Naslov
Usporedba osjetljivosti ugnježđene PCR i kvantitativne PCR u određivanju Bcr-Abl p210 prijepisa kronične mijeloične leukemije
(Comparison of sensitivity of nested PCR and quantitative PCR in Bcr-Abl p210 transcript detection in chronic myelogenous leukemia)

Autori
Marušić Vrsalović, Maruška ; Kušec, Rajko ; Pejša, Vlatko ; Romić, Željko

Izvornik
Biochemia medica (1330-0962) 17 (2007), 1; 109-115

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Radovi u časopisima, članak, znanstveni

Ključne riječi
nPCR ; qPCR ; osjetljivost ; otkrivanje p210
(nPCR ; qPCR ; sensitivity ; p210 detection)

Sažetak
Uvod: Za otkrivanje minimalne ostatne boleti u bolesnika s kroničnom mijeloičnom leuke mijom (KML) koji su postigli potpunu kliničku remisiju i potpun citogenetski odgovor može se primi je niti ugnježđena PCR (en gl. nested PCR, nPCR) i kvantitativna PCR u stvarnom vremenu (engl. quantitative real-time PCR, qPCR). Cilj liječenja je postizanje molekularne remisije, pa postizanje visoke osjetljivosti molekularne pretrage ima presudnu ulogu i kliničku primjenu. Usporedili smo razinu osjetljivosti nPCR i qPCR u otkrivanju BCR-ABL p210 prijepisa u modelu razrjeđenja Bcr/Abl-pozitivnih stanica. Materijali i metode: Za određivanje ra zine osjetljivosti načinjena su serijska razrjeđenja stanične linije K562 (Bcr-Abl pozitivne) sa staničnom linijom NB4 (Bcr-Abl negativnom) (raspon razrjeđenja pozitivnih stanica: 10-3-10-7). Izolirani uzorci RNA prepisani su u cDNA i testirani na p210 prijepis pomoću nPCR i qPCR. Objema metodama također su ispitani uzorci koštane srži i periferne krvi dvoje bolesnika s KML na terapiji imatinib-mesilatom. Rezultati: U testu staničnog razrjeđenja nPCR je pokazala osjetljivost za otkrivanje Bcr-Abl pozitivnih stanica od 10-5, dok je qPCR pokazala osjetljivost od 10-6. Obje su metode otkrile p210 prijepise u uzorcima koštane srži bolesnika s KML. Međutim, qPCR je uz to otkrila prijepise i u uzorcima periferne krvi, no uz nižu razinu prijepisa u usporedbi s uzorcima koštane srži. Zaključak: Iako se često navodi kako je nPCR za otprilike 1 log osjetljivija od qPCR, u našem pokusu s razrjeđenjem na biljeg pozitivne stanične linije K562 dokumentirali smo višu osjetljivost za standardiziranu metodu qPCR, koja je razvijena za potrebe Europskog programa za borbu protiv karcinoma.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kliničke medicinske znanosti

POVEZANOST RADA