Naslov
Kloniranje i heterologna ekspresija mišjjih gena za interleukin-12 i interleukin-5
(Cloning and heterologous expression of mouse Interleukin-12 and Interleukin-5)

Autori
Novak, Ivana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
19.12

Godina
2001

Stranica
61

Mentor
Weygand Đurašević, Ivana

Neposredni voditelj
Antolović, Roberto

Ključne riječi
bakulovirusni ekspresijski sustav ; interleukin-5 ; interleukin-12 ; prokariotski ekspresijski sustav
(baculovirus expression system ; interleukin-5 ; interleukin-12 ; procaryotic expression system)

Sažetak
Ukupna RNA izolirana je iz mišjih hibridoma H13 stanica, metodom reverzne transkripcije sintetizirana je u komplementarnu DNA (cDNA). Pomnoću odgovarajućih početnica umnoženi su geni za mišji interleukin-12 i interleukin-5. Umnoženi geni za interleukin-5 i alfa podjedinicu interleukina-12 ugrađeni su u plazmidni vektor pET-16b, a gen za beta podjedinicu interleukina-12 ugrađen je u pFastBacDUAL, te su sekvencirani. Nakon sekvenciranja kodirajuća regija interleukina-12alfa ugrađena je u rekombinantniplazmidni vektor pFastBacDUAL/IL-12beta. Dobivenim rekombinantnim plazmidnim vektorima pFastBacDUAL/IL-12 transformirane su bakterijske stanice E.coli DH10Bac, koje uz vlastiti bakterijski kromosom sadrže i bakulovirusni vektor s mjestomprihvaćanja za transpozon TN7. Mjesno specifičnom transpozicijom ekspresijske kazete geni za interleukin 12-alfa i interleukin-12beta ugrađeni su u bakulovirusni vektor. Rekombinantnim bakulovirusnim vektorima transficiranu seu stanice Sf-9 u kojim dolazi do ekspresije interleukina 12. Interleukin-5 eksprimiran je u bakterijskim stanicama E. coli BL21(DE3 pLysS). Elektroforezom u gelu poliakrilamida i metodom Western blota dokazana je ekspresija proteina interleukina-12 i proteina interleukina-5.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA