Naslov
Optimiranje postupka transfekcije za metodu visokog probira pri virusnoj infekciji
(Optimisation of transfection protocol for the high-throughput screening of viral infection)

Autori
Roudnicky, Filip

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
01.06

Godina
2009

Stranica
73

Mentor
Maravić Vlahoviček, Gordana

Neposredni voditelj
Greber, Urs

Ključne riječi
transfekcija; metoda visokog probira; rinovirusi; dinamin; rab5
(transfection; high throughput screening; rhinoviruses; dynamin; rab5)

Sažetak
Virusi su savršeno prilagođeni patogeni koji ovise u potpunosti o domaćinskoj stanici. Jedini način na koji možemo shvatiti kako virusi iskorištavaju različite stanične procese jest da opišemo stanične puteve prijenosa signala i fiziološke procese koji se odvijaju tokom virusne infekcije, a o tome se još uvijek malo zna. Da bismo proširili spoznaje u tom području potreban je novi pristup u istraživanju, takozvani sistemski pristup, koji uključuje istovremenu analizu velikog broja uzoraka. Stoga je cilj rada bio optimirati protokol transfekcije stanične linije HeLa Ohio za metodu visokog probira koja koristi mikrotitarske ploče s 96 bunarića i omogućava brzo ispitivanje velikog broja parametara staničnih procesa tokom virusne infekcije. Pri optimiranju metode vektor pEGFP-C1 koji kodira zeleni fluorescentni protein unošen je u stanicu „ reverznom“ transfekcijom koja se pokazala puno jednostavnijom, bržom i manje toksičnom za stanice u odnosu na „ klasičnu“ transfekciju. Postupak transfekcije je optimiran korištenjem nekoliko različitih transfekcijskih reagensa od kojih se najučinkovitijim pokazao Turbofect. Nakon ekspresije zelenog fluorescentnog proteina stanice su inficirane ljudskim rinovirusom 14. Za promatranje stanica u bunarima korišten je potpuno automatizirani epifluorescentni mikroskop koji istovremeno daje informaciju o brojnim fenotipovima. Valjanost metode je potvrđena proučavanjem poznate uloge dinamina u infekciji s ljudskim rinovirusom 14. Nakon toga metoda je primijenjena na ispitivanje uloge proteina rab5 u infekciji ljudskim rinovirusom 14. Uočeno je da rab5 ima ulogu pri infekciji i stoga je zaključeno da virus ulazi u rane endosome.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA