Naslov
Ekspresija i pročišćavanje metil-transferaze Sgm
(Expression and purification of methyltransferase Sgm)

Autori
Babić, Fedora

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
11.07

Godina
2007

Stranica
80

Mentor
Maravić Vlahoviček, Gordana

Ključne riječi
aminoglikozidni antibiotici; bakterijska rezistencija; metil-transferaza Sgm
(amioglycoside antibiotics; bacterial resistance; methyltransferase Sgm)

Sažetak
Aminoglikozidni antibiotici ubrajaju se među najčešće korištene antibiotike u kliničkoj praksi. Visok stupanj rezistencije na aminoglikozidne antibiotike u bakterija uzrokuju metilaze iz porodice Arm (Aminoglycoside resistance methyltransferase) koje metiliraju specifični nukleotida u 16S rRNA. Ovi su enzimi donedavno bili prisutni jedino kod bakterija koje proizvode aminoglikozidne antibiotike i na taj se način štite od štetnog djelovanja vlastitih metabolita, no u posljednje se vrijeme enzimi Arm sve češće nalaze i u patogenih bakterija te iznimno brzo šire horizontalnim prijenosom. Predmet istraživanja je metil-transferaza Sgm iz bakterije Micromonospora zionensis koja proizvodi antibiotik sisomicin. Cilj rada bio je optimirati heterolognu ekspresiju u bakteriji Escherichia coli i uspostaviti metodu pročišćavanja proteina Sgm. Bakterijske stanice E. coli HMS174(DE3) transformirane su ekspresijskim vektorom pET-25b(+) s kloniranim genom sgm i ekspresija je optimirana na 30 C uz koekspresiju šaperona za dobivanje veće količine topljivog proteina. Kombiniranjem afinitetne kromatografije na Ni-NTA nosaču te kromatografije na kationskom izmjenjivaču HiTrapSP optimiran je postupak pročišćavanja te je enzim Sgm pročišćen iz bakterijskog lizata. Pročišćena metil-transferaza Sgm koristit će se u budućim studijama mehanizma rezistencije na aminoglikozidne antibiotike.

Izvorni jezik
Engleski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA