[[d-*mEڈvřY?#K`a3Grߘaɔ\wKRȌx=Xvqy 197SYUQXA[U Ȑi|g5XMn%)9[-x|#K7o°ay4%nz[:\oO]6 6ӮSY 6r|Pm>?$$Ԛ?)Z,ʤ~K u@^m{l W]9639ϯE8ȱ[f\E@vXtjr!۔+{Զ]״3Nsޯz%s4wp[SύM\J&~"˅p!*–@Bf0c3RUV}^HVK"Fk @˖.s#2ɃneZ{Nkb-JN1(F"VcUMrȐ|gfTRP'j9Yl(%>prƞoY}@{kS[v}bQrĕ6oD7"Ap][ԮSJsϓ#Xz#1%,re7C8J*OF+%'$6_ s;b[#=}Tnhc-{0GR%+胵'{K".ήLx$BzYDjuD d=h G4H'rj견 ?JvWo|Տk9j!jѵ͍|) bZQ^%":A.?Dq͚W-h~r{񱦄M2Yh5JI;2pN}= 2-|O4O4?\-u"Nl[w|C؞v|g;t$w.53l/mv]&ښNN7y_]oƏ^[PSK;)wP=-KswwJ|5\ғ3q`2?bVkLJ;[]n'2)R-ن_BnGOiJq)X:qۖKVlK2 XRSP6i2L6{yl TyR>mKtP~qvPw: xLf-Z%% pT:+kt;[z5O ޢi2%}=1`ɇvf)k~lg/ln4ߟ"2 *Vb76[Ɗak.5،>!_޵]ڏsc"esC 8ފKAeX1qnP5ʎ(,87#Q=@ʈẁv_*ZDMpok[\Ofr5™j^Rqݶpo^N?k83+>Oiwlo27iI|]E28Eهp%Xz(cr-)eQ6'TrIQ{ K./8Arʠu ʪoM `°?IkN:6~A6wm`B~>;2$|iڙY|_IY''/Sggw~E;u؁cV'Poj uu5~as{yԃJxj'ڍ-?z3햊xL\8Vu×D9p:/YxXB}+@blz}Bwմimo7g~>ZYR{+b!y$&**g{!jqsnS7?6-PoT#P߷֛|N8rZ\g,+[JxS%ߩ5%XŢz/銚{ D mxC*s^>RܲqGzѺbS':F?v/=Bv.J"+7FwHR$[Z冒 @}^3?=q:>, jKm4 Gv$Ad9%ޢNkUmk<q\b$D)?Pä3v䚹SH\,jYSY%䦍܁dE'pz x ma/㮄GQ3f ~H`iQm1[>GޫT P8 0\*[+ԗl{zmMk$J.ip+i] RkKGxXΣv}'Ѽ;hgЁѡi/w[htDx 㴗[9.9U,z fKpҹMkmŧc6h(q$պ-m va8H8{c̙8Te]BۈЯ jk^Bij H?ݽ'h xXc[^$OsԇVVvs)xWjsՙh#pWэA@)S$w9ﲲtjcxCݠ8v eh*b{sf%ކroy[N)K }B5ggm7-R7~;17zJyn h[c["H=_0 #xc[77nYq&vol 45_)kiVw ;+4}oFVD'ｷ]G+:y %O=}mAސ67w}.rgD{J%kcEx#Xn?ND ,cc)a#ʊ̥yFFׇgb'tS[o*ЁAS]FKj@dLE2~(S%GX2/ZrOs͟n^V_%;ŝE:@CCFV`:<~sC7S7R.Cb1LzUPd9_?tҥF˜Gm1Em+7|00FUPaX5!JgP.m".&F}&ԕ&яhyɽ!#'<=՛%-4G7 c# Νƒѹ[*rwD+3"8#ɾaؾdjS'o긒Т@N sW"SlDƬe_M(kZfu<XeD~R*CͤI@}#䠿~*oLZ% E#AQ2 ]a\qNF%pgCG-%1J~cdCz#{e^[, i!5ɷ*cl!=.Cq-s*3L+s]]XӸ1aoGXرR@L7hT m۷2TWϡzFW[ǔU8{:qymr(Ёm۩StR7cf>M漾Pk8d:~ԸAܬSbc'a("nkEZeRHjq8r͚)/ !\Hf]OGG ޽z % Jxg#SXUQOᘳ73INvz/z$om{5i;WeTJ8fѷnnM'`>lM[`Mr5Ug }񷒫"_3SZL#yEM+#+!Jo=~"LK4N4~&+іđDVWKrJ ޹ukm #W+Cb'jc٘8rKE2Id~ix2qݏ3 i)BC8)eq&Uay&-qfK DIlwn@l1#Gr" $2oy7٬ i+61?cSCP=s &wUѯѴjGEOJ#ۼ1%qܨ|>Ro8Hl{+@j>1uwb2pE ¼ *H63Y=@k#9̇edssFnD)>ŏ2ߡ \^$<9Jl!H\SpL$0)}]H\98%+ثY}v8^b'SY5D{{y*j !Gux%:ho4ģF8²*{>0md CQ̷Xxf03vX{a( CU'H̲ziÆhiw(L =0*P$ݫo"GQJKrDjtK|ವѨ i (,(6P(AﬡSfub3tc':(=x$~GHV%|%A/יw邨H URZޘI>5th};ʰ2%䫜Xyxy&F^ƍ͛?l69V.4qm9ñSW1oGbo^8 ^Gȑb*FaZl/=?a` {EZL(㩦4_Vˇ`[fV94if߹H $m ,lVD!fΓ A X}{޷xEnݺ{?V1S5Щɨxg=a|bdͷ7:nm^o}MĥBS&1'N\$%GY)ksfBX< uR%_VJW)[AoĤ^aeTtGb=]}M7uxrqs Xb#Rp}v~rCEuK.}f-hoj6eW7i-;Wul~1uAe,"%w۹/=}C_ #CxG>URoF6m~b`ae7Y %}p`=%z@ xš-/ !)92,YMlmnAQax"ހ-i\}Lsě/m(-$r9ہ2 .# ZGOBu&8I6~<`*Y >09U=WZbcJ($C48y9i^7g$ x( nӰ>A亹8#*ӶFcO#;xZb )eF^UI#9'nh2X`zryT5^Eиn>_PmxgZiļj1N&U쏬#ESk1|x5 >f xUMMQh3_En]7­UUY/xOP:FtH(51Hy:#$zǖyϝ/=[{68N*j --I1oq1\rj&=j2(u@|:nc1sm/>C#gRўsz5Jg )U,=Gu4g.[7kGnj kG@CWk_"Kd$7c(C}JSe#jyS4[tߛ2/)k(3~ePeǃecoDB'(S_TB ~U4~8;̡"M c;y1TOQ1pl_vQ9kff&%_^qcN]#1/i4CZ&6(:B%<{ʉO4J^zOie_ w x]FfTD1Z5Rf/ٌ1qgzyύ$3Qx ᨞ZCD2@%L$oMrѠT87oiufצLn.uDf(Ys6sO!|LVN;#1 ǒRڈ#JN2hZ Cd󰲍2V糋1崑quƨxMMld-^F{L=OnZ%VRxroo\/]raЋCy]YҡcNc\a&g)$<tGԋrVN[ɶnn*r,\GrC5/Nadn&j#}{vy)˂ gVP:Oa.&JehneՑZ#X0es^|+'Ҿ'##>""d= ,\-'×\ݱG!>11vxSU_MYU- Æv C7ps'y=:-'0<6RccIwg~t]Ǘd,qnPY6 GygE[ˆ!"щ+9A 13ca2pȑQaݏrkҬ!KZsF{vh-rr Pk B[YوbHFD":\<1T^m:;](CL!xf_ޯvT9}lJ ֱ\@XJXk;+IHh>SM>Ж{V,/Ǟ5Aq1kPkui&U΀/y(?-!$X$%iϧdX'}?A,[)}ßc(Moxe=5U}cyԌS[^lBC՞7{ׅZ^au}0 Uo@YYZǎ@}y8o/O q|BD XU+Ǔ_ڲ1bB#{w}\qY]FD<1Գ \{LM~AUȶXd+,U(şAbjf2)GRJh798B@Ol"8LJF۶d%()/Q*xVϵǒBb_"Jǘ<|MXk%tɰt=wnkSTp>dhzp<^0 a3(GDٱ }RϽNKIŞr(A021̙ɉ 4GPrbS^D cFHXΥaalmoey8 ,5n+& 1B|<+dת?{pM`C&A6"yj:}6bxe֜Ow[~?XArAO6x>9[V]4vl!kkl!۴n?\?4*1um_E|wv~"UqR %bTPR QPvnhvTFbAx,`St}*y$ G1m`Y[뼯?rdK#r,6M96he'M임khTׄAGckH+eMLIL K&Q!EU3fdnKkw9ﮎcoq% XEpk0rj.zziYT2S|er /gC\~[]$Z\nn16:^ręJ{\t0|vقq 9M(F`La<4׬\4*sQPCJ ䷭p#YK38L%o*d'u PwmlAԅ RH@1DҸMI"! !ծV=ٷ=sf\et㖎Ӄ^~W; -³o t7y6}O ᷔcoUO<$z&iv?nR0_O(n  2j%;=85y.2< }Eji8=SwvReЫc$y^bi;2O6Ŭ~mCƲU5%MD23;D$Q-}.~$3t4(pbuZ,8CO4^vqSޚ+|pzٮW<m /+3#V8!2aV(w ;B}D *M l藱uiP g0z8KUJߵA.۪cOf[bEу3eb]iJC6.qVySY-3T'S}*#JԲsPU15JxuFk奪@F)Q"; NxRYJl %eK3f_lG20nrgA>W?]:I5fħP$Z[2QfmggCϨ*}z2WP+y'u\Csl[;ڨ{7|+eЦH !Mգ"ltOYdUp0K-#mcET2)~{a3\r HC^c8wEk ~p/YG*;kqk6HY@>C%.Y Az@<_K_C 4O@o ],B ty 4tICDd+]V%.D!sn%'30 %K 6!]rtI@% "> ]G oO(tI @`% Kj rKv'K]tI@,G_J(@Pd%tI@mKPE]>PtjEP -mt$}\IENDB`Oh+'0d   , 8DLT\ssJBezicBezBezNormalJBezic2ezMicrosoft Word 9.0@G@B(Hr@pHr՜.+,0 hp   Mefstl  TitleM-^>OLO}𡩏< Nx.[%jtV{ 3fIۂo/ æU|g{oOLᵩ_B|}~S0;_ CB?={wN> z 5SU ||c|J|F Ug O᳎ෟ=~o$/|RGZ>w?#^Y79|D+ŸC—~D>% kV_[/Qצ~ęo=7?i6f^pzܧ?ӱxԸ+K7~+?.?~ ]}~gfK=[oe}Sdz]˸j/~^Bb^>$k_>5_è=>~7SGGTS D4D *~^.O6%!/Kgo < MLmϦEx>05a >+~ qNQ 3-" wx[?>_.>?{(|j!jav@o ?8Gw;buOEP]8>O/L~q7_ /N@|z/~v hsӿ= |(G;~-|{ w;.>_ O r/6>H"/~\o tE?GӋ|~mG8y|>>CM>!}~$nKhhO9??vDF0KٗՑ$^{LөXQ;5=_LSIo|cOw ÿ? OSx7{8巍S?淿/~]ljM7?_zD~&=~WO/SOG:oȕ))U~C35'_N5Ki毦O׿ߠfO5g+?xrr?/_0|K.Neycb^^KR;ɕ[D'_Ur<%\r<$\rIOr%\r<%'\r%Or%\r~K.I.$K.xI.󓜟K.9xKOr%'K.9K.$\r%Ǔ\rI.9?%\r$W2\rIOr%O~x2(Hҹ$2KyK'9|SiJr|%'9? [\r<$ǓoAz.ʀ9?.2ߡS |1NBp1? ȇOIH}{'$wL9O?gD閲ژms$ǓGb 3~8> SAM~1RMŊ@HǨcm(*[f"9Ǝ&( w&̜L|飼!_If b3,jnc,6{{}6r~=?OFkd"OB#1/?abN!H\~S2Q"86&2ɐ=㾄&6pn|8AKr~MB_Ofx2qϵҲ6FF2Q%ǓONqҗCtO}y椤mxlf 3Sĉ1(pK׾t EȼO&zPi_ĺp5x0Wu56~³q~VZ^YڑJ8o aHt_ݗ@G5II3l<܉x4nyj۴׬6_l) ^[|З(oi.dmPv i[֩p vE8ߑj{qbuESc7EtBu<0$A҆")aƩcp,$ &!IĐA]Ƒ-ɠ[ر\MUjƉ}x2e:b#I4ACYmh9B :Hu[7E\ymd"/9 O;A }_ZWJzQ1}CZW}8wwvq~ IfЗjm¦ fm‰ބMPZ:5?RV7yq}Qlnj_,YT&$! s4<ʎ>B?uT'`0d_exu4wQ ~Z޲t'ٌYn y"ƙ,3s/b&lj~v뇦Lg*}9ĘaD摀dccЋ/ܘʴ&F/Mh#&0~>$cKO>bJ:A 8 /TƷ xɾ/1⬳3mr?BBPzwcW( HI4q>quHbԉv`6 ]:Lu0T3SEi,^!b"=Қ ;} 6d,Wc|Jz?LYz˃I ȗ*sϱwD#͌#qY#. ,S5<lyiCf9|bs2{K:;E0<ME $@@a&2,!}KL'64E F9T`yJT)@4 }{oɈ^HG$R;43GvYt.13pAp [^Fp9щ;83~LyK* h!75-lϞ۟{<Uw0GDA#,+ToWvt(@x($+,dP#\LP d]EƓʇ8}>HqvqrM(-5Yڐ+Zoq]'"X}<I;Ɛ;Pvuin0,zZ5O6 Xwq?YNL@Vki M}Iڻ(B y<$,~,Ap`:RXk)!sJop4?7~bL8;"R%mt #TK-7nHuz</ew~$dr>cYN'6H8N ʦ,}ơ]*sP7'&\ _')fDc*kDx8Ү'Cx||7-1MNm0$KjROW:6ԏl\dN98sϺp$>x|ojxݶֱ/bdi`w.·y{S^껷+ Ʉ7LB!n{ڑ)ohe(=Cp׽ Yi]p/\-b&)@fIH[FUUmБcm< W鐜:?$$r$If$qcL-9ZnPn#y@p7,X5_!7䎸rm]~IlREfRrIxIfJw22a'SIҁuS$C9I}[w|]h^//Hݎ}8|3H X2*mFi0  fffֺ[,X<hVZ"H $Dg決!k c0 \xP}Ӳ]o⊋hCH&aPVR425)rQcVŤ >OBl>.SXzK6VtI+IEx7IcOX?mSѺ ,sѽ4&Uг{eϖmϑ+Hk6x` cmυ[3^h֟:aޒd@^:P'46gŒ?ίlkjo^YUdT2$V\˳re{v|9m׀U$LU,6RZjWmŒQzyC\Omת0Y?/Fto+Q%.dKoX@ Ҏ=7,eqm$ȩ v=rsggm׵u gzKnr}&R"Uć`&T^wC@ЗR~Ok;6Y37t.<#Jq'noH2c ?T~bJ} n#_Xh# 9ڗ7m@ªX ,퍆Ҕ` fS;6JϚ&LJx[T?SbD̬WlU慲3 JiY?M64lxr,Q"PZYB?|31 %㼲8Ŕ׋[^{jr O6B^`ݛ ?a"%/ 3&CΊGXFfdi7A^g^ ʕڟW9Kd4`GAIo5u ^JMC06LxG8{Y灼iG!UxٺΟ$S2[FYWL@YY( MHbM_͞ 'k'A7YgTF&w$d` DC|}w¼Ѡ0o! |AJ]j(4aU>6aॾ"L\I7;:{rn 6 4: RBOd&d{iӼxRѓ*`iC-| iYRpFݔncV[im(eH%Li?m9]!>е/"f)m{tU'#rNpa,et iM=H:T+x[UVhC2grm&qH ^LGyĆc*k אC)䌳Of0 멏meeڜ;`\SY9{=Q;εoZSQ.*~O%>~U>`<[X_ZCFnzZ*rX֨x!9Ym[X'{^6ĥ&p%Iq骞.>A4O8J̱mj%h W Oxfx0x ؐJ Օ~Ӎ/_?w&XKJ +—E.D+ ʺ W #QW4f*dƩ'SxX6iu$kI`ȗ)rn?bdO ]}B 8l7Y~uP2󘝽eK1RɰJPer}leAjYYn~P:]t>|' 'I^f.kz3jG[3 iXC82=,S@AyP$Ux+Ytu\.hOxR?== 4#^'7 啖5 ?3L鳼uN k_;0&c<43Bԧc*;"'x,1m߉+j0o%5fsrl^Ÿ1jp'|ւX'AGRROb`O3 'L>i57dž<@!Pj ɤ?y9"J~f!378sf$%5r&sK eiCޜR7DēRs~a,J~2yl~et殟FrNA7KO&֥Z@;nFnYŖQlO1%);mxI ;J|OF=EJx fE '];? `s0:Z),=KFBޜ~”¬r(7I[~j36LXJKTW$@73ݕKC\xr.=eanAPr*X+7j~R'tW\$kFb)C³.' hgA 줺7aQQ@T1Ȝx,F0 <è [r0L1&OR~'əi-Ƃtr,04Fn_4ZboySQ$Tw,KbhkI*'BZB;x:R΅#.*}BE㜴24OuH'zm~Ԍ>OSB֙ xF wִ~V y>_T$tD>A|2 IaE\0'OʗRP%K4Ƕ:c ž$$+DK(@r+#e y U$U'״ZW`''^u :to|ΣLBL3.OVp3ݬ,9-ޭч_9o4iһ?̽Csb{n-0w;DG[9x;~N_VZLV ?R#W$cdI4O>CWI'M&,\Hb;raHD~x쪌lC*3Ε[JrRm :ZƠsSZxtm1+  Hi|\0Z X[^s +A7ZY1?I0zCπ71g# f).C1gT,"NX}MpubNƓE]FY8d:ʎY`gaU %:,C38~ǕgrY&#")Ksڴ}jU2mcb0=Imh}U\JL$mFDJɥlfֹYtHf{$N,Jj'i v1ORX rw=uOBAEY%Ri+ۗnGVu۟$)idzz3tga!ӊKj0d?us'Om'^ֈ喽1emHY0Vq}PcKE@g"%\'uڗNE{KL ]w -o,pwi܃CZ%ZJt5AK3@ $W٫rlR#''k r~T7 ծ/Ԡ[P7UnyUh"B("D\H0^IK'sbT #x +ɝNR6\ZmJ} Ȩ܀pwq?b]8^*i J/9Ѿ,?iyNQ\Hr)dYO9wtUsi16xC+β\P{0jmp[lXw2vuy xAT'+u>řǾط8[+[pC %$hO^Ğ֡q;[ yi?9z?)/C/I')u]Hh@7 ?\D.r<9 wp.mз}obd5eH1#%̀_7BW>n׺iY <;0֛Qw:SI%JmK6 ck MR37ez;WN'KV~#Է2#.ͧun||JCO?w?d n{/'T5NV뢾: 4Ƨq1?lk''U'bN %U X:^? m(n}um/̟T2t;*[XMu_V2Eݴ[gJ/rOy]s jyj^cUU+ {kZi;*s.q0USO3-&q; Yڎfn+Un?YMJF#21ykʗ͟4 } ~m)`<-Ε|4 cTWW1^Je}ZTiP>wԡyE}X;ʟ-ugS*N7etS?;~ژIN&ET*-s0em5VRkj8H^fjӥv_cW-3cؚdk`z4wn T7MkU*6etn0[҉oplW\c ;}*UlʺS4ָ}#*L[-cr)(m8fTץ-xJKRn9I /(CRR}h{FuOQwdnv冸enJG j@HPnұb'/8 _ Ƒ<λ ]ͽ|B> F w=Rm)i#A;D/$D=S?=%Ԥơ OV ByK%~:^Zy)S)iʚM)F<xu6{~n$r%^XX*ۅ~+o8*FҦb59}G)-ѶU֛]rn2bkK:xK4I3+e5h+SUbS@+ڕ;NHY.^\30c"S]lQ13]?n$C*N} sNKןmM;y=$㱟W?}8^m+hzgE" VV.%[@n-kr 0q\e)JTNSj34ckBYI!@;~`LxbIe? 7%9 0]}ӂ'lMǾ +I^.Ho'_X}; Hܝ`d4cYT4| "_ $C$ঽ^,xuӑ j3ҏ!-*y>YW{=ETy ]{3b 5]SY j 1]tW[ٮL/T\{,xy7qOG]Oj2~_g~룥 řGa_czs>pΜ֪PYRSz`|5#YO羉 yS{8ToQo0jQN;?yC9H2RRL!P&qrq:seAK|<Ǔpxdyy`ɛh0:i4n[8" 0x<ܛ+)V< qB',5sqhh{F'5/֏JUFʾ~B3*o|u@~Yo/_m.Z HIT焏e',w ( -AP5N,oɧ0 $L{w.qس]mϵ/q|ƸۑׄqG1y^Mdѯ=F1̗.NCH6 9겥 8h.S3>BI0W} x U^{h*7Iɵe30; >2O8S0d>R6!*bPgߍ +ft}"x\M/>BO:^:ܩ{طYLaUj-ZTdynu&T&5V0Ӑ`r~*dzƱ 6#-Yr.Ba\<804 mg3'$Cu3KO':}6 t⎄NG v4Ly'Y\N'<&D6"Oic*K'f1-M\K}o'|7)u= nN'*h۪_H)y74\ӌ+]d25I]uZ!?0@IRzh{2C%Axf_|6{^[S}ӛ4#\DʺNI=їXjv;xfE\?M=s0'ҫ1eY 1 d6ǓO~i]J)=BuvJG8kl4Cs 0y.U7 ֖|@i'9Wrjryb(YFQy+?3Ac[G뭾j!Iʇ0B2 \"$i7`1v,ڎF.,Yae,ttߥ\+Ɣyd~3H+_Nq.O#0tbCdT:?J l"O~A\G*fBP~n,R)]Bk'\[7rDDN[G*dNfv87.O+Әһ x˻@W"lc#5I)רFTĦ]!Gɘ!jR^8lFUCЯ˝*9{hGSrS"v;WF !2R=_\- NT5WO.Mv-Y2|z7}1H?}o%f;#8-kǦS_>~T>@"7swYc/S3:I;Nk]BB7L8V5'3pL\~zܽ w.cԦC&u&[IxG3XgW 9 oIC;`6;xh} ߁ XNrׇ7ž"5g GRx}~K*w< 5qٲֆI۞|'2>\>g'7I'['󓜟,JQۨԱ(>2)t3ܸ< N%XD_pL }I o-ƓvOL 9KzE,9Dg`b;xڤA#x21h.bg<^^^1VL&$Ŝ4>KmRM^{9ҽ4HE1t*N$Fg8gd*ŇpbE,~KѬ7sx2ݟ9?ɢok:anR <55}Kh>n;woQn‚b0Zѹv؎1>*(ǘ|!%1;`H FCJXp>[җL3O极I'+ǐt9F:DƆ~3Sѷb[+7͔wI ]gVO_I?ɉYj3= Úco./Z~ݝBO%plĻ M>'xI.䒯$\rp<%\rI.K'K.9?%\r$\r%'K.9xK.wOJ>~ҕ2"˼#\r}IST_|N2Hd}'9_ |*ݧ|m 77-RVet_Zkoפ4OI'vKTK.9?YHWZ”"O+jTLiGںF%{ȟ)~ l|6NhKWk#'gSsĕ?^^l+“A!| 7"xLzFؐg_d EGRfKN9|6vR#S sK;!&i31dtMV% ɗ YQK}GOaૣ Nu6zFO>ն' -`$ ^2̼ĀM>U4`~, _Gx;f+ēӑ6zws'wnbyD:wW`OHֶgeLI[Ud ~l<#)NW|U«GzrÖ ~54Ü,"x'~$̉#IQqax` X^y֥k9Zl Xjqb.xo[l#60@KZYڑEۘn~hjlu8?&- =F. o}x}Ʃ <-Nl*LG& 뫇 (hMNIJ#LjSX@vs_񛹘gpqEy$ m#1gCM 1:sݛн 4v iJqd]3i>fy##yaI\v A i}і-]P5c]8u !9Ǔ/'!Hp5O:S[*3؇'oMy );:}盪g6KwAl3Ѥ0 ZG8 :Qvu=g1kާt=u\ g({:z0pE6~2?Kz1i2ر|b'}O0&pmߴ$Pe#/$Id4ƙQ;076' =i tڗnʽ0|~Cl4a#'u1S׾JěP8cn6c[Y)y~Ε_r 0olF;Q2f #LPqla6І gA@`1b &]6Nr78?GԔMPD"1-x.d؎Az^6F\+!G`:va1 ȵOM~bIE? wCPڌ]cǏh 2zK ,ʵ^y Fc'n0'-8p N?8| ~YL"d mB0/1zr_Վ<(97%6L}]"QaCd! U2Qo]e@}F}6aM)Nt0P|e^8Ǡ.cŶP #_yq/[Ւ#@|E1$4Uwu/C:,ZKۘKK`ZH΍=g[r~ IՈz3M%srGMk8kf]/O[tn(vH2$>hI̡~h[:dNW g'SچkB IJMySΜoʩC5$SaeM;I"Rx3u\9rlu@nZ&. 5$zx]Ւ;\c4J>Sg ӥf"Dv&M,v'2HY2&kȣT? $qMC|}X);Nk7Ά/B=DKbOV<*Z!'KkD7|+E[|u4 I.;AN $c`'[mlVe:2ؒ8M8'rw?}dHIIB-ڟbԦZUr~"Md$8$s$mduUJur}c7ڦL=>&δNS\JNOߐd{ճbնpGMwNC8a+H]:y`{*o'ǫ#"I:Hcښ1M7cW5O/JY'qAgox-6vEຢk=FK'&;OI\q\ӾECĄZ<[ D\vʃy`_C^=s ]KU< q8I~hW Ie: Y^# !~2m/([*m 4O]6d6YErd%ك:F4sΝiySS{U}'pi#y8q y*v6f$K2<9,Ҍyl)u3lޒZ,2oc#pջ7v e_; ga>wwۓCA,K{@104I@I'~g vJo:SݞG] u PJz낖+fo_ W󓔸#@|oMHN0x82)ޥR8`30 )TOb<-߁K`ԧs~4zxr]Wյ_g"=FT 6x2G$Al/Y{ ^>rE{OWny^|.JeIz$ɜ+qQmpmM&-8O:wڔ2_9'"||O]<^Wg<E7I y̕)~|L63嫖rF75r`՞^@,Fr|賺ץ& P}03XU Iim M!tJ9<9qڮA O&7zo tx$Z߽k[N˖PtM's_SD<)m0ffPie.ɽGVk{HI{r.0;dfAt;lJJ({\0Ui/e +#iBu+PZvqK+d<%O.Es0I[ jlYKYepNy'Dyꦑv狘 SR#ڶ @ڰ/:A=ƾ [e,BPg0q"dd,}6qh,h vUƔWƓrt }_wǘXړ WDG)9 UbbORoҢ t-;/" N_YOjB2Qt՘’ :?)%%"$Y/bgEף5}<^Rc W~4ҏ6!tV-+Bd Pw4-,2H21OV?@ݙRsΕWQUH[lj8_{a;OQw 3n:2}J_tCXN=stľ& #zy@;qTmKEΜLe8W .x8Iq9JNB3BNmzW%qǒ*Idc6ʌC!Ы('>:zp]$ '*3b g^Vۋ~`Vw;'ѕxLr<ŵgPVt|ƺGTiC8MY0DlYO'"~[Ǧ9l9)ED)-i;ֻ^ڕO+'|(KӍAC\nuXcJ{D~2] iҚ'Dg㖲{)K3 ֘@OkOK]0?{ЕܤeR/]Xٔ^cMUsbҾQ=qknݤH2N~킮2Yv9a,4R}j+spZ Z^г[u?*4ppu^9L&꜂)Uxwf'RZJ'0*Yxswx>G&~G;g" ~$~7sIK'< 'hϗE͏80[<^]0Ahv]E/̙LJe]zA=AZny(e$F}`fM'@<Ōβ-ҚZ? (<[uw?l~]r^q.[i;;3K[@AJٔk(8sBDqLE whüе[MS&ԁOB>i|#fKn3RDt8*1a]s~dhFm[Q5Ɠl?4n2wIȹ|'_TN-͟{H'[Zf[ -kyPKQ6dggZ[sk:}4bzzQ\KWmEP`Šl4bkEGms~hYn-bw@iMܜWZs}׹ iޒuLw!53jIJ9#\9n?ZdM5\iw=xrЪ g rcN,py@=Ľ2EQ^a*'~h0~E*JUkzf⎸]Jmo6=7JsS7Ox{d=֣8*<ԍ kn #Ts}ƅށ[&+x^Ku9~Aw(%!0%x4h. /SYu񓔙/$'pS2IJU:L#QTf܌p3f563G|vOFj<*#Y9!\ ^mYƑMwxj, =@S`!HEK$` 5oAK6~gFW|k;t}x/)A8[zһ=)+J .ƹ `|0omć)-1QwgنT&/!'yJJyݴd\v,LY`@9< :id OӺj8 '\?Vt/sޓfU,q~2~9k gSJCChQZӻ/?zGE˯huSn /ꉹƞ./ZS\EYTƭt{qNkYNn%凸h1 ֕ow6R%>큺PV3Y:,*һCD0OFXJ𤺯}9_O2ylבfS3Jk2T'#fQRS3ykđoJݔhZV'zd.(֟ Ek|9)h FK-*;iaFY_Of5ߖg#s"\Zjڿ;c;Im{SʆĞ~1? rK{rW?NgUz=~Ru![*'B~7<8cJS1$H}ҏ]MݐIN'p)pΊItR=ZzCIm'ZŠ=A6˴wbKW(!I"}陯P*O$e)17y>? &T>\wdWuv7! ev;GC2Yj ލ;d*d La$jX%bTF2*k5FbHKTt8 w鮮~n>gUQ~{3,TĖ[MQe%^U$ 88k܋O (ٝ >4A1P\TqE[˸TD<'kSN5^>XPLaNeLnAЀa۬/bϪaSfb1 .FmN3Ĩ鴰;uO,fRUvy1Vs`iiin^UVT&B%.2As'(j [Ó8a^jNz~R_ҋ|ʩO(s^?in8bx)PrZwbPqoēڼ ;]_3vdĖo_s^^ŗCHCo._FٝrM+Cֺݺ_s\Zm9(0j'CRe^37!5"O>=T\ o=?Za{[^K^=V=f76j'暡pK+l[3WxfwS$VߝuQ_q;͹Aw2)7qie/*to?4kKًAsY>Ʀo*$;іl{1wuО`2;ail \0KɌ{ԈPJ0n%Q)+!QYwkPfH-%}mIZKVpΆ]#<E};Fێt3*Danj@H{W^x=c/Z @UjwnDž: RY꫷}Y|oN0 0[77o0`$snY<}_M/Kzs,+O6 "l$ly+fYvFQwuW0k5x ZQ͏:sK#%-E\_ WF_[*i^c~8OVҒlIZ{8I9:[R62{ǔa Ikї9IoU,tQ|HIiU'G<D?x2NӾ%T{TFp-?3a)sw5띻:&%U\/䟌"IgO_3ZI?Fxv:!'JPDصɬ6q>{--\g}@6~0]sEwV %z]V-wG`JaNk åMfSv5(dlx%]1-Vxf[8HMcS\0JxvO!LhvMo쒅[nEJL[M`ЭLOmeCCGS.Er`߯DcÌ-Œ9ۢ~AbCo+c|u~]J@FTyVuR҄ٴ~D9wb+i j"1Rˀ$:יǓٯ-zy-)5I&X=ק1eracK.cjc2?vNR*d-rGuNIٖhq̛I_ԩJL6-sYuj$)EeNe<2\}|P*/wZzquIWcl44s+4E.uP%\󜆑q6~bda;8sy\w8no mI׆;Pىؕtf"/ODfqh/jUG$Wϻ7N0Uּ >,R6TnIGZ#q/Ζg~œQlyGC/f1xGPHScpwYfǓ,7P[2ZNү߫#o6ʹ6•=/eU0]-ǡ̫(=ʏ)1BijЫU!*>O:8u2:rE(A{^2#jhYA=HRTUJlSMu*b6ih~+,[(;^'nt-u+{qPd/sCM/_WƚE'MI:2S*Nx*ǸaZ7e)( _WB[Zێ GUjy˴֝IZ[:=$l0P#pѬ˜e{gѩҿ_.Bu a0d+ im(֣#B 8'ׂ̀ J[ptw*.䳅񴈷8FIr' P|eX[>¸0gz}8!OEM4'mk+FO}>܎frKxE!Pe&7ˇEx넔g)l;YW\J{CQuyddoz%%\hKkm*‾k3;y.L+ֆ7%7O^ 3 ƒBݲڕ~$lY@ YIZpRVYg(R.W(D_1Q[ 抁…5F4U?*äs)Fmѳ*^X[6Єm/>U)Vm9B7kȩRwD]O]9"/l<$~: 㖃 NHE ۓ+^QV[-WbAom| mv]nVȓ%Wc{QB!3’ؑyj`)j^/dNL9 R@[10Ъ T:mC7?\.&47SzyG mZmYS4 zG.{JCTtMgv'5g> = oJdzČw/˽ōG!Ol&y8aIG'5g>yx.d:QfӃ'OT,4nśq˒~jԩw%*OI,Y(;nvdh{q-p&rgʚ~_Y9-ĵxȥyۢ^^Ws2( `R[;fڻŒ&,uʬJ-Rґ< 4Jo//zv+ D 6j?."a=h!HCw>hx ๸g)pg=MbH{[`̷@OBQ+}&h"GGH/$k`k:KV;PBG/Ƈύ jߪ.R"Ige,} s>Dc":uvߍ$ gŠ m$ɣ@YNqR%V;>I~Q 2RUc߮Ծ5AI$Bm:>j$W6+e:'8A JX2VuM6\'}Ի.*وа 1RO} {Aol^lM8N[<|۩Ɠ ڕڷK#CqeeQ<TV)CJVhK86#/84{wC( MϢw gQ[xW[;4Q|Mp= 7MCʍp QI1$OXJ4-B}Bn94}{!<#kY܍ 3H/6$qMC.tg< 5(ӛX RJTe<ɒ%I B*c87CsxfR VC /< Ǒ)hH0y aZR-d8, A C=e<$~ld'1yñxRFN>u''q n;U)'e-uDO,D?@ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ[\]^_`abcdefghijklmnopqrstuvwxyz{|} i8@8 NormalCJ_HaJmH sH tH >@> Heading 1$@&5CJ\mHsH<A@< Default Paragraph Fonttt  @V?wx0000RRP/X2$Aqң{pn3 b$ܠ`K%h._4<. @ (  B  3 AH  #  N  3  B S  ?Lt tmt NPwz>?vz@pUnknownGz Times New Roman5Symbol3& z Arial"hJѦJѦ!8 ~0S2JBezicJBezicObjectPool'*v-ںv-ںWordDocumentjSummaryInformation()+DocumentSummaryInformation87 RbjbjUU j7|7|lZZZ,,,, 8 PPPPPY[[[[[[$ BZ{^YPP+YYYLRPZPYYYYYY8"ZYPD moGr,%4YY0YYYYn Mad 2 retrakcija mitotske tetraploidne aneuploidne hiperekspresija pukotine stanice keri stanice keri zaostali kromosom kromosomski lomovi  LR5CJ\mHsH5CJ\mHsHCJjCJUmHnHsH u ~LNPR P,1hN N!8"8# $ % n4ܠ`K%h._4PNG  IHDRsRGBIDATx^|\y';# 4: >`@NfjR'kXK ,V! 4UZP鲂mX^E >{3ޠͨE 7f\tNydKD0>s>>lf&'dd-}.Q`K|) ?Y,~u_DY(DA?"ze%%$%FY~) y@^XrID.J(DErdzyc_siKXo^Xr](@8׶H}Œ^-s8Vsѿ_:K(D% \8ƇԑfެY]*srrf98c:nܞ|8\z(p) l?쓐๺N*, gߓ}7ڽ .4/qsKnʜi{MH8_637)Opz}K'(DN\KKʤh'nh?Bؿ&/ H>Yԑ40# '1Msdeq=-lYgp~7#).@Gx2-G@yxf@q)=#?Nx {2I;ާz Ӆ;H"Iu=ݽ[/P'{^qp+vAeF3_yҗIyYi"Oh׹܁dstC #x&/% Pi'{p!XuK쓸 V]mmj3h8˱&T׷ǿop Zv8eK̘Z/ @ſh5/5>o<>)׆ܳ޶ǻix~]:8]|0sc(L*(h׸svQ癘U EBG?:Nr3oxW&$<)A7E pVu䯲xq4{x:q j9 Iv{+~mt>ս'I׾  Ѣ [tV<m^xk f5Uпd\~(풧ʽ\ș%8=)L] {̾Z pKN ՚tO:>``>R9tï%Uo7Vo{#_glj7B#ts{Ǚ4% SFJN53c%x(&8`t[yjl*.w.Z9j!#+5F̘ɞtY<2cYT`MyvbsPb$.mQ%3!Ju1gY)?gKĽD(`?>3cq7޼ 4TU|WT{TZQC5_L3\#o){Bu!  gKzU[_<TsTS?ӉX,fY_2j4iMg_WQ=z?_JMk21JYsu__>cws]"<4KS֗\’oj\bӢ>&/Wn%jq7Îc~ 7@amS{r&L7S1Bp ڠ 5ZA P|ZV{TEiTw {A7PTů@$M;NS_`p2~54QY.P/osThdPPήGFFZ[Z?"UPYP2XA'!?5FrpmlCŶPϱ!+_wU5Zm MMjjqdw>L%T&/_*-S4%/8:g\ĩں0 V@Rjr֠šAK&;xlWep\-h?52.S5ꕀ2fs?sӹ=TǯxS|J7xRХ}w yCLvEJ^C/J'ώ(Rnik`WTe7Gp?pV\Qd}snKhOVh*]:tPBJj8Gj;s !*㙨7- |sR(D}' qXjAt'-R^:t6JJM"[*6MNSF6^9ԡ n>ohgN=X@=~K^Kr9KA *1K\DR}ɳ"ߒP[~)})>ւr q/rBcaagýX V< Y vRh[w!wVd,䷗=ȁ_pLVבWl˅jicFX\ze?)L &01JpnP  Fg90aD su=ZqWp(ޯV^:tozX(ċ \g<\ώ|{GמD\m1ٓCN< 'K]X膸ԊL0O@x&G<y_ӥ<6~j}ed|Xˎ!E:aRhoYu/u_N9uŘQ1tUMN倆Ftܺic% 뎭w޺勨xcPos;oXpC3͑rʗ~̏ueUZm1#.no?>}<ڼV^޽ӍM1\' 'hwӠD8#6>qvFu -eU,[^~iÓ6Jr4wnO;+UU6m<#'媪bqz}ޞ\n=ϯ?t}I,fr'ӦڧPu&shp$!SAI`K5٨Hp,f,K\G7.>84l@m8xɳ0 ͠W<ljS՛ YxMV")zm)RX* 0! ^xmɴkQڇ 0N9<$=iÓNb~ *ˁ90ȧα"(3q<&94& ?lZPv3؁qݨQ7 tB S٬f@;~)m#/=Q[`_P4ǝ,)r/_ 8;-I3nU .,Wͅ&YZo~fӃ@,x(@Лukw򬒊tfTxjEzbf];{:<'?ǡ՜sțX6+aa[\NLqvS9e'FKSg8X_Ի%Z.=%j_| _ ?imvoɬ/YQrf9Nslǣ/yWKX2[_u5pI-QҢ^ǽ%(D% C֩(DK<^r.t.Q|Qe#!YK:^%xZ꡸d\E$t} 3Z`)^m'/Q`ɣ\8.]_t̩/%K8XBr~<,?i:0)e@_,R;Kܻ0)g^~T'x?[}g^TCWW yxR2KylEeVb.u|s<]Av bJxfLoW3ZU@P *7b )kp2L[o3@8JUMNKX! g_ 2 ɽOL)+)v mǪ.9^ 8DԺ:e]z:\5-Úsl_@nA:tcҸ.17+qb.o =4ρgsF!1 YeT (ZYSղڠU.Ϲ>.rεf gY3Ѭn uRQ.6CS9y{,JS QbL sxClCLIT/[wA oPne]ۻNj%(((ӣiHҸ j@ULll&Fݍ+h }¨ ؆({F.m,3!ӣYFA\&jhdrF.G5IFMbKM|)N&3}6j|K3`MVs4ZJp[lbN~gͨ^͎ J˖z.ds Vʱ$ Gd͈'c} <ݫ@^̅%c9c0M #ШGIhh#kT_]]mB]>(||3$.x+̀@HG0&lrf޴8Qy,g@Byс"X $OqnLɡtsX ߧCGrԹ/PӡlolT{N&;ؑO%?Ǐ~ՍbJ'JI4x~XԇٗJrݱ[Qѷϗ;[+Jr_jR# H+ ۀ/5r5G~V:]5TXNz=%6wW<13O~iK{iHI:Yb"L*O>W9|믫/|Mk5)Ph‡Xb4/ZNVwǞˁ-Q^,Wx Սcm]c 8|{r?Vi ާ8ͤ/X2}Q*e'Wé={zE$iJ3ёOjCC;w G*U_Q6T:`gk\`2~l<Er Hiu͘yXNf*OA l6^Ux(5՚nRZX]:6T>10C\xAY \##EN-!Ъš'O?H&,)˩ئ|c?FA9N; ^G4Yv!J+ڐETz/>;~6%q厾ml l2օoa ^97"G\F93yϔ.),Ibj&:noTfƙg0q/!69NQ-ǣhW} wЛɶ۱/ ,yԙ*dFv"  0uPVC&lfj{1sRm >I[͘GI<I*k45*0xO0vj Gy/`.`Vu8sa3 g$?GFҝwwSmϵQK}xڎza+L=1Bb֨ՉK{MIEC+|mMLfWmc\--'_VȠ*U͕!:D\_ѿZ|~9? B%-ljLá{SI=Sܴ8."E{&;<:XǿB*VЋnM@ iK'ѷG+wnX6J|Ĩa"K*IH5hA45P>{j?(XQ1 sx~.7^s-1>eI 6E@+>5peonUÌ\ӭSCm!xӷ*q80P]--_V"풌u;!JV毳߳N|K6 {ު`ՊҶ+mbӞ, Ɏ6NURiƨӷ7lۂZSo>B+!0\Ϭ}kj b,ČY,~X4_n=%ZB0VYSmLN>()!yEyiE$sn$"٤1w ϼ8u<~{g|!9.}xџVSF[ѽoN \?O\!"eA4TEM$mٴie.Fes wnJ[ˤ[oxdP8Gs\#FkM ~OxvH1IԴ~Gu!h US6+țwTe1ųb%Y^*LDc4h)σT,SߗL?]Dՠʱ` ƮZ +~䄳:/owwwCwGcP' b. Jj#y-щ;nosMge*@}k\vZڎqB I=Okp8Ҽ5 &k -Ms;ZKPmϥyX}c]WuWٶnq)AE ef'x&R3ݏtR[f9kju8Y?$LVS+h٧s54uԤYBDͫe+(ա9l8/aMlŠ|qf"k`ksDc,y]9Me(^Y7h k{ m@2D,rQܨ*=~s=sH=ʛ"ﭖ>[a1g=8kBUG`7`O]-ѝ;V o4}dJ~i`6Pa{DI(}̮MdD VS;,s#j1NKN/,R2<\L[[(sx#A9|-F*I(B,9 /4q+CmfxWܹR۫ܧH[L Yd*(R]9xӃ({a K#M6@CBHM5d鄷 '{&M{G+G)DJI2+ԇiIo٦Os1hxc"(jT9ed_@5a-l /">/-4Dv }6;Òj`{'ZG"mA4 ٲ)hݒҶJFuz8LOˡ#i\w6:4_:tw֓䡏%WFvu?7O/*߶96يAgO ],Wv`cI$7"jɁlpКu*r9g.a|kcUr? (rUg'(/ As$2E 8r氧 ț)XBi}Q]pDbyz`m>t86ǒ7m4sZJ-GcOh_+6n: "`XKêS A4/Iu6gm.>% #9>qdNȎ-m/os-fX :<Ц}e߭ۮr\Ŀ:oӥ@G.N6ut wi#FRkI gdRjRbGP{'&΃]J>I%B*#ژȡ`ݹ_^̣ ިjJ"2D)pc˓Z0)=ɖ1>qh#pp㎍фѶ^{Z6GQW.cpƁՌ6yMYQG6e켸r/f,3Wi6}m5fLcոFbɸqa%]C#c boP@K(];`D KV ",Dr4 Yˌm珰Qrm"lXTQ75+wfv vDXd͜_IJ#aOfZ65 ɐnaBnO: YhŶ:zXHl]"j$[֡Hҁz?mLS^ qO6uK[NHD@5+֋W 6Ddӱ6:=lseAҌn&0N1\I@['U9 Z'NIn=q!Q$ pO!频TY {71qNv<$9so]kzho6OPHL^lm(PB $Er-D<=[E bXx"]R&G3`8H瘂Tu],)7ğNO1B:Ho9=+4M gQ?G;%4B-zF,8}iSD3{[jG:'qC ЁIӴ{;Rp/ ֠%Yӊ= lIr"DGzH|-~`xq,[61zfJ3 p^۫]qh֤<^'?W{" 7;X:Rmi) G(J.s`2+=X MI*98ا0Jw?oY 9{>q8WWAm/?LQQ*@_e]Xښ~.ik Jw]|5 Y{̖M?_1oU#/Ӱ@;tۿو]cM[;tp2akya9zn &'xd=6#Ș/~d~OTG$jq:pEMqzdSGޚAjpxM嗧Ny,ZFE4k(%oPx9e>6vo1C?<>BEfW"dwTU'KٿX[&V4T{x D)"!CsաZ[ _O[8mJ@~[Zp Cc-(Xd׈qX Kp#-AP: cVdQ<6MB/1Lo8 TƇݕ*(cR ew` 0,&/,>/{U'|({oϓE @&J=ݾvM"̓횪ѿy{~}نKRDzDsC$q8r?{T^yy&OE̢hߢ&USq;Y$ДG$="5#kE5&ƭ)37j aPM:.%B Qk}HWM@tr0P֬63v R{P#R8%Һ1r4jĠԁ34 ("͚Ù@s2*"AAy؟FxPI8[ZNؑ- (HBφO;}]0͎h\ep8l펖+āI硉IpL6HR+c}JKd|\q:xkMd۪ uFLeё]fXk̸d HKV4 m-=0 ;+(88Q:w."4LpmΒx#cdz\==g^_B0"YRGUQsY3&rw#iyB(VȼBD83@tH޳xe2;0H^k*,5 mzp{4KNOdCew?Hc~܇wknMUApA gv#]pfbx&-y̘1rQ!p`N (FWG/QTVO4SZ&GZ}%h{"ި0aPH:fк4u;D=e⼁KE(Titخ'@='hhօOȐپ|z!lB9f2a*h{yE(O[1zGB@30kXxGr:U<)tl|H0Iee..YBxé nX6T jg$La,ێ  :cx[+q{2+B""EMa/v '5Zo&}qN.qE+D}AsP^qV3/AR?L 6tp[V*~8ydDx¬7{ knG<_{`"RgRA-2vDѸ985 R٠xN)Mtb;gjgokVoAM?2$-U-^BWc@`g=gO 5V߿oucA%'JU'`)N][שP3>ǩ75bB*׫U U_^(7pxxh}~hiW?}FvبF'k!6<^ ^\W߰9Vm 늿᷎Mo9C_Pd>`b"x2c,cRMRɁCSE󤕜_iu|gl'Q2~nXE ^ogzNH9PvxnLF"U{/=ֵj?~yKYZoLveWօ:Yh|d LU)BANZ~ZVw2 e̱YЇQ@6bNьkk_cˬjV~)d4`!0h6k>P\^Lq16̱w6~.h-Nk`q;~dtjm}- mG^Tnxm[k$ljRGwѱz_Nu[͍F#l.rwz5I|ft~ߕAwKUղ?#yǠjʿ?% /|8`ʏd ~Lnⵔ҇`ߴ_I%IRp:L߲T}㚵:[֓!"#m$x.8NCXVت]#]%Z7c-teW!J8`UGTf5 l +ISԟ+]Y:T_ʏ/oLVWCco!.SK-闥O(Un8CIc:xE hBvj@7K.D4_^'֯nmnx~xJv>巂evI%=y쒜ltF%8a9PL*xñKB*#Z{CCǂI3 g>B(oϸW es$;=3CSo8tnCڟ_֦t++";6nQ[9Iw!vۍB74H){:ձ[)'pw^׏Y<_q{MP߫ ((,0uet|axpUԈB/G< r5KOzRQa}K cd -A"n*d;&vw9rüGj5SVhI/dc cRL'F.hKt㚝=bST0G-OS#JCE&-G.`#6!^S -弙E׎P&j CؘL)P4Q՜fk#N!aba.Aa F~DVʁXfdOϜHޑ&{H$ b&.w"3c*hew4uc[|R,H bN%G# qͮLY% X {vt׍,6Yn4T?kN~]e~dwEu"ٞg8ĿCAX p@74G3ӟBNc^Ӄn8t|-c#q[e =A+NbEj l|Ys֫w;:^ %,` KzJw5^sKfǩpW6oT qQ{k?hpw@.rgF^Re^)~4{ˌgitHv39zS\=uݰ \𐾀pjDU߱1?]Zcm)y΁HͶVN=o&l1̉%h`#7"fl\bˆcxMبA yBty+ZldH߭DGGJ6;ܟg6h&JB!,+{`cmXi ~X!xr[%i-ڠkU;<ݶQ(8 `E,ާB$ {xp(Xg9%~Ftn" V3gٳSS.WlƊ gd)k@Xˌ/'+ i%mX$+r߯TwW+ԘEL2dDu:H.i4fώûtD:{?7lCO|߂l :3 ѣૃ0blC42j _I+?sJXAyup!sPNYe8lp}\Qnl_pZyъ^i>UN M] G)8^M#ڡcsvܮhHlw:7L9+z6|;A+\ݟ p_ أYTK!N7Ǖ$߃C+ߕl[0Yr] J$f31Da9k&ԑB9cݧ{<며$h[ZRrP:iڶ5Vl1:ڐ[CEI t{N*UfibcpNk{e8{ 4$qGJRMNj{aaC#ӱML _SfӞխPX/:RJ؆W:?>d{lCNhX= +*E GGvvi#]mHN?ڣ "2lvڊ iyzS M|3X?2>\RY*%Iдyoq~W Ex ‹(IУ+iNg; JL,樆9艍``]Y_Yqe11c+cgl93,I&$y;a]2qK~?sPB>٭nZf_DMs1WLm_6JR`#}c"§9 +Y, Q?8}6zby#T7zb$1g!0rՁQ#|r}vl+3ɗci[ T:ieǃ!E}ZM>@^\JbK87iԝwn0u% 5O&)lAYnA 4L.xrK|Gv!0:tCY{ZV[H#F]8 GJR }d;m (\SaI`wX'{Jt?iݺГωϺm;1)ܜ]KxFH&l^-zM F!aD]-BуD}V̷2,Eld,``n#jS))(3vliZEL"[<R7/GƉ㏨WNv%AZ ۖv;rۢ"ϡ^ńhg9uNDcrQjO¢hrޱ g/XC xZ{.m>=ȝrB=- '6m9q5Emsh{6}:Ķp(X<6"JwlS32s٦,kP9vJ UE\GGZ [ 説O ;ck;sH /J iH6é֭w0aqģJuP!:Ȧw{CHmZ'*S]I3G3{;Ggpd"H7!DZx\D6>G?@& J$ ȩERϩ##TẐ J~w*xv ]8iGꬨFJ[:l+>^a#=ڜ3mƖI7$?jV\ nUW)vxoά'w] P@сg_/2s*y\$=9iw?38+dwy>nbQ>dV|֤fuM3$EP\HŽʱ4!J“`*(щr'B3 R;@=ڽE䛣XJUD*鼠ZOظP֎n8{ğmu;Bqv3>G;MBY=oK=ԲѠ1'QdO-V.uhefIDB [HlC3LDCY!:agcCcx0 =f:vmٲ!*#$ ձA &( k7jr66<;>wGֻ) `K6FLbl警Ce}?Ё\">4&~R̢jY 5#zS á{.}ʏ@mi@qq&4/t!ߟa$W'm+KBk9pzIJ?KM8N(3V@Ρ>|> Pi'qLjɇ EFs}1Fp[ &;?P1 gOK'a~ $n+dcҡԛwWMg GgE+REx`{|aFN;Cਥ0_$,rԿF0s# d$W;Ħ|esM9<0UYRfi6'ZsG= Y^߾ Db$̱$Hy[:+ApY9K]|reXiV6;PD5)L0]s_ 4%D)|l;=N*ypN;[cI8U,{=prGRƋTh.PDY>`c"Ua}7=w"vسl~=8؄Szp6vn̍(ӣF:,UPSr4=rl^!V1!}AZ;Nw_hM n9q6׹$Nl =]T&*gg(A4E%YuJQV ? uI$#.v)[nH77X K\ DGI$nm?8dd@cQH?+NJDi#~]:)֤m=%U?姃J`_#DЏDy]ѴZF+V68k4 W\Qqo#JrXEr`=>2h̞[̫=Spw87Fjtb?l(tOu>N<'BJx?B::9 JY&-d$ Y#2'Wvj 8l=CGq:9"hdI{C-ߣS§تgyKV MAmIh.)gtSSЙcy(p=F j$Mzk6C\Cz<[ץx G ا"g%܀$N(ytF^ѲO@g1z5c-Nxqs+{@\ ɢ!k_ˡTYsixD$ikUndǹ1{Гz9"_(wm:f6$Not4[6 }uWvqEAXĬy3jўhRokx.iⱧQ>ľc(r=4AK̀ @h nARFfiETrlbcd43 $m,YP ֻ[P%*A &FwSBڞ8+hqK< )xO~4|v<~2PǣV{_FM[d78I(PErs#DTl'9G7AeS#M2Of^'æyCA9xg^sфV$#n[}PGF2ON\$l~ylCJS1'jr~=w؈%0PV)gF)"Iy9l[c{ P:a\Z||;}B=0#WIvϟXWdJb 3?yڤ[b%mxmb戒agS*1&kQ9[7t =[%AsoÎ䂕%z~,yL> RTyI MލH#wYR4?}DP1}%Fcf:x*>z]3dSN'_X#wwdIم7E/ս1PԼM1Sya7YŌXSJުBRF#Ll5fW "mqF&+Z6㻢:*y競7%/:JqWwoGolWk9VE.9QJ(iEgItlTW֟8M[<2)5 ˯%75H8 ~TRu㣁&:&4mfFXZE,Q[F q7va\?pUI һfw=<ߋC.8j9ok]{:vjB5}giwLP/~:;:?oA^f?_%<1B6#Òڕ#}sw*uBMp)8(USlZSq;o%v)'W]{bUFUY(ZJ s?_zwbT,.PTU)X"޾kXv4~5}W"GOpKA >\^J?eE('3 XRݸe+(ʊ_N|ͱ;"4W_Q$6 "No|HB/R=FD'Xf1˳VhLٻ55t(PӍ 5+})(OOԌIMkǛ~F[{]ۿ۝8$m0?KO ÓcʗCg*:kF = "swrykf IU_?~*Md+ @Cyl/&2)^ e|rqvG7JwC7j?_s]H\w|:{7רضPN:o̮wg=[8j2h FP5 ?.i±"r[33c-rIߟ6P5V!N0oNQP0 .f%NwpPVmN[bH 4PfA"#vȁj#lkFU?;wÑJTVZOS=L_;G:̝',=S!8u0ݶ%N%YGh!۞h}9DGJ e& lSNS67dXJ8m-0; 43mU -HDwO>&Y'K(k2DUX />}ltc}rS?U͠R^ŋuϳh}F8<э$$<ߵSzQ`_ CWbON%L1e}r(V~zZ>lDYQڥ[=bej*9n^$ZTNH}ܶVi˄~ fİc_;Ȉk^ 8QзTooO֠z D6$'Ճ4c09::yu?LM~Bi[a$Î9%Ycۭ5b;(ձ?gZͅRs tʾ7qsJb"(  }K,JRY9͉%'25pk* {̾ɎƂk65w։z;s $8;eYqoK+C^2md8}ޗ~YNb, ;>D+3j$r8ӓ;jcs(ϦoLv܁I> ޭa3rewʙmw#r~c-yK.A$>&+>|Aj)hb/! a 5=NsymǨI3ڭWdޠ02sjVFn'C b'cbk2JE& tw$ęV}uuj1?GԪ{gpqf%g3 ?cOACfyΫkϨ7^QJȚYt^Nd?hNj'QQrtiSKȄ\kk5Xh>>&:E..H7SC2ӒӷMh¾Rj̷JZV{u_X?㯿&8%T[^e`b嫯(Mቱnׅ‘,F~(K[9+y%WIƶ_\+o#ڍj?SD$lx0}djt{o֍_\l- _Z<9Uoh/oYZz@ Aϓ%{?:t)!Ne a6wV['~jT&'1^sxӄm]g\3O|哒R8gcd[7%^[Ck+Pm:´g()%{AanJ1)"5G 510#UFǍB1J%I bdmqzv`θ2#]™zYH&њx&d9) QTN>uی2Hz8PXϚ2/;Kf[˅;B΂/E;&*s| /̘@ |:_cHgR_rLKBse€@h+ٱ 1`D񑩈-dDaC)G[FR)! abb՝5[ưHZD<džR$骆?xYTUQWjU|Dnl} ?_Eq)ܟB=& z-^nRGR ---gj,<ؤi@Zѡ R 8ϼEFCAQӞ hNg?J ߎUsR? X?]v=Ba\\R'-^cF/D|:jnjq0gQtb"qqnا~Y*_(@+(m:h\D uTyyU]̙qofT Bpr^6'm ,G%z-z 1]Q61 [6UOw)pA/$^tƝ=OvFiRhլEPB~ ԉ"jX>Q Abgv̠nhVjZThV  GÁCؠf͏ff-5ls-(DS X,,ޮm:V.p;,1X(o GU2Ka|A@m"RW]CHr^eEO`0 K'΁+_01wl+-^UFW\IVaw^L,F2kxL\y'Qy "y[RQ 5cϢSr^]gm %]gT˲cbc;#BY+?-N˸]$!CO4h+Wddܖ9L96r'uR>& ]; Նa L6«x(6q{E7\c6-k!PlqmueAC"yn%ORH۸9tpNmW\L;^RA.9;K U9gC/@7'Wֶkv]Pg ;ac'c!u>զre :87J8J pvEGˎX>ԥ{X*>O32gDr]ϭ@iK9Pf7q/H"&;+AZ|] 4\d|a vsc/\<ŝ % 6>xk ?=+=i(y?8s*^팜cXЛl?-;fBUYE[{%v}f/ฤ7|K3ǔQ$}#  d*%'[HM7 Vg}dXVk#˞ɿa9EɥHy*M+lfVKVHFnmqh9'd풗}bm.ymYSJh+rXVc+K)p)%&:tX’B6Q^EPcK"ҥ} ^,wa޻%/ݍ@Tb모"q+_ՙcgc@DM zp/"M䯆(V: 2^Zj++.)Y%yI^f%,+#7ĈB̼~5Y]S$Ƀ|=ȗ> ^Uڄ=${Ԏ=\&^L+婁<{W61 c %<^@=Mkʠbu!IN]OwK+ Ʊ*@ Dz6C%(MU/9ᳮ@CY|>)%뿠ÒbR ?:)Q 0|뒝;F{Szy XTIMsXҠ+jO1fQ̡0Cs8 :=¤BDrڠ@@ 7hcU':7ew&T*#az5QkrF>=WBXEKI0yĻD&X+L0/4~D( JJ733 \TJe "d42=N)nEN}GOCb ѭZB^wV׍ɜ\oҢvy @*l:H#)C kj.T 1Zu'dq<׺9n#T|Ei 8jFRA>1_IC3%Y Sחt"/- VB$uxUQk=Ԩʒ2Y>/ȿ.'c׹H63 J 2@eL/@ s6zFͮgf6;U k  g[z 3(7뺨9^gRgG.'*Q~eȚӹ `Obw& !~ims_ʡCW;X+`%)RWM0fCm(H:ib&#ļ .@YqQ -@Xm rR'baho(o[[!3/ gm[[#E P]l6 MX?cʠz{ (LxuUZ&4+!#Y$u>,-twSGŸIޡ-Ézv}x!>A@۬ zM h+"(t+G՝B[(ڐ0i%5`ƌc@8_rrГ m/h^SoAXʄX+ʽ/EplC$ 3ڞ;"ˑ5Ir /E߫h l*y:ɩ__`Ƿ)yGF#I_ ^>?dӲ>(I'%H|n哬 r,/KlYJD1+농RxZ'khA#[kprF%䴙㫒}׭*:tuCJW VGo^Kx|Z:HI>фtXG<܇VCGj>RjkijlNl>\L$Z%XH|Pe(§yT&䤓$2pj,2ao5D8%/u Y |T|{g6dӇm3.5&%Йф] j4 hQuXxCI 4 d\DWKvtx1NsTqbH."2~&"ie5(YEݓkS5% Сaƚ,Ot)O4(͜~]pKټ١?Yé[oYy+|?Ak9U]]JιKX\+$ GBJNNME@cga$p 5M\HMZ@9!"ah'Ն믾VZ^qVqS/K_Oj~Roڒ>~(9Te'hp0r; Ux#>8[on޿kX"mEu}rhƛXsƤmzMk_iE"*7G$z⍑R:QgZ*t4aX]-mI`hDRgMܹz&V! S[9eHt[AA<\D MIhFXty_^eAC:VM ڛԚ.;bd"M%4`zߋ?xkэc@Ihu>Ur)EK.՗gBT(?Zagʮ `6>%uYGwS&;' 氛F&gIR߾ jJ_o7#gd'u6B_ /bQ #9&5`RG-.VH{0%F=mlSM[x}{Q??E@ ot]TZ K/:`}rϮ݃T3]\`InXƥɣ?ǚ}f%%ٚ*Z?yy]#tKtWWjR|Jy?@Z{=b I-E3 KYYřo|,xS_*WTC!mZS#图+̎l{\Me󌺲̅"DqGc;05H2n3 4߽j-4K}#njZk+PKp>Nqm }s9uRi9lsPA=uO dpэPlWlKri2 YvISchyD$)n)O&a~Ǭ}#辡;Y*Y'ox}zmӁQkv\#W#}࿽y=sˀne;f''Ӈ`ܪl6\SOY*D6gƪGAg5/.!ͧ^h @_Y.(])K=Z MJonv,KߟL?ڭW{NU75}1)n8*z#վsPmlR[$=~w nWZ^M4PW*JC xZVo3;k\ו2|g#k4iUhYFҐ?'rSf~*'FKz >t J}`؉B.[[Zjl{&#KFUw%`3> o&Er˔V[(k&Ò.e7VRl }4L-E yV^`cf19ϼ|pi*в)<»0Gw~z0\ tnќöYh&FD<Ջ-Aq!eSxpg{%q%t29Iؒe[Υ6w\H܆=®g{쳽¤m+GsF+[`116kv}K,p̱$p:iӵǵC%&TWe6MN k֢U]X&t'ϿNuP8ؙ@">GTM'&* ^!H3UQ->G$U;wqMefQHNvwH;Ge)Sݛ?֓+G<ͱn2аa[˵DтV:81knӧ JE !/[?:#M1ZءF^z~ `'bDсg52ȁ>!`UŨtߎ? \W?,Nƾr ^Mdj~7c6.]IEZH'{;).EhU1E2; A=|(QgXYylvU>^׷F]Dt׎ }COdR>N!`C8\Ŀ Z9Fe0eeY-řTCKC nOiV*2r]Amkvo{a(T]` {CD *z9vIv^ƌ %)9ZÃ@h^Pux [7BU8gz9YLz5a:—˾F„yӦUțO=/V<݃Lyq6T?#4_Km z !ꨃ!"9kh(2M66 ;N<'V ٢@d%%#rh'Fi?ScOH()6bD$17S L??}1Md$ouL]}pŔ=7SԳiXް3Q>̷lr.5$%we93znohNe]X#T罴EPJDv CHQ1 37ZLn5"ςS Jң:" ısKt8AX{[9]XAk%ŘفWA>lij%yg /s3-t^s{^MuVn]K./X :هҧjq{MXvw+}% *lͶ@\tbǸσ:>q<ɱdtVUh}x<ٹ=Dmϊ5S) ]=_:z’Aw= Z?V(r򦶎eS2\# NZ>yv9n"dܦG$;ǧZ8TWjKW[Z@RcՊ@z0@9ʶ n{܏Hʞ9 Fʉ.2QAZ1c9$}`M^|W$s;4q0yo'I)r}:iz{_Tn/K|kO?{G )UAbqjDt⾡lOo1#3cU*\NL;:9TT(|;Nf}zpAIe>,%4A #&=0ӻC4A4<_O?3? [,]o~s~Ѥkno?_*-/|K-U*jI*驉7}5?}頿 Bގ!?hh)>U2= (F43cMLF.*!tr-ˎph%B(8%DX_Qu'̴֬x "+z^x')\.4Au7iP2 N pmBЕ}GGFW+nܨ*6֨ N[^#4?n}OMKW-{랏Oס7hJ~uTGGl9VM O~ dSSoh-/M>Dq8ES 8|r\M0(AY!/V;ڕ~_Y1S(4RZȘFm:BJ Sk{ex6+DjCuHxDws(I/荷n\^j5cY@y̦ m1-MjW׫T}\ AHW9?xM}l!dzQ311z⭩k?^B!xH8 غ˖Wd6$1dKrɫp*G+FʧTMd:6os*-SCVz\jNg1_^姕OIG|C剒_{28OTbeuB|O^^:W#MgR7ܴΙm;in΋<%O3*Y>t$6L]NQ_r&90$¤gH|`S=zG[Q3EwvE6H.C9&cCX>4vT̓Ow=8nVW@oG_(f>)/W%;o Pq oG^vYZHb62r}h6༘1r{ԭxU3RuGsMaFADlk^HtX%kT d?ۢޠZF|kԚ&9;.gJ1f,)ڦV۷8 G*ՍͩCU1C׭BGvwyۄk`#/L0h3ۇ$[;]3j;yiʐy2u C9 _c6 >䴵 =Xs_Sqdgff @V;܍$;%cr2Jz'*.Yӊٝ__|o#sn? -X9; )?fnމa^[*r(uZJY emޝ!U`a#\O`VENN/tP5WVwJs=Gd#W|?9z\蟿.@ţYJtbYݨ@05: 74;M}sD,3fDah34Z/([p:ů}49q=ٶᚂə?@A+cG'𚉗"Ń b]$a5%(վ+RnOJ^q-h.f?C б,t6%Ǥ YsΩll375W+jkՇBUJiR.(aTjޜoSY*TUQBœKcz3K0q]4pRa4 av\~.񷿓=~lZ/Qkkd722 DI ?YɌ>e5氷iLKq+1z2}w <=61W~[{+K6Mmζ..a__j<XT" L&fi]cz`Bq{}sx)_D$?E#B^mie")Pѷ@D6` Lbh#8wU(3>?k倧#=i+'CXmNĄ"Y7P"w`R|LQ3k19ܵm{cB1grG:t0@zylg\9vb]>?GJ eEh]X"o٥'GH䒗QaF8@Pw1F.ڥghI;Y+G$` ͼU7G7)*Ֆ]1(;!l@+$hu!X q``'̊X(PdpZ=6$g*K֎㩎JwePAMv6hNS=L[5?撲+r;Νs_]$$TBVj Fx>l`l#8y%a :Ø<>\h/]GTiG߈-῵k O8ӂj@fv_t7vg`c#E+c}#cird9 % ǵ^7 m;Yn@QF/M)TNar`nP:e5K4f<Ӭ0փcItPmT!IN޷M*.t7q%nXI E#0;y? K:u\ TST'[ƉCq|vd(V+-@oSuSΓnbu[+bXz c#d>9jȞ'{3/.8Dq]7O;/vcCٱ1_KR!ڵĚG ]^Dh"m$ŵFIȄ\s+ a a=vr.!Pr(eۆHWXN<`-(>7(cB }uc9eX 68We?ܝнmu m;h6/TP4CE˲m4z&pYY$)ߦҤ Yh-dm> |OCz4t7lM 7񱉹;4t<~i +m$+ezpdTS:/z9f'wj /{焍EXm̕;NF ]nųe wĴӿ0>2nQOs Qe,I?2}hl)( jiݙ8Zu E(&/̥r^?EsQԙ޵QjvK]9QRhkUM.+|tu} O* o2)eto|d17Y  alo& ?|+/vcj;)'~{IU{^>e5]*p97~ľCyecSǶ`"}o>sCP+J 5x6dձOG8TGb^P-P \x0xb5mA64GDNH5;V{5ׯύE!wp(d2TZ.(+B *\ʽY!UN@҉t]Gp;A={?wYj:ՒOȱ+{%y N> :7T:tMԵv퓟ii }V6"5@#Y6׎={'ո#La#Bv"] !oTGp x"uhK3%$soDlZ^^ =#Yۜȣ({;}<k,˹Qc-Wxx8Ym`By~+-i (5hٳ5=Ą=/=gJys{tż*3X;:J#;o\q\F G|NfROa{4G njO4gO Tڶl<ԙGN%\ D {7سn* 2#MH6mK \;cLا޷B_6o21YxYI~u3T'  #r6tRt~I.(U(' >&^8̍tmT3;چ >o@#7t ϳ@atOtQPZ|Ioq.3`!{ YsB:?8JnԄ;J!F)­h!/ yk4{^:y >Ol \̻;, }˹ݙWnҼaueT>1/~p{xn',w_v(RLwxI&"՚6?$)?om8G0@g_eyۦ$7wv=ǽKB呃x\=odRֲ=dru#" g)Q? 0if,6-pl@F$y5yЬ@=tCqbsD =KD:l,״{^JnUy&-l/C'bбa1}a/olj= jq/S+V>k]<Iޤp@`1wat˓3z1GRdcI{F5R&ZLZ8Ι`u%_IX] UX,rs^8VՖl,Ԇ̷5St’%wgv$< Q{)ӰQX"; Ey=hQ:Gj:EI-]Og!J/47Pve4*"d^p  jAN }±d.aR﩯8؝=io ڞ})qxYmP"7gvv;wMHi ɑo]T,J =^2Ue>҇1 $q-ԙ˜L9E[8Y  "LM}kl sU0O7@[}j4b1@xY92<##(lU;F+ݧWTŽ,,qKxU9ъ3/9e_}:_{*,)Q.l?wg C JTU t\Xp#dspA_ܗC(S@|yN'^I mb kDZzGl]]P Z2iΪ7Gpp[mIC0]lHA<;8;f|J)zv.c3@}&rybѡK]x:lr\RFrJ|{|4 "D+ldf*ࡃg@^6.sW\'y^%ζ_z6?pѺp6\2O YI4/ظ-ds#CM09FŽ#,q/ ;g7׼H& E|Rb.y7!S@dtߠh垮T~( HrmO K9zz5^ [Ah׼1MU}WLSү&G2cz *U9N# QF$)5 4h0ٯ7Ă"h]neN[ݨmCI&=hkdǽ-{iW2نha#?مzH$"=kce-&l2i3^:Ti)Йx)ജv=wҖ.EҊ )4ch7͛"Sͫo.DILe:?91fQZϻ1"u.y>svʳ\#F8R*!'{sS(0JPY6{vvč̳)GX*i+"k^S~pGšɽ{ fn#H~?LuT sQB~UjgxdT6u8 -T^VҍtB92g3D5NsD4old1Mںğۆѿ/VlhS"MT4Xn|rd62ȫi4Oqx{2m–=??p\(0mO mCp s8(l,"N( ZDa nw׵WD"N{e`j3 br~L)LlS3B*(f}˸~C/k =qv<)G*tNλb;kA|p3 ?@a!dWw!A*Q+8p"Ϲ?.B=ȹk6 ܦ+rD9wwXDT! < }H߃dS#`Iۖ0 K=Ck:͏(JX04<5oV sÜ(RђCEl.:h}kF㳬,Ynw>=Rue"wռ\=߼kM:6Vo okZ|Eld\0 X8^ptDXyPrQ@RQ8,,QEFAqĆ/YBk,4Zd6%z.[-T] adfÑ\Z+~FyvI)37y@Y}aPDILsDl{zy5'@ c>?vX=e;“y=m2" "|zE =Z_.Ծ| d˔+SvB,};?Qjk>^ZRC\~ يzcgׇE`z1_NHXfjXJ+xZcƱCM離:s 5TOl52. ;vǶ;4ږ1miTH>[Fw'$$!MSLGKlo[c_rZk Ҏ;iUČJ}do29eON(`~/~-v/Z k9*-\\5]5x67ᲹS3CG>?:Lhӟ݌1SYi/UlY_xΚ;˶#%֜_o1.SNs?8I "Za= nXS 151Ujy-<_+{yENs.DIϼ-˥\e33w"$ K18hh}[ Ojc3PaH$2ّl, s[- ww8 :JPPE G墖ftB E];m36R@/^Nux >+0`kkgly..ta ڱsCsӡ!?[ܦ·)JjwMX7Hp MbnÕlOYd1dOI#7"o$+d ?, Gk#:=E>$lğ#TT:<,|FÞ2f;'KK:ȢY# wC3:ᫌٹ^{'ա5\Reg!ܳ;HhڵpDITqReˮݸ.+ jxZF_KFV)9i s99eXE}ym8kZ_~tEMrt%P-_{ZĴ,\̾ơT*QGW7qdf *R#7JV=dޡή^&,̪U`6BZ LiwC7=ñS_bDN[&-Sf(/@BVǢP2'fT>Y2?|{-xלy t&~qay(5 A[I~=k0_BvlBpWWN!JXDDY:0U` pb=+l0 k_J;oc°_qaɏq7x`ls[L'BuS@+ :|hkм ͮi۰'Ȳ`{#wg7DFuX5 yrCY WURIu`2&LêpTb.} 5o^iN͝\1 f5{w5ܹ{P*N0G;-U57\cUIE~g}çpq϶!*ѝrN45_x%zsD=ZIVg6^esA~؝}(tRЁ`I$D |OR: R>ue @Ta.'k:kQyոH|oүwmL\,D\54"b V Ѡlb0(Auv+@\gġFTۼ½jNbE:[^e!f9Nq*ʅiB;zȊ6~3yỐ-,wUC謍T+2)i2[U?w 5U4/|&wd(LǏ<!|9WH#Dc?Kg1;ҥn#A`au>owF^HŨ_<buS(s5)JHi#umpmFfz:鷐.2)E^dWp.m.VHOg" 6ȋVm5!crA8 -qi{7 ?l~՜r(c-H4g`nG 08]w4CK:ۜk3r,sa:)xP(|c!cfqҎ+ԉtv*c*&Jyzրq7:;avEjTѮQJlPKjy6$u :l\(켋oA;˰aqf||6Na Cał\ Kz+qk.8Ua <1A<.8aӹûG BO=vٕQ4v&kMp+@_SAHk|vG8oHѹ#K5d-0F 2J ߊ6n >nn6KJJaBk!2Kr";7‰8\L\D`U~ , G[ c6.)i`JFIȈe8(LFV:34q˜N]?n"tR<ҐVG([ ,-0gc $12H[X$&?@ wAq:/6XU"IWEe݃cC YZ݈IG;9A;;-p2_x*l5 ܡ oQĽy?zV>0L\'gV^ eIyO `%#J#z*#8?UlD,m m5 TOLx,2 nm.'%)1eaF`e~M2/RnE5[yh*_CiEsP8B5>{<>~.2 ~vVn5RT.uYN:xԨnRՖJd"FgոTqIg+zb:\"8y&bQX^M>JQm\jj\~^2% L>2662WEO}:~\w1(c4QlZkG}7Qqݮ-(Cf3Zw+m" u6$@E3w2'FP&6:_RSd1GMn-/^ K%ԥ</hEx؛8M;۷v== v_==Z^ j:*/zQ)/n)"_IK |oq {(>N`lϑ>%`>9v}g(?}h[F߈\a=N<365Tpg*@KG)k~"+5,sv)yzQ]Vϱ~Ӄ>;ѡ|%&z'Ƅί }=#{t5襭3LhG2q\ ˭8}/F2ɩUF DvQљi9+wP:ERK.o Զu k }o$fXWrvf(mZsPs`F^cO jߙ8LP `_t ߫E4:z 'ةYr&1T)S2 փOl-`l3y"l;1U5#3cn.TeY-_~q\:W2;'٬6K|@ɂZ-_߀aA@q;Kj8 m\\g֒jK䃫f5o} +d~i^Oyu~k62DvlW <+ǽJ ;ח/_t/QQ%׮MVgiD12nnzgo^x/DץKcק6e) M"iyEQi#,P02wR?fdf._NL #-r_u*=oe&!7[ɮ@]rU$2 nFck{!׳PxwO13V! B⬾#?@@+ }pBNgeF(wБynwMp{ꇊ$02Q<EGK{I6l8q;ef(58p@V9m\աaw7TAv ÙH:2D_~&Luz2CĻCHo7 ,twgғ(ЮDb&rZL1lWcgG BA蛱+7cNL9s|nL>5vvL]IM^yG:pXV9 m\AԆ rXGˠ[%᪔q[V4EׁE@^.ҤD 껨eTfV9k=1ñ(=)s|<&h~-J{ |;Nnc\Vzzǽ\{׫;1"eted ոc[Qh!2og{WGr@p>Gr՜.+,0 hp   Mefstl  TitleL"vufۙPe$*sD!\qUdOO,p ۡ0,>ɒ͒%KƓ͒%KO7K,Y2dI.ldɒ%KƓ,YdI,Yd<ɒ%'Y} %K'Odɒldɒ%ɇo5XOo7xc=oz7x{"Ï;ԝ)I׏ ɔLDp/8.LJO|-ש_}V>'}L} wNw~S{qxoN' 4ƹkW_ޘǞ c?)\S 5įLz8L}$ d'o(t座^֝g>Qw[?MvCQ=BϚSꟵ`̷Й`{2_~L^ۉ!ԝ'Ѧ=U)&?7KO~/])<{l?ٺ7R}@~2󩋯N^oV۲A򇕲'bg?Ao!EcZ_fL}<ϤK˩?MMSK-˩<~_HK?|a(~/?)KhVK?Z+Q4鳨Ŀkɜ~( /OIZJғS~?߅ԟ'!gqSjHw!gR]I~:5ߧ{7K~ Ob㩟FpKuC:01+Dd[J  C A? "2yJ)`څnr.c‡ `!yJ)`څnr.cLSxKK8 $xOhܶ'{{"45n:5;T!F] pny#j` Fx`y`!9`"O䁃p# A !֟-icOU*gSSͯ~ۿWS#KÿS{G 0Gџ]k<=_~}?vW߿?5ϧvjWxŸz/ӯwrɍ7<ҕ~SWשO';ӯȝKw=U(9W@_Ч_w3i4g?x?___N_r/XUտUտJNVտW`8?qjjWAND|c*5O>~zXX OVc5V}“XX}3ZNݙ0̊Xbйtsg^[×!{}woJ#˽qrLB];?Ӭw_Hy[X'h_ /1L؂  fz 59??Ÿ]wH^{b]5pr Rr Rl @ `kŞOF酭C%“pjj g+OAeL8`@!p[Q)*~m|lK]C5Vc''Xf|NlOH(^soUܫ OV8XX'jjd'L;4Iz5VceF?{?hA|7C409l dwz6Rr-3ɘdLIy牜e#h99Z~sfpS4L؜If_c? [ъ=5jeSat(YlN d&&r8R<O53s${_ >FԂ$&'1]IJݓ=WaaY;p([jrMY1kSۻ ǹܜwYƽN=:N OlXO (L!=qteXIQP)M$+U)]<9[$rs)̼DNܣ„Y|׫U'(0M-!w1&<^tAp>'kGR2&=<ܓ~ 8C^>9˲rwHWe|'}aV@JlU8dܓa]|WcehPURK}N~Dv=u+*d5V=|_6 ^l>V_5Vݕ}Eq_ߕ)r "ػ9d|}+~KX_{zxwǗ'%3">ᰲOSTYɑx%f'^J[A9 E`8v0oݻȻ9sOٞw\*bnT̷+S>wNNRJ|{*a/zPO)%rHoHýg9Ir&QBQ XH湋㩣Yʦlk2gG~h(RWgf)(+D]Y!)i.5md.eGt]2J^'Gd,#@7ATfZꎡyn_HP)YCq)!p NHIoSK5]&LA=f:'6h{z<99rnŠX0oJJ Ζ]:Xc.⺢l6t#Z/_>yӅ)nHi*o"QQ6ux2%TeSU Wt};O& y#)f0F'uסs2ЕX*^ʘ֙ &yׁ{:>{Ss,h̹'C[\g ||0\|} 9ʟPJKڀDuU d ΫrXP`kcc ľDQs&2T Ƙ.Kꓧ5?.|}.Li :w̜}N>WB$UT%Ön_Us#7RB>YTFx.)ʦ,.@ 1+vd'x,/\ +*r AI(8w1ΐ6B銰8<5.:x)Ƒb ' kv! Ad#ɎH~caۆ[OUrmnd  vP<9 m}U@)$EД:'+퓱S#Ho^(%;E2F]^sb5,_L+2=JYt]ԓ\W@]@qhy$K(o:~I]c%R/\D5Z`'voakFMF%~dΈ0lͰy:Lȼ(c"+y;X8bAY2H:m-$Q vx-].h }2 "amvHV$}*·(#RFím04uC?VEg 9Xx0'hdX^ē}}Dm]A$hjwݛۭd[/g`BC wU 箸0g9&Bz'{Z@!a$Y4Q0y1= dmVԉ,U ;s"$Y'&*=,I6'k9.C$d~>pi,9J X=)I4D}†(t%by~;`vMiC1}z邍a= 'éΧyTY;o/0 sNw),IbX'1`)H}u{$T7UqY(ڬܛ@1s'(cˋyE|ܘr|yl@rqO5>x2nԗY4p5H&#ǎ*E"%`B{Iх]:>hp3Uo!H9L$e D{&/5UtbtT7Ӝ< |bP%ֽ|)36T| "5e4Զumnm,Л9b@zY+h1 DYi+ue]. ZyO=$ѡQ&IRu[E/|^}SJQ>>0?A=)*dp#$5keEOؓL$_.|[:{+7ϸ@n`A2T(k琤~eA^Wv4*plM$$D\hy/H]N'$i;RXZ\hDHPU\WXN>Yv%<-"uޜ66f j+'3AP׌$K!͇E!G7G-. vAztY!ۀQ&2$9.#l>v}ēZX$@tLy'hkҜ3H2eFu]Vf"Gfwڶz7=0Q_*%sz| #} MwoZYĂcLQj)jj342s^Rz !d}Eu$FHgǎE\;{m8W>wVǑH 0G(xֻަ6I["Dt<./kݺjQl]zSefBB$G0,kk^o=qa +S}qv;Զ5Wsj@My;o4]Q͌#_&%?P:rˤ"[Ӡ[ZqAD%l M$J m -% &P̘'ȇ{8}Wv TO`2YIjE;p6-bX9dw`iA(!CPsҚܖ u`d$3ck~BV7V~]*[1V>6I6y-]9@t=M&:6}<2)q-JQE//u/a!Ixˀ$*5I& !f^'Wea\n"-v}ެ@0tU7;I2AY֙.ԕ:|+7&@AFld'6u"F'>n+g Ir4&erRZjpBΦf;}Л[A(&"h-wqevX.jr.}'Z3R>ڦ ?O8ƻsL.^(zp2nRO7kœ}yΕO-N [3>󤥖D߷'q]Q wr5 I GrKGb`q.ܘDTw }~:ڦr݌srGE߬Гh"R*+z [_?&@ @u .6iiW ;) (W7B=Wް5@ 4OyK샎pTM+sI!}5WnIfơEyAG}%C=bqݝfjx;M/"mY}bCmTB\>w党#eOzJܜnZZB81!|8mׄ(Mz-7|Ť>ŒgSKEM60NЖ"5}桙dr;i@ɨ`ZY6{>yqwv1 [k;AifIIu?օ֩G9Pe9<~KKMú+DƑg ![#~(ui͍I8P|T)\K s$Y_$#I cJ3芑sU„Μ>k?Z,ieiUCtOFbL Kk:w:m+*-ݽ*fS'h* IiΡk}ng4Xe\ KRt^,7#=oXT2JPhqX!`BUiCW%C;l>hFI>K}L6tuYZH0. FO=ӻOe2 h&AKl)â{hYowdn @_e[;01DJ*n:n{MHaL|$ [֛ZX6IN“c/Y9zYy7CPsJ,u?uV/3N1< r&D{*RKIw's|e3=+#I.Sjt?g0Dc[OY',v,YYD?cO07ĥ" %f nJj[a"*V\}EPQ3si"'3\CQVt`PTkbNKY)پAT7̧g)X&LN$AjaU!ǁ2·2mR2ѕ"IϦ FsusGiוzqӏ}b<<8tſK*$}i։NP_a\mzԗUsPSw,^.>ǔ Y26BPy:^s.P/ђO#ǏY4'~N"̡H> tں?0s3qx4 !پn{AX3"R+c*~&A8֙Z=hcx.(zQ4G170q|n/ (If!o;FT& $u;4?0q\ f ". hFaΩ܏CŪ1dlz^֚[a7^y<0RW8 ](}Y5l#S7ЬIm i@#;e(ɬ.j 1s&Qy3ãX'v.01Hyk5gZdzʅ^!b8:Zp4#:"]#<\$ "Ñ#cm٭kkтMMb h|6@t#p5xUIyC6 } $ȓ|(z] $0w=[6 7!π >j;rPDOy>O} &+w,s~Dh* ,r—R{Nݐ$su ŏ)fqF𤴡<ݩ Iތ*"](a“o'$oh?5u7Z6?9NAڦ^ BXc)⇹fg1nL*Mᴕx'Uҝ|O[&'.[(?˓,x>KsΙ'YV9S3^v3n'r| C<ƓnY4ZY1ⱶYqILJm~>]FzfyhRڽ9r3y-# fЗ퓝E+O(9ۭ c= =Qސ=qm+Y[5HީtYgyT7ƓbOtՙZ9ӡ݊GW*zu3^a& ^\wkƮ 8H'APWgdm!vK^LH=Leڬ} {V&u%)0A`!'yzΑ]@ uݚVVaV+?'atcHYZbT6u^ɋICdQ"7kb\‡^ܑ-]ӗkJ_N}`o>bp-p\M.Z[~8g?ch~n2KW:єGϠ  Oi$ 'V6f~Ͳj0e]**oM}1/pT PZS'G(铆2D8u˶Էݫp-ʼɎ 95=& 3*(]~չrCq[1g~1P`-Q1)Zksزqxp;4RIA9A /Q8b]sN9> Zǹ hy^I݄wm9]#xLlPYj5/G6jJ^uR~zö6m"}$IdNwqIOۨB;I/QɬƤmBޘzMNAH(KW^T4yΣk8.'.4(R[ơ\e} s]18t;WiNֵ!O&.SJ_y2d0}0Ձd>b8F vjd7#Le}'n640|a&[Fhx${u4mic}N^iۚyl=ה^ˇaM'K8H =SOU9jP><,f&8^й+tQv!bK]m:_-wtkcZYc >ܱ0W)|cǃǓjc肜T el|Qn5Je.ֱMI0TVEw'31Y$)zOWZO%m b!dx2^ncΠZDd:IToLsrRP&f&vN!;8TkwӴfa'y(֙ceIBc9c/[Q~unBPATPy]@DXb[-XsS2-'K-IfxA_ct$G{r ]+), .wਤ^./yl'Z9<-c0et:pא'$CV$v<IFV֏-'yxxF(2'YQT'#Nh O7 -uRg\I@&ơ'b5vcN}>tyE>k=r@Z@ !.j OΒxS6 G%8$,v:D%|QJf6H'I _taJ@c,O@y$<0ni}Y{bœhH=V`]u9eb;N>Il"3Տ8gNj=fAp60 v(·a:z3vM|q)v?Y :< 6AD{vЮ QEjD݁z0gZ M,L zN-`!| 8+My;y$^@zj ;zQ %)q F Dڞ XMqҡk,7!cTfTqUr˛r#y'ۄ '3=gM0NbmYʦ:iNemNb֕$$'?$UƢtic$IQg?Q' >]27jƾ\'IW'Z&XNF}I`X{<0b-qDuSWDyC@ jK쓉?[4嗩Ipa,6:; ,IYC<|MjC7>4%AZ5z'62aq٭ LVNg  Opǡ~ؿO|}^œ;^)z}Ġ~`e}h쓓EPjcUX']Q“a޴DqUȡAwa͎ie(DAKʊ .5յ{2vR[\qC6>d'ռ}_'0r7Le,6>%|E˓ٷ}7RsZqKWiׅ3ִ4N}lgݭ){;JQ)Ɣƭ,<~2|H[$P6OR<>wMjU3VbTXu '%@O띥 hI Oכk׵ ;S T $~2/Q_q۟RVr?`yK*dk[:\Lv`Rh :rB3yhM Mbnoٯ+5c!7+D\7y6&:]LNAqBkZzeƞ^8B3 ӑH$8϶OrJO>$I4&|48S&qeI>ԷIlqxlsjf1ltG$ m"':C b۲Ǔ vf٤յvh['kOQ.q ' Ob/ӿ;m(FB҄IuC9)O?OZg+<0I3 K2 l+qOXF$"X!zM[;g'#*;֩k/go5ʏu>޼uc44_K [F]YiIKMJPn9BSk%PTHssz3 | ]f}G6~n~֤I@pxc:ꮡY/nٞViLSiq|u! IʖZ3M"ՁfQ4_9 {yVmU' 9W:U6:Ź@U!)-YfrR]ԥ;j؎6,A=buG;tپ֙^oXFXqvBq e[+rmN$c 9P&*y59Zl~u$x29ĚG Me4R{O*PBq֎IZ"]>'孧tT$i!u <*<&X<0~E%Q6H0N]T sY(:m ՖC*xcAT~$L"D!,gw62ٹ[-utZLywAҖid]kj[*|z4i'Taؗ]ByI[w7P"'{-~e{VtSW!_8AT7B2T+RN\W`yןLu[Wԗ ty*LXTb'/٢ɮֹRU|tߎxE{6}f#>a3),)?d  H>wLJO&44.ΒT.7|+C܋U0{K]6x2(3&\(ͅw]h\C O~f|+[qRuZbKmǣU2^ެ M~(%( &-bֳb3_8!i4 yu?5DCҕբ}>l z օ7Y d&v7$RQu:n$}E$I15O&H,xME`_c>I%=.^n4&gdr2O=j}k1Lts`_yE$Y'3t@1j,md]=Ӷ,JV6KYҫڽ,'S!mp9 'qoaE-FoZ7cwcW&QͿ@+/Vt0C^nr{=GxxjZ\*9u8ߓgCtB2vwu@TAѥmؐZOW!+o-&:RbFu`\j^z;.cPY,eIEv yD,ܒ6U'/ Q[^oTO]JwPH­YYWψd r8vFΠ/>}2}aȹQBu;Bs=7aVQ:,j*@iupu6C:sX)YydÓr<:Fx`uս9| Nb&3)\OFּ$xᇨQֿ烣nnŞ~I h qEgIݨDC ϦKY">.73JGK'q-ʤ T;vj*) 35 Lֺ5mn_~Q02 c} Ʀ;4=s^ϹXJx}kO<ßqE+H[~kBk!5hU/*H8j/h"1'wXJЗc mo #Q8P6Ly g o # ]pdIk ɩ7։ eHLKzwrV\jY)qid14},Jx8+2\lRۀٝ -gJ먽~,xiȇˠ,-@MqbMb-d%rQӄ"O6IyC^cs%H,`Ʃ + bc)l}%2'6 9fhF xL͕IGǀ:˂ql=+<ͫh,aD/"rN]4tT1q `VD@mQ8}@6kX G#bn8~BS*C0{?95jlF+1f:vz)L'XxZhúʂ9(Խl 6c}z|Ҙ GiٗaMe BBWԏLNg'N[΍Қ٦GuڌhB_!+Il&K&.]uKS*vo'3vjT6Xypd(X^WA`7򁢻PrߊLĘ3nbZD֬+s4~(a]3ܤuN+ƫ7JDZAH4I{m~Kv% 7")t13E3-Ru^e&x**_-$ϣ};Ra>>l. ӹ9|mc &e]F8۲6?*d?a&/nD eфf^Rcw"sޚ6M_Нk=zryHMQ4pb gCةU췘K䵦XdLBi (--2UF839$s&A5~Jk h(.QO[9]'x~b{GiU e Iynٰ7}~%UaIYnVv -ȁ|ffoMoJ/TVL1NE/Yœ0vZ` kp9)$EyE1g厺\W%z"I{Yii9ҦqSרkCn?q1D|j a?sؗmh{[@X{zr:s'`4hc~oNdb'L#YXzuksȫ!WA2>(J-Qh~j"*+7%u@9hQIo)h ?8.7B2Hy]:$oBeKӺu{ 5E?(.iޘ.7o ] Ai泇9;" yȴÐHGi`ji5yy.wy?F>͝a$^s1 sQ74%v;5awrR_bKjx@8wp98j xRYv٩{FYT, IT]m|idPzz 'U f<2̞S$:w~b|#=l\C:ڬnIsr' _",EIF6$#4I|C#<`牼"iik ŖU̫aCPVb+COy2NZXVZ2;"\Qwjvk"IbQhkY;d)bnOrީi;l=xʦjQVyc'3.⣤kv)}XgеO[j|lvGYO;[{C0])Qc(4A $jLˋ)w 7QXhv0QIcc^+Y{iaRo,,& rXsOm׬HN훰xcs%L$XHìqhg|ǐŭg<@NZG܄]^ s>jX^*((3O|2 nWve [R/i8tGKZwC@?p?_ &cN [NIh|j*}MQv&Ǥ(H[ԗ_?4JHl3H$CZjbmNXh[.LQO:œ|0O$3)>Y⸉"]-D$+$ɟp=9&~9ib$:$DZOH2+3 1DHH}߳ "{0JhԷ F,P6Nq -!=WJS$H4eÔ[ q@p&SJiaٞ ?zBjIG*$Ӓ8.\n [3 }FH$s*[nkђ6@k"mTgie߅GJfiq O{34=ۊ2*j) H# },ϪXVWZEHܗ㞛a|l7Of$Zp5|uAkf:c硶gIve,=t 8hds&׆ZXdIZ~g!_G(sJw:skkuI)1s>T Ip,a?!Gg!I&&m]]srcē{r =+-kw35E(o8O -=߈y֫d0c N$)O@Жkj nc,I| \v$^vX+Ҿ>[4fj\eD9)sܨ-\jwHҗfؒJ 8ʟ'3oHn䞈n@V6ľYFRb/(dr7v |6v.#@VPm'gTBo/}탚S$}4D([y%mG3MLo¼k-,"-`~%ňeCVQݶ,WSuw Ыmiڔzw(ޟ3Sv[gW&~(k*nH] \@JY\Hun#fNU^&ēo}X&SwgYÑH2΅%q3+|0@Q 'vvP$*ǝN_$:RAJvI&;߽}w^6rR,!HT߲oY^m I /BKnF|DqqɊ(euWW%m(Ec ..acœaWHsQ27ߔӻ!V;qEd"߂'<3ug*g~GxrF CPҚ-})n#81.wސau/eQQɸ 1 >,S5L$$IP"|`Wқ|{JqKW$2yGgWG6[ZV2+Yu R2y\]'S@ePq!xݛ1{:?8<)<7~6jyKhЕF#t6)ݘoɀB#ۭrK/n鯔ŜK Eh ZܫlvR:E , +kM{cZ^ԕ󌹥!g[2ʋ?ZvD-S^35yrԜa?e*C˹d*rܘ:EǡA'nJ)b&y؇u O=J7VRHqUgbTP}Vg1bqN5E'y߭(/[*≊ITDtۗ!Y0nNU\k$ƹ?s0- Z b-FYἸB=mu./X~OW6- )> mROru$ rRX qiaڬGVդ] .wԒà"Ή]}ݹ웸LNQPa]4O6Y?ɫ[R8tk7:7O+XސyR 7C7Omw=yK|c6?²2Gd,| +x |Qs}s!nX4qdF?(r>Q8@onn ֤uGT8!i򶈚+_]^9wMUZk5EE`y4l {$?,p ~1ƾ_[-'ٺX>Jsǡk}[Ǥ=VYa'u].,mZ][bM)֤HU*Wt݉5;e_zu@2ji|N)/5֗6 GSVi9?xZ@2T@@ e"haXyڗ`qm E)<, |@6>A ~D}kI"Ɖmh@;<`I3ֹx>nZWz7!fC43GCOO(6Av.|Kx֙Ja2sm+e-Q]\Vfm\VzE!sd8ǍO&n…}3vIƜt}eˌ{am3gܖ4 U7YL,[9TkMveF\ $;16uoՏґ/3M.P-A${gv+ȉM҃Ad O'Ρ؅( xsTrs)ZOeۧu] 0 ^5?D '֡P7^ ۝&*^y?&QTAI xzuXE>HT ;Ó7g] 3ɋ(N nxh_zv_skֱν  Udd} X5nUZTk(wi_Mv(iaDOw4yx)4 dr؎8ֹ$x1n2 ( +#}0)h4s@a`y $3Lٕ'WK0?p\\_Wt8OMsA]e@[ϟQ%߁}2ImI2ƍd-kM-INdhs}OLYH(Ĩ5M 0Rw箾CW 8)&}\4v,m80S~(@Hg;' bˀQ0"~6uEF÷B1>2 1dy|Ky*1\,3(u#'J5[WeOG@P'iww74:NM' ;q&6έ4dvH23mmKV&pXb.YyTq='Ì z.tuyj|ұP֑LCW0nҲPئЋM$F :'.UyDNW4ݙsg~`Vgebß0N+Β<̳C8厅剜tOH[Y9L><)qek"ѨWT7κa27{gzҙh: LsŹ&OIڡE&ǡ :#ɘۀޭ)u^)z:qۊο'$';]$@FPA:.)#%4?K? O.IGTI%|kM'Ş$jFoL̓nO4~)9yK3K}t|p,FIޚ < YOj*Ю}j;*9VJxmYh< si,ozĢI8qF{K40cp/}մM 8,^MX9o~_$'I$s x%s\I!ֶ@J;߶gn|'Ij}c$FlVmc.A8Ʊy]$9BKc^ d4{xf8v=~  E .q=/=OyU1睙9"7R 2h-#,%`%OP3ן4k+E){=h$œV=8ݘRn#?_Xl]{+j: uFR>V&i~f~Գ];T'gk_Սub,_,^䙺@X4}'1? O+Ig,*r!w8m3=U$+vid9S'4$,؝꿑f~ r!"|̛]gyJuhQA||ke|N0Ovn"HK.Y>EyIēFR;#*NyniV%lOXY0[|Wɴy4?I%q.= ȟ֠fXORj}V poS$[ēL>ׯ wՆDWusws}D\WR$eɉx"z]եis0 4`'.`2); {LNle\k6 HUQɨM0GO?Ʊq@^u0[O /gٟߋe+qO<ORIv?A+ @?mKv+έ jLɋuxY c1"(ٟK?M3A 9GD6Y1aN7Pg \4lx0kϹ^_JudٙY4=mK{\ڇ5m2~؂~CJ*XD:9=hy&R2DPrZBơ B Į k`ihP=7oFF_Uҩ7|GR^ʗGzOM6})cR ~]? S)2AUľ^<7,b}5>N}j,e+c'a {W&XTftwDsٌ'ҰHIUv\|KxxL\gjUAob-S\G HDf6*joo:sz< ڽb*!xɔ2P0X'lםU(Cw{kyp9 h.QmF,I}پ֓u 9wNm$G̎uzI9B,V7ҤPE9w5 m쟌_7zMl;(`Qx' )~|bC4~=O.̙"ꏔR|el?XJwn.'NSd^ɜ#cĝNzǡN:QTC#yg._+OXOjFiϤћdCW] ߬}:)j*(ˉsZE9k'25Sp9}1d?$Ǚ!ET;sAZ{Miu;F**rSz-0'm*E gLvlRYSj^~ٱ-md/>xHM^(K۬(Ǎ -8lTT`=6rBȫ#BDBJoPRF<7~2z]o92d=FBD Yg}C*G a7;=RiMH42,@]jC?l*d&! byDy^=8]L$u2ߍ|C Uמи?ZzGR>,}SY*bIwSl˨QsXJJ*mƪ~8Cw5f7^?lher=(__msZޯOlW^cUF\aXY쿨{t XKs򮿘6ᑒ1Žpg{8ncܨc2i{DekHId6 ͬt(Wgi:h==, 癣#EKؾ\4Y:T:^_$gx{8>IYLMg3H[?vC=A} p:u􃌟6$VQ'ɵy>$}*;TA=8?@p0#ݼx>';ҏ)t=0tVck1b\ bpN ~F9P=L P1{jD &= ۨ|A03x[ɮų%MbsơŲr耈Ur%"y2U*>T )@zf̆ޟ{%^&;u t%vZ‹{V~nO[ 6gT>^oͥkc΢j9Gp>ntߥ=7}4tCuֶ 9 )mB:1w;{:nnzmDU6vgFV*yi6'O񁲺"% 6sN҇,>,Ü:UpXFT 4MTX&ZL^=t͎ٴ\@\N-7eq*wʪM8ImAأIXT xb VϞ~ >%jE<|Y8yg; ^hmx)0}q#fXTGwJvl7QwbQGy(pNO(T\_XwO FDjnc%O/VWsSFFF\sR?ʔ|{͉~,wlŬ߉ LΏ):݉|EZ9#(E?Sr0rW6 FB3323V0mԋ"ZRaD&m &EK9s$3 w)+VߨOFR+63qDtI/6g?{֬ )D ]Bg;.x ?mY'6N? f̛I5OvL4\[Sd*',~>|wҖw #fQA%PժܛUR>ZhLbnwU(~'}u$tu>: n9L*A$$j&Z̹JmJlKvɼ٣K]`q>mր.H*pԭΪU # S+ '3|eZ鼵h'4GRR: >-\,8C!A S6Ws[&3՚0=eʇe?xq\حl^z=`]|5 nj vw,/11+QtЯa't!Z$ #=Wwm؅Ɏz77l'22K3{M7*%sT.J*S>͛ ηh*KJwZ)i*2ST+שL$i$*2ё S鋢ާ\+N2v#΀;M+$R|柄l5L)jsDC`<|0-(]i%fz_f=ӿH\}3(L#h{I=-f2gaa¤rotڂi.>Djg )OPs ֠.YX"J=+*,|lULtԚБU7 pܪ>Ov#).u9L2=5u{xƊS_`G9hs*S]cBJFX!#-tv#Ƀz|[7f*=?Y&6}Yvzɰ;~WϬ Y,s~$+z/ DP2w[?Cv,WfFVwIB4~<'LtԽ,P%qOV;|G{1dg9K۝ ~?ʖDB̙[7Yjai&(9Zj35]b$ևQ8VX+a$y~AAf5o&gVǻ{vʬoBF b;kXc=CԾP`$ho$;u@oO筙q2-lmwH$k\P4TЖd 0ޯ'x2kD1N)Wh޼xēJ k eM݈E).:qTvLp?Fo3r>ü?ORWhW0D49%J!PvGao0LNm(gEW]AO&= qwYɫLJnSUa!eb^;;k\)r B#Y'Ux-SܙLa*|H

>,4]`1|&U"X91Y_H&l)ކk:M1!;f]ɚϐifjfh346slN\`$&^ֶ;tm{>΃]KOES tn `'NV{"@Y40eU4Wy>H\ݱn^w*N qzfU*""4yJqVsm*#(FPlPdS˫ f3*U31EZ(B#Kœ>vTp7Bn0ãt O(ࠎO1I^ާB=0-RR`z Ag➃^:H7[im/\#45ާ>U:=I-Z''Rk'RI-$<њOjOjÞاRȧGz1j_Q%{@FRU \InWhܩI M>SˢF%iCfZjuv2-Q+'eLƶLTG#_L}c5+5OYOLZ9u"f%VD5Ɠz(b%'eBf@(jGk N*LeH#<˟$!v$AI%Dv۞?y)Xc8O;2sGf2 d~4Ǫ]Px2e#4Y8CK*dq ~;G)I Zy"ƓZj2L gc.6)|5Ϊ'*J۾0@ا`1/"e)9[xO5q䝖F/2=̵qk*c>=\ߙϏ9]\`-ɶd?fU ̆}aF$՝_O \ZXɦzsB2;7*ØZfJsa2yp]ɉ-YsF]=3<'\Zjd7h nf?1T+4, -1\!FV"ߏGyW0<d1 L3$t_3S3g##F33! R3%x.3Tw3R'?x!Lj+5,/4ak,@6ahNCl<ـT?OHo3X>68p-f+9󼞹bp e/ 6AjƓx&"x=@br<څ9UIn pdVΪ'HK-rxd~?Ftlև^byhdنkCSfRK-}\ZjہOn-m%xRK-xƓWZjZjƓZjW?~߿qrG[7s#>/7s?,?qS79S侹u}dĿ: \'_[׸D\95L?asawrwYSwr?Gb}뺿yݩ%[~-%g Smssn)?KD~l<\8=e[_`G>37o4(ڏ}Ο-gd1l\og*X'W71"~?w>TN5S*߮73x7D>[Sѻw-Bƛ7Yvz_CCfzϖy?ҼnmT-M5E6&nlͿ;֖-l_C=?]ɟcoIsE>_:N_5Ac_̿ym焖r+8M1TableSummaryInformation(.DocumentSummaryInformation8CompObjj  4 @ LX`hpSVEUILITE U ZAGREBU9VEUJBezicIBezBezNormalIJBezicI1ezMicrosoft Word 9.0B@@p^ٺ@!ٺMj՜.+,D՜.+,D hp   Mefst SVEUILITE U ZAGREBU Title 8@ _PID_HLINKSA@jbjb  FMicrosoft Word Document MSWordDocWord.Document.89q      !"#$%&'()*+,-./012 i8@8 NormalCJ_HaJmH sH tH @`@ Heading 1$$@&a$5\mHsH:`: Heading 2$@&5\mHsH@`@ Heading 3$$@&a$5\mHsHF`F Heading 4$$@&a$56\]mHsHF`F Heading 6$$dh@&a$6]mHsH<A@< Default Paragraph Font4B`4 Body Text$a$mHsHNR`N Body Text Indent 2dh`mHsH.o. sourcedd[$\$DP`"D Body Text 2$dha$5\mHsHPC`2P Body Text Indent$dh`a$mHsHZQ`BZ Body Text 3*$$d&dNPa$mHsH&oQ& journalname0ob0 authorsdd[$\$oq volumeo pagesF*+,-./0123?@ABCD  !"#$%&'()*+,-./012DEF 01yz,fgRSwx ST67OPgh~DEde  " # M N ( ) H I { |   V W = > ? @ A H I q &&&'y*.1J2K2L2M224/8"9::::;=@ZEUIxKNOPRRRsWtWW0[]abvijjjk o o-osssssPtQtvtvvvvwwyyzz{{{||}}}=>bc݈ވ$a\Uhijkt %Tգ#7a][wx ַ׷طٷԸu̻ͻݻIL ^sB pN3y:uOIau%&/?Qcd}*+4Ke>1[{Qjt (@Wmn7Jp;z!"# =YZj7x 09^y1Kefrs&CVyz*+Cfg~%;<=+RSk H I    ; \ ] i        1 P Q b       wLM8Byz    %KLd #$% T"0##########$$$$$$ %-%I%Y%%%%&%&H&f&z&&&&&'$'%'''(((B(\(t(((((( )%)/) ++++,2,3,?,c,d,s,,,,,,,--0-R-S-\-----./00|1111111"2C2d222222222353Q3[3t3u3v3a4}4444445595K5a5688X9t9999999:':9:O:P:;;;BEQLT+]^bh lp'wAyЄ'ݘޘ|}%&45ݤ..Ϊګ"#1ܴgqŷԷշ@)۹:x ˾0οF> o-.BoS(p#Wx*<{ROAbTTW B[>cvAdRZj *5~6 ~\/Qk <  q B   0?@00000000.0.0.00000@0@0@(0@0D0D0@00000000000000000000000000000000000000000000000000000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 00/001010101010000000000000y0y00000000000S0S0x0x0x00000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000? 00 0000000000000000000000000000000000000000000000000000 000000000 0 0 000000000000000000 00000000000 00000 0 0 0 0 00 00 00000000000 0 0 0 0 00000000000000000000000Z0Z0000000000Z000000000000000:0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 0hҙp #IXY  0 nD:6 :o <"  uF/ 7*GISpY_xl`Bcmuʆ     !"vvvy zz !#[su :::::)3?D2DF0156yzfgRSwx SY67OPgh~DEde  " # M N w y ( ) H I V W { |   V W      ! ( * / < A H I ;=ABABAB&&A-B-A1B1A2B2J2M222::;;M<N<M>N>M?N?MFNFMHNHRRMRNRRRMUNUsWtWWWXXXXMZNZM[N[[[[[[[[[[[[[[[[[[[[[]] ]]]]"]#]%]&])]*]8]9]A]C]M^N^MbNbeeMhNhjjMmNm o ossPtQtvvwwyzMzNz{{||M|O|j|k|M}N}}}=>MNbcMN݈ވMNMNMNhkNOY[%MNZ\MN9<ΧѧҬլMO[xSV ַڷMN˻ͻMNde[]56uv^_%&?AQScd}*+46KMeg16mnuvtv (*@BWXln67!# =@YZ79QRWZ 9;]`FGHIz{|}03KMefrt|}~48=@VWyz(+CD^_dg~%';= +,RSkl  H I       : < \ ] g k             1 2 P Q b c             C D E F   _`abLM+.36BCxz    %&KLde #%%&O!P!Q!R!!!!!;"<"=">"i"j"r"s"##$$$$ %%%%(%-%0%}%%%&'&H&J&z&|&&&&&&&''''"'%'''( (((*(B(D(t(v((((((((( ) )%)()))*).)/)/*0* ++++++,,2,3,?,A,c,d,s,t,,,,,,,,,--/-1-R-S-\-]-----------(/)/*/+/7/8/o/p/q/r/~//001111111112!2#2C2D2d2f222222222222222335363Q3T3U3V3[3]3t3v3p4s4x4{4444444455565;5K5M5w7x788g9j9o9r999999999::&:):9:;:O:P:;;;;w?x?wDxDMFVFaFhFiFqFrF|F}FFFFFFFFFwHxHwIxIIIwOxOwPxPdReRVVwXxXw\x\wiximmvvwwxwwzxzw}x}wzwxwxwxwxݘޘwx|}%&45/9DJyqyR`ñ(=IO۲ 5?ijQWCKQYJTƷԷշwywx$&wxwx-lwxwxw|wywxwxSTwxfgJKZ[wxbc01wx  dhwywxtuuvIJwxwx{ | + ,   _ ` 0 1     01?@)3>D 2CF /1xz+,egnoQSvx R57NPfh}CEce  ! # L N ' ) G I z |   U W A G I p q &&&&''x*y*..11I2M22244.8/8!9"9::;;==@@YEZETIUIwKxKNNOOPPRRRRrWtWWW/[0[]]aabbuivijj kk o o,o-ossOtQtutvtvvwwyz{{{{||}}}}<>ac ܈ވ#$`a[\ TUgkst%STԣգ"#67`a\]Zx շڷӸԸtu˻ͻܻݻHIKL ]^rsAB opMN23xy9:tvNOHI`atu $&./>APSbd|)+36JMde=>06Z[z{PQijsv '*?BVXln67IJop:;yz # <?XZij69wx /08;]`xy03JMdfqtrs%&BCUVxz)+BCeg}~$':=*+QSjk  G I       : < [ ] h j             0 2 O Q a c           vwKM78ABxz   $%JLcd "%  S"T"/#0###$$$$$$$$$$ %%,%/%H%I%X%Y%%%%%%% &&$&'&G&J&e&f&y&|&&&&&&&&&''#'%'''''( ('(*(A(D([(\(s(v((((((((((( ) )$)().)/) ++++++,,1,3,>,?,b,d,r,s,,,,,,,,,--/-0-Q-S-[-\-------..//00{1|11111111112!2#2B2D2c2e2222222222222334363P3T3Z3]3s3v3`4a4|4}4444444455585;5J5M5`5a56688W9X9s9t999999999::&:):8:;:N:P:;;;;BBEE_FGPLQLTT*]+]]b^bhhl lpp&w'w@yAyτЄ&'ܘޘ{}$&35ܤݤ-.-.ͪΪ٫ګ57گܯacBDz|35Ʒӷշ?@()ڹ۹9:wx ʾ˾/0ͿοEF=> no--.ABlnoRS'(op"#VWw)*;<z{QRNO@AabSTSTVW ABZ[ =>bcuv@AcQRYZij )*45}~56~  }~[\./PQjk  ; <   p q A B     /1>@333333333333JBezicPC:\Documents and Settings\Korisnik\My Documents\magisterij\Mr (naslov+tekst).docS1 p>)c?=7}wEE^E`OJPJQJ^Jo(- ^`OJQJo(o   ^ `OJQJo(   ^ `OJQJo( xx^x`OJQJo(o HH^H`OJQJo( ^`OJQJo( ^`OJQJo(o ^`OJQJo(^`o(  ^ `. L ^ `L.xx^x`.HH^H`.L^`L.^`.^`.L^`L.88^8`OJPJQJ^Jo(- ^`OJQJo(o   ^ `OJQJo(   ^ `OJQJo( xx^x`OJQJo(o HH^H`OJQJo( ^`OJQJo( ^`OJQJo(o ^`OJQJo(=7S1 )c-R         4L        Z        @ HCC~+k 1  %&H&&&B(((,1d22449@Җ# # # ####'#2#9#]#c#z#|###########eeeeeeeeeeeeee  %%!%#%%%'%(/)/,-1v3v4w5w8w9wDwwwwwwwwwwpppp p pppp(@pppp*p6p@pRphpvppppp ppBpLpTpppppp@ppppppp@pppp@ppp,@pp$pl@p8p@pDp@pJp@pNp@pVp@p`p@pdpjplpp*p0p6p:p@php@pxp@pUnknownGz Times New Roman5Symbol3& z Arial?5 z Courier New;Wingdings"qhffMj!20A 2qSVEU ILI`TE U ZAGREBUJBezicJBezic