Naslov
Gensko liječenje tumora pokretanjem mehanizma samoubojstva stanice genom za timidin kinazu
(Tumor gene therapy by using the mechanism of cell suicide mediated by thymidine kinese gene)

Autori
Slade, Neda

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Prirodoslovno-matematički

Mjesto
Zagreb

Datum
24.05

Godina
1999

Stranica
88

Mentor
Pavelić, Jasminka

Ključne riječi
gensko liječenje; timidin kinaza iz virusa Herpes simplex; ganciklovir; melanom miša; bystander učinak
(gene therapy; Herpes simplex virus thymidine kinase; ganciclovir; murine melanoma; bystander effect)

Sažetak
Jedan od pristupa genskom liječenju tumora zasniva se na upotrebi gena za timidin kinazu iz virusa Herpes simplex (HSVtk), koji u kombinaciji s protuherpesnim lijekom ganciklovirom (GCV) izaziva samoubojstvo stanica. GCV nije toksičan za normalne, nezaražene stanice. međutim, stanice tumora zaražene genom HSVtk postaju osjetljive na GCV jer enzim timidin kinaza fosforilira GCS tako da se blokira sinteza DNA i stanica umire. Mi smo gen za HSVtk unijeli u stanice koristeći retroviralni prijenosnik pBabePuro-HSVtk. Njime smo zarazili stanice melanoma miša B16BL6 i fibroblaste miša. Ispitivanjem osjetljivosti na GCV našli smo da su zaražene stanice melanoma miša B16BL6tk+ znatno osjetljivije na GCV nego nezaražene stanice B16BL6tk-. Nasuprot tomu, zaraženi fibroblasti miša nisu bili osjetljiviji na GCV od stanica divljeg tipa. Analizom RT-PCR našli smo da je gen HSVtk eksprimiran u stanicama B16BL6tk+, ali nije u zaraženim fibroblastima miša. Pronašli smo da u stanicama B16BL6tk+ tretiranim sa GCV u koncentraciji od 20 microM tijekom 4 dana dolazi do apoptoze. Stanicama B16BL6tk- i B16BL6tk+ izazvali smo rast tumora u singeničnim miševima C57BL6 te primjenjivali GCV (50 mg/kg/dvaput na dan) tijekom 14 dana. Tumori izazvani stanicama B16BL6tk+ smanjivali su se, potpuno nestali i nisu se pojavili niti nakon 5 mjeseci. Nadalje, ispitivali smo postojanje "bystander" učinka, obilježje sustava HSVtk/GCV genskog liječenja kojim se djelovanjem GCV mogu usmrtiti i susjedne, nezaražene stanice. Ustanovili smo da je "bystander" učinak in vitro bio vrlo slabo izražen. "Bystander" učinak in vivo ispitivali smo izazivajući tumore u životinjama mješavinama stanica B16BL6tk+ i B16BL6tk- u različitim omjerima. Našli smo da su tumori potpuno nestali kada su bili izazvani mješavinom stanica u kojoj je većina stanica bila B16Bl6tk+. Nadalje, ispitivali smo i postojanje "bystander" učinka na daljinu i našli da ne dolazi do povlačenja tumora izazvanog stanicama B16Bl6tk- kada se nalazi daleko od tumora B16Bl6tk+. Nedostatak snažnijeg "bystander" učinka zahtijeva daljnja ispitivanja i moguću primjenu kombiniranoga genskog liječenja.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA