Naslov
Utjecaj različitih pripravaka kolagenaze na broj izoliranih Langerhansovih otočića, njihovu vijabilnost i funkcionalnost
(The effects of different collagenases on yield of islets of Langerhans, their viability and functionality)

Autori
Rumora, Lada

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, magistarski rad

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
26.02

Godina
1997

Stranica
116

Mentor
Juretić, Dubravka ; Hadžija, Mirko

Ključne riječi
kolagenaze; šećerna bolest; Langerhansovi otočići; apoptoza
(collagenases; diabetes mellitus; islets of Langerhans; apoptosis)

Sažetak
Jedan je od glavnih zahtijeva što ga postavlja transplantacija Langerhansovih otočića pronalaženje optimalnog sastava pripravka Kolagenaze koji bi omogućio postizanje jako selektivne izolacije otočića, tj. maksimalnu razgradnju egzokrinog tkiva i intersticijskog tkiva između otočića i egzokrinog tkiva, a da pritom Langerhansovi otočići ostanu intaktni. Ispitali smo utjecaj pet različitih pripravaka Kolagenaze na prinos čistih i vijabilnih Langerhansovih otočića. Sam enzim kolagenaza nije se pokazao dovoljnim za uspješnu izolaciju, pa smo zaključili da je nužno da pripravci kolagenaze sadrže i neke druge proteolitičke aktivnosti. Najbolje je postavljene zahtjeve ispunio pripravak Kolagenaze 1 (kolagenaza, klostripain, tripsin i neutralne proteaze), kojim se uspjelo izolirati čak oko 687 slobodnih otočića. Velik utjecaj ne samo na prinos, već i na vijabilnost izoliranih Langerhansovih otočića ima vrijeme inkubacije tkiva gušterače u zagrijanoj (na 37oC) otopini kolagenaze, pa se njegovim optimiranjem nastoji postići potrebna razgradnje egzokrinog tkiva bez utjecaja na otočiće. Kod svih je pripravaka nakon pravilne procjene završetka poželjne digestije vijabilnost bila gotovo 100%-tna, a uz pripravak Kolagenaze 1, koji se i glede prinosa pokazao najboljim, potrebno vrijeme inkubacije je bilo najkraće (oko 23 min.), što je također bitno prilikom transplantacije Langerhansovih otočića. Ispitivali smo i utjecaj hiperglikemičkih i hiperinzulinemičnih seruma pacijenata sa NIDDM na otočiće u kulturi. Nakon 48-satne inkubacije, morfološke promjene stanica otočića tretiranih sa 20% seruma (ali ne i kod nižih koncentracija) bile su identične onima opisanim za apoptotične stanice, pa vjerojatno proces apoptoze dovodi do smrti B stanica Langerhansovih otočića gušterače. Rani je biljeg tih događanja fragmentacija DNA.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti, Farmacija

POVEZANOST RADA