Naslov
Korištenje adenovirusnih vektora u istraživanju ciklusa tumorskih stanica
(Cell cycle analysis of tumor cells using adenoviral vectors)

Autori
Pranjić, Blanka

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
07.11

Godina
2008

Stranica
63

Mentor
Kralj, Marijeta

Neposredni voditelj
Kralj, Marijeta

Ključne riječi
stanični ciklus ; gen p21 ; adenovirus ; rak
(cell cycle ; p21 gene ; adenovirus ; cancer)

Sažetak
Poremećaj regulacije staničnog ciklusa uzrokuje nekontroliranu proliferaciju stanica te je jedan od glavnih uzroka pojave raka. Postoji niz gena koji reguliraju stanični ciklus i čuvaju stanice od zloćudne preobrazbe, među kojima je gen p21WAF1/CIP1 čiji proteinski produkt je inhibitor kompleksa ciklin ovisne kinaze (cdk) i ciklina. Njegova povećana ekspresija u tumorskim stanicama predstavlja potencijalno oružje u genskom liječenju raka, međutim istraživanje njegove uloge ukazuje na niz kontradiktorinih rezultata zbog kojih je nužno dodatno rasvijetliti njegovu ulogu u tumorskim stanicama. U ovom je radu praćen utjecaj povećane ekspresije gena p21 unošenjem njegove cDNA replikacijski nesposobnim adenovirusnim vektorima (Ad5-p21) u tumorske stanice karcinoma debelog crijeva SW480 i SW620, koje potječu od istog pacijenta, ali imaju različit stupanj zloćudne preobrazbe. Kao kontrolni vektor je korišten adenovirus s ugrađenim genom dojavljivačem (Ad5-β gal). Oba vektora umnožena su visokoj koncentraciji u komplementirajućim stanicama, izolirana i pročišćena. Virusni titar je izmjeren određivanjem koncentracije ukupnih, ali i infektivnih virusnih čestica. Djelotvornost transdukcije stanica karcinoma debelog crijeva SW620, SW480, a i HCT116 adenovirusnim vektorom Ad5-β -gal određena je bojenjem na β -galaktozidaznu aktivnost. Uočena je slabija djelotvornost transdukcije SW620 stanica putem Ad5-β -gal u odnosu na SW480 i HCT116 stanice. Također je primijećeno toksično djelovanje samog vektora na tumorske stanice, poglavito na stanice SW620. Utjecaj Ad5-p21 i Ad5-β gal na stanični ciklus SW620 i SW480 stanica praćen je metodom protočne citometrije. Povećana ekspresija gena p21 izaziva zastoj u G1 fazi ciklusa stanica SW480. Njegova je uloga u stanicama SW620 upitna zbog snažnog utjecaja samog adenovirusnog vektora na stanični ciklus, budući da je uočen zastoj staničnog ciklusa u G2 fazi nakon zaražavanja stanica s kontrolnim vektorom Ad5-β gal. Kako i sami adenovirusni vektori mogu utjecati na stanični ciklus, te uzrokovati lažne rezultate, potreban je izuzetan oprez kod njihovog korištenja u istraživanju gena koji reguliraju stanični ciklus.

Izvorni jezik
Engleski

Znanstvena područja
Biologija, Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA