Naslov
Uloga molekule CD26 u razvoju kolitisa u miša
(Role of CD26 molecule in the colitis development in the mice)

Autori
Detel, Dijana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Medicinski fakultet

Mjesto
Rijeka

Datum
26.08

Godina
2009

Stranica
130

Mentor
Varljen, Jadranka

Ključne riječi
Dipeptidil-peptidaza IV (CD26/DPP IV); Molekula CD26; Pokusni model; Ulcerozni kolitis.
(Dipeptidyl peptidase IV (CD26/DPP IV); Experimental model; Molecule CD26; Ulcerative colitis)

Sažetak
Upalne bolesti crijeva su kompleksne, kronične, imunološki posredovane bolesti obilježene ponavljajućim upalnim procesima koji rezultiraju oštećenjem i gubitkom funkcije crijevne sluznice. Dosadašnja saznanja ukazuju na povezanost aktivacije imunološkog odgovora s promjenom aktivnosti i izražaja molekule CD26/DPP IV. Cilj istraživanja bio je ispitati je li i na koji način molekula CD26/DPP IV uključena u lokalne i sistemske mehanizme koji dovode do oštećenja sluznice i razvoja upalne bolesti crijeva u in vivo modelu kolitisa uspostavljenog u CD26 deficijentnom (CD26-/-) i divljem tipu miša (C57BL/6). Kako bi se ispitao utječe li nedostatak molekule CD26/DPP IV na razvoj kolitisa, pratio se razvoj, intenzitet i cijeljenje kolitisa u različitim vremenskim intervalima temeljem kliničkih i histoloških parametara na lokalnoj i sistemskoj razini u obje skupine miševa. Budući da je oštećenje sluznice posredovano imunološkom reakcijom, pratio se izražaj specifičnih antigena na lokalnoj razini te fenotipske promjene limfatičnih stanica slezene, jetre i periferne krvi tijekom razvoja i cijeljenja kolitisa. Određene su dinamičke promjene aktivnosti CD26/DPP IV tijekom razvoja kolitisa u serumu te sluznici tankog i debelog crijeva C57BL/6 miševa. Materijal i metode: Istraživanje je provedeno na dvjema vrstama laboratorijskih miševa: divlji tip miša soja C57BL/6, te miševi kojima je inaktiviran gen za molekulu CD26 (C57BL/6 Jbom-ob, CD26-/-), istog spola i dobi, starosti od 10 do 12 tjedana. Model induciranog kolitisa izazvan je u obje ispitivane skupine miševa primjenom 3% (w/v) otopine natrijevog dekstran-sulfata (DSS) per os kroz sedam dana. Razvoj kolitisa i procjena intenziteta bolesti u svakoj ispitivanoj skupini životinja pratio se temeljem kliničkih simptoma i izračuna indeksa aktivnosti bolesti. Stupanj oštećenja sluznice tankog i debelog crijeva pratio se određivanjem mikroskopskog indeksa oštećenja te histomorfometrijskom analizom u različitim vremenskim intervalima tijekom razvoja i cijeljenja kolitisa na parafinskim tkivnim rezovima. Imunofenotipizacija limfatičkih stanica izvedena je metodom izravne imunofluorescencije i analizom protočnim citometrom. Promjene izražaja specifičnih staničnih biljega utvrđene su imunohistokemijski na parafinskim i/ili smrznutim tkivnim rezovima. Aktivnost serumske i intestinalne CD26/DPP IV u C57BL/6 miševa određena je spektrofotometrijski. Rezultati: Razvoj kolitisa u obje ispitivane skupine miševa rezultirao je statistički značajnim padom tjelesne mase, promjenom dužine i mase debelog crijeva te porastom mase slezene i indeksa aktivnosti bolesti. U skupini C57BL/6 miševa maksimalni pad tjelesne mase zabilježen je sedmog dana i praćen je statistički značajnim skraćenjem debelog crijeva i porastom mase slezene. Oporavak započinje devetog, a završava petnaestog dana. U skupini CD26-/- miševa, maksimalni pad tjelesne mase zabilježen je devetog dana, a statistički značajno skraćenje debelog crijeva sedmog dana. Oporavak započinje desetog, a završava dvadesetog dana. Razvoj kolitisa u obje ispitivane skupine miševa praćen je histomorfometrijskim promjenama sluznice debelog crijeva odnosno statistički značajnim smanjenjem broja i dubine te povećanjem širine kripti. U usporedbi s C57BL/6 miševima, CD26-/- miševi imaju snižen udio CD4+ stanica u slezeni i NK stanica u jetri te stastistički značajno veći udio CD8+ stanica u jetri. Tijekom razvoja kolitisa dolazi do akumulacije NK stanica u slezeni i jetri CD26-/- miševa te NKT stanica u slezeni i jetri obje ispitivane skupine miševa. U akutnoj fazi kolitisa zabilježen je porast udjela CD8+ stanica u slezeni i jetri CD26-/- miševa te CD4+ stanica u jetri obje ispitivane skupine miševa. Fenotipske promjene su popraćene porastom izražaja CD4+, CD8+ stanica i makrofaga u akutnoj fazi kolitisa u sluznici tankog i debelog crijeva obje ispitivane skupine miševa. Zaključak: Temeljem utvrđenih statistički značajnih promjena kliničkih i histoloških parametara na lokalnoj i sistemskoj razini, model DSS induciranog kolitisa uspostavljen je u obje ispitivane skupine miševa. Tijekom razvoja i cijeljenja kolitisa nedostatak molekule CD26 utjecao je na vremenski tijek, ali ne i na intenzitet kolitisa. Utvrđene sistemske i lokalne imunološke promjene ukazuju da izražaj i proteolitička aktivnost molekule CD26/DPP IV nemaju presudnu i jedinstvenu ulogu u procesu aktivacije i modulacije imunološkog odgovora tijekom razvoja i cijeljenja kolitisa u miša.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA