Pregled bibliografske jedinice broj: 401783
Mutageneza in vitro po Kunkelu
Mutageneza in vitro po Kunkelu // Metode u molekularnoj bilogiji / Ambriović Ristov, Andreja (ur.).
Zagreb: Institut Ruđer Bošković, 2007. str. 447-449
CROSBI ID: 401783 Za ispravke kontaktirajte CROSBI podršku putem web obrasca
Naslov
Mutageneza in vitro po Kunkelu
(In vitro mutagenesis using Kunkel's approach)
Autori
Svetec, Ivan-Krešimir ; Zgaga, Zoran
Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Poglavlja u knjigama, stručni
Knjiga
Metode u molekularnoj bilogiji
Urednik/ci
Ambriović Ristov, Andreja
Izdavač
Institut Ruđer Bošković
Grad
Zagreb
Godina
2007
Raspon stranica
447-449
ISBN
978-953-6690-72-5
Ključne riječi
in vitro mutageneza, Kunkel
(in vitro mutagenesis, Kunkel)
Sažetak
Ova metoda koristi se za uvođenje ciljane mutacije, odnosno promjene redoslijeda nukleotida u plazmidu ili u kloniranom odsječku DNA, a može se podijeliti u tri koraka. Najprije plazmid u koji se želi uvesti mutacija treba izdvojiti u jednolančanom obliku i to iz bakterije E. coli (dut- ung-). Navedeni genotip za posljedicu ima gubitak dUTPazne i uracil-deglikozidazne aktivnosti pa izdvojena plazmidna DNA osim adenina sadrži i uracil. Drugi korak obuhvaća in vitro sintezu komplementarnog lanca u prisutnosti uobičajenih deoksinukleotida pri čemu se kao početnica koristi oligonukleotid koji sadrži odgovarajuću mutaciju. U trećem koraku, ovako in vitro sintetizirana heterodupleksna DNA koristi se za transformaciju bakterije E. coli (dut+ ung+) te kao posljedica uracil deglikozidazne aktivnosti nastupa razgradnja lanca koji sadrži uracil i resinteza prema lancu koji sadrži željenu mutaciju.
Izvorni jezik
Hrvatski
Znanstvena područja
Biotehnologija
POVEZANOST RADA
Projekti:
058-0580477-2258 - Palindromi u genomima i mehanizmi zamjene gena u kvasca (Krešimir Svetec, Ivan, MZOS ) ( CroRIS)
Ustanove:
Prehrambeno-biotehnološki fakultet, Zagreb
