Naslov
Nekatalitičke proteinske domene eukariotskih seril- tRNA-sintetaza
(Non-catalytic protein domains of eukaryotic seryl- tRNA synthetases)

Autori
Močibob, Marko

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
20.01

Godina
2010

Stranica
111+XV

Mentor
Weygand-Đurašević, Ivana

Ključne riječi
peroksin ; produžeci aminoacil-tRNA-sintetaza ; seril-tRNA-sintetaza ; stabilnost seril-tRNA-sintetaza ; tRNA
(aaRS extensions ; peroxin ; seryl-tRNA synthetase ; SerRS stability ; tRNA)

Sažetak
Seril-tRNA-sintetaze (SerRS) su enzimi koji kataliziraju sintezu seril-tRNA(Ser) za potrebe biosinteze proteina na ribosomu. Zbog svoje nezamjenjive uloge u biosintezi proteina, prisutni su u svim živim stanicama, u organizmima iz sve tri domene života i evolucijski su dobro očuvani. Osobitost seril-tRNA-sintetaza eukariota jest bazični polipeptidni produžetak na C-kraju katalitičke domene, kojeg bakterijski homolozi ne posjeduju. Priređen je niz mutiranih oblika (deletanata i mutanata) seril-tRNA-sintetaze kukuruza i kvasca u području produžetka na C-kraju svojstvenog eukariotskim SerRS, u svrhu istraživanja njegove uloge. Istražena su svojstva krnjih i mutiranih enzima kombinacijom metoda in vitro i in vivo. Uklanjanje cjelokupnog polipeptidnog produžetka narušava stabilnost SerRS kvasca i kukuruza. Mutagenezom i mjerenjem termalne stabilnosti krnjih i kimernih proteina mapirana je proksimalna regija produžetka, koja spaja produžetak s katalitičkom domenom, kao neophodna za stabilnost eukariotskih SerRS. Određivanje kinetičkih parametara krnjih enzima pokazalo je da produžeci ne utječu na katalitička svojstva krnjih enzima, te da produžeci ne predstavljaju pomoćne vezne domene za tRNA. Krnji proteini kvaščeve i kukuruzne SerRS potpuno su funkcionalni in vivo i komplementiraju soj kvasca inaktiviranog gena za SerRS. Produžetak kvaščeve SerRS neophodan je za nastajanje kompleksa s peroksinom Pex21p. Stoga su dizajnirani kimerni proteini SerRS kukuruza s produžetkom kvaščeve SerRS. Kimerni proteini nisu se vezali na imobilizirani Pex21p in vitro, niti je sustavom dvaju hibrida u kvascu detektirana interakcija in vivo, što sugerira da su ostale regije kvaščeve SerRS uključene u interakciju s Pex21p. Proksimalni dio produžetka neophodan je za stabilnost enzima, dok je ostatak slobodan za ostale uloge, kao ostvarivanje proteinskih interakcija.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija

POVEZANOST RADA