Naslov
Aktivacija fosfolipaze C u jezgrama stanica leukemijske linije HL-60 tijekom staničnog ciklusa
(Activation of phospholipase C in nuclei of HL-60 leukemia cells during cell cycle)

Autori
Lukinović-Škudar, Vesna

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Medicinski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
15.12

Godina
2005

Stranica
111

Mentor
Višnjić, Dora

Ključne riječi
fosfolipaza C; jezgra; HL-60; stanični ciklus
(phospholipase C; nuclei; HL-60; cell cycle)

Sažetak
U ovome radu istražena je aktivnost jezgrine fosfolipaze C koja je specifična za fosfatidil- inozitol (PI-PLC)u stanicama HL-60 tijekom prolaska kroz stanični ciklus. Stanice HL-60 su zakočene u G2/M-fazi s pomoću nokodazola i raspršene u svježem mediju kao stanice koje sinkronizirano prolaze kroz ciklus ili su gladovale u mediju bez seruma tijekom 24 sata te potom potaknute s pomoću seruma. Zamijećena su dva povećanja aktivnosti PI-PLC u jezgri ; rano povećanje koje je najveće 60 minuta nakon prestanka nokodazolskog kočenja i kasno povećanje nakon 8, 5 sati. Imunoprecipitacijski pokusi su pokazali da je povećanje aktivnosti nastalo zbog aktivacije izoforme PI-PLC-beta. Analiza tehnikom Western blot pokazala je da nema promjene u količini PI-PLC-beta1a i PI- PLC-beta1b u jezgrama stanica HL-60 koje su izolirane 1 i 8, 5 sati nakon prestanka kočenja. Međutim, zamijećena je fosforilacija PI-PLC-beta1b na serinskom ostatku u jezgrama stanica HL-60, a nazočnost inhibitora MEK PD 98059 u potpunosti je spriječila serinsku fosforilaciju, kao i povećanje aktivnosti PI- PLC u jezgri in vitro. U stanicama koje su gladovale, dodatak seruma je potaknuo rano (30 minuta)i kasno (11 sati) povećanje aktivnosti jezgrine PI-PLC koje se zakočilo dodatkom PD 98059. Nazočnost inhibitora PI-PLC spriječila je napredovanje stanica HL-60 koje su prethodno sinkronizirane s pomoću nokodazola ili stanica koje su potaknute s pomoću seruma kroz G1-fazu u S-fazu staničnog ciklusa i povećale udio stanica u G2/M-fazi. Ovi rezultati pokazuju dva vrška aktivacije jezgrine PI-PLC, koja je uzrokovana serinskom fosforilacijom osjetljivom na PD 98059, tijekom G2/M i kasne G1-faze u stanicama sinkroniziranim s pomoću nokodazola, te dva vrška tijekom G0/G1 i kasne G1-faze u stanicama potaknutim serumom. Učinci inhibitora ukazuju da su ta ciklička povećanja aktivnosti jezgrine PI-PLC nužna za napredovanje kroz stanični ciklus.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA