Naslov
Kompleks aminoacil-tRNA-sintetaza u metanogenim arhejama
(Aminoacyl-tRNA synthetase complex in methanogenic archaea)

Autori
Godinić Mikulčić, Vlatka ; Jarić, Jelena ; Ibba, Michael, Weygand-Đurašević Ivana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni

Izvornik
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj / Zahradka, Ksenija ; Plohl, Miroslav ; Ambriović-Ristov, Andreja - Zagreb : Institut Ruđer Bošković, 2008, 35-35

ISBN
978-953-6690-78-7

Skup
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 20.11.2008. - 21.11.2008

Vrsta sudjelovanja
Poster

Vrsta recenzije
Nije recenziran

Ključne riječi
seril-tRNA-sintetaza; multi-sintetazni kompleksi; sustav dvaju hibrida; protein-protein interakcije
(seryl-tRNA synthetase; multi-synthetase complexes; yeast two-hybrid; protein-protein interactions)

Sažetak
Neke od aminoacil-tRNA-sintetaza organizirane su u složene multi-sintetazne komplekse. Budući da su ovi enzimi uključeni u niz dodatnih funkcija u stanici osim prijenosa genetičke informacije, izuzetno je važno pronaći poveznice između aminoacil-tRNA-sintetaza i ostalih staničnih proteina. Osobit izazov bio je pronalazak proteinskih partnera seril-tRNA-sintetaze (SerRS) u metanogenoj anaerobnoj arheji Methanothermobacter thermautotrophicus pomoću sustava dvaju hibrida u kvascu. Od identificiranih proteinskih pozitiva, pobliže smo istražili neobičnu interakciju s arginil-tRNA-sintetazom (ArgRS). Asocijacija proteina potvrđena je nativnom elektroforezom u gelu te gel-filtracijom. Ustanovljeno je da se kompleks sastoji od homodimera SerRS i monomera ArgRS. Upotrebom tehnike SPR (engl. Surface Plasmon Resonance) određena je konstanta disocijacije koja je u skladu s afinitetima u drugim arhealnim multi-sintetaznim kompleksima. Interakcija dvaju proteina biološki je značajna jer nakon dodatka ArgRS seril-tRNA-sintetazi dolazi do stimulacije serilacije. Dosad nije pronađen proteinski partner arhealnih SerRS i općenito se SerRS ne nalazi ni u jednom dosad poznatom multi-sintetaznom kompleksu. Donedavno se mislilo da se asocijacija sinetaza uglavnom zbiva u eukariotima, međutim interakcija SerRS i ArgRS u arhejama ukazuje na potrebu za udruživanjem sintetaza u veće komplekse i u arhejama kako bi se pospješila translacija i usmjereni prijenos supstrata.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija

Napomena
Several aminoacyl-tRNA synthetases (aaRS) are found in multi-synthetase complexes (MSC) so identification of the networks that connect possible regulatory non-synthetase proteins to synthetases or synthetases to each other and to the cellular processes they affect is a critical need. We now attempted to delineate protein partners of seryl-tRNA synthetase (SerRS) in methanogenic archaea with yeast two-hybrid screen that facilitates construction of protein– protein linkage maps. We found that the M. thermautrophicus arginyl-tRNA synthetase (ArgRS) interacts directly with SerRS ; native electrophoretic mobility shift assays and gel-filtration confirmed the protein association in vitro with probable stoichiometry of one dimeric SerRS per ArgRS monomer. Further, we characterized the binding affinity of SerRS to ArgRS by surface plasmon resonance and dissociation constant was defined. Moreover, interaction of SerRS with ArgRS improves the activity of SerRS two-fold while the presence of SerRS did not lead to significant enhancement of ArgRS activity. Interestingly, SerRS has never been found associated to another synthetase or within the MSC. This type of structural organization was though to be restricted to eukaryotic species but archaeal requirements for aaRS associations are becoming more evident, as these proteins can function together in many important biological contexts such as translation and substrate channeling.

POVEZANOST RADA