Naslov
Povezanost endonukleaza s popravkom oštećenja DNA u stanicama kineskog hrčka (CHO)
(Correlation between endonucleases and DNA damage repair in Chinese hamster cells (CHO))

Autori
Tomičić, Maja

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, magistarski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
28.05

Godina
1997

Stranica
100

Mentor
Franekić, Jasna

Ključne riječi
bazni ekscizijki popravak (BER); apurinske/apirimidinske endonukleaze; alkilirajući spojevi; oksidativni stres; CHO stanice
(base excision repair (BER; apurinic/apyrimidinic endonucleases; alkylating agents; oxidative stress; CHO cell)

Sažetak
Ključni enzimi koji otklanjaju mjesta bez dušićne baze, pri tome ne stvarajući pogrešku, su apurinske/apirimidinske (AP) endonukleaze. Da bi analizirali ulogu AP endonukleaza u zaštitnom mehanizmu stanica sisavaca na djelovanje spojeva koji oštećuju DNA, stanice ovarija kineskog hrčka (CHO9 i CHO9MPG) transficirane su eukariotskim ekspresijskim vektorom koji nosi humanu cDNA (APE), odnosno kvašćev gen (APN1) za AP endonukleazu. Oba fragmenta (APE i APN1) izolirana su metodom lančane reakcije plimeraze i klonirana u ekspresijski vektor. Učinci ekspresije u stabilnim transfektantima uspoređeni su obzirom na stanično preživljavanje te stvaranje kromosomskih aberacija. Povrh toga, humane HeLa stanice transficirane suv ektorom koji nosi APE cDNA antisense orijentacije u svrhu prigušivanja (deplecije) endogene endonukleazne aktivnsoti. Iako je APE cDNA u CHO stanicama bila zančajno eksprimirana na razini RNA i proteina, CHOAPE transfektanti nisu pokazali višu aktivnost u nuklearnim ekstraktima u usporedbi s roditeljskom kontrolnom linijom, niti su postali otpornijima na toksični i klastogeni učinak metil metansulfonata (MMS) te vodikovog peroksida (H2O2). Suprotno tome, CHO-APN1 transfektanti eksprimirali su višu AP endonukleaznu aktivnsoti in vitro i postali otpornijima na citotoksični učinak kao i induciranje kromosomskih oštećenja. HeLa stanice s depletiranom endonukleaznom aktivnošću bile su hipersenzitivne na djelovanje MMSa i H2O2 u odnosu na kontrolu. Dvostruki MPG/APE transfektanti bili su otporniji na djelovanje MMSa i N-metil-N'-nitro-N-nitrozoguanidina (MNNG-a) što se najvjerojatnije može pripisati promjeni alkiltransferazne aktivnosti (Mex- Mex+). Neki od dvostrukih MPG/APN1 transfektanata bili su otporniji na djelovanje MMS-a, ali ne i MNNG-a, zadržavši pri tome Mex- fenotip. Rezultati pokazujud a se kapacitet za popravak isijecanjem baza, i s tim u svezi odgovarajuća otpornost na mutagene u stabilno transficiranim stanicama sisavaca koje eksprimiraju APN1 gen kvasca, mogu povećati, a za AP mjesta dokazuju da su ne samo citotoksična, već i klastogena oštećenja.

Izvorni jezik
Hrvatski

POVEZANOST RADA