Naslov
Utjecaj mutacija na dodirnoj površini podjedinica na kinetičke i dinamičke karakteristike alkalne fosfataze kod E. coli
(Influence of mutations at the subunit interface on kinetic and dynamic properties of alkaline phosphatise from E. coli)

Autori
Orhanović, Stjepan ; Šprung, Matilda ; Bučević-Popović, Viljemka ; Pavela-Vrančić, Maja

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni

Izvornik
Znanstveni simpozij 50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj / Zahradka, Ksenija ; Plohl, Miroslav ; Ambriović-Ristov, Andreja - Zagreb : Institut Ruđer Bošković, 2008, 39-39

ISBN
978-953-6690-78-7

Skup
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 20.11.2008. - 21.11.2008

Vrsta sudjelovanja
Poster

Vrsta recenzije
Nije recenziran

Ključne riječi
alkalna fosfataza; kinetika
(alkaline phosphatase; kinetics)

Sažetak
Alkalna fosfataza (AP, E.C. 3.1.3.1) je nespecifična fosfomonoesteraza koja katalizira hidrolizu velikog broja fosfomonoestera. AP pokazuje odstupanja od Michaleis-Menten kinetike koja se mogu objasniti modelom dimernog enzima s nejednakim podjedinicama. Predloženi model opisuje mehanizam hidrolize supstrata uslijed konformacijskih promjena na dodirnoj površini podjedinica. Značaj dodirne površine podjedinica i β -nabrane ploče koja se proteže ispod aktivnog mjesta do površine podjedinice, ispitana je metodom usmjerene mutageneze kojom su dobiveni mutantni enzimi s jednom (T81A), odnosno dvije (T81A/Q83L) mutacije. Mutirane aminokiseline Thr-81 i Gln-83 smještene su u β -nabranoj ploči koja se nalazi na dodirnoj površini između susjednih podjedinica. Mutirani enzimi su pročišćeni i uspoređeni sa divljim tipom AP. Analizirani su kinetički parametari te su ispitana dinamička svojstva enzima mjerenjem fosforescencije pri sobnoj temperaturi. Kinetičke karakteristike ispitivane su u 1 M Tris/HCl, pH 8, te u 0, 35 M 2A2M1P, pH 10, 5 puferu. Mutacije na dodirnoj površini podjedinica, utjecale su na strukturnu stabilnost proteina i na njegove kinetičke karakteristike, ukazujući na važnost interakcije dodirnih površina na katalitički mehanizam.

Izvorni jezik
Hrvatski, engleski

Znanstvena područja
Kemija

POVEZANOST RADA